一种二萜类化合物及其制备方法与应用_2

文档序号:9410003阅读:来源:国知局
油醚萃取物b、 乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d; C、 硅胶柱层析: 1) 将石油醚萃取物b上硅胶柱,装柱硅胶为100~200目,用量为萃取物b重量6~8倍 量;用体积比为25:1~0:1的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂梯度洗脱,收集梯度洗脱液、浓缩, 经TLC监测,合并相同的部分; 2) 将1)中以5:1配比的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液e上硅 胶柱,装柱硅胶为200~300目,用量为洗脱液e体积6~8倍量;用体积比15:1~0:1的石油 醚-乙酸乙酯有机溶剂梯度洗脱、浓缩,经TLC检测,合并相同的部分; D、 高效液相色谱分离:将C步骤2)中以2:1配比的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂 进行洗脱得到的洗脱液采用半制备高效液相色谱仪分离纯化,即得所述的二萜类化合 物 14-氧-对映-8 (9),15-海松二稀酸(14-〇x〇-ent_pimara-8 (9),15-diene_19-〇ic acid) 〇
[0016] A步骤所述的过滤是经80~120ym的滤纸进行过滤。
[0017]A步骤所述的减压浓缩是在50°C以下的温度条件下用旋转蒸发仪进行减压浓缩。
[0018] B步骤中所述的蒸去溶剂是采用旋转蒸发仪蒸去溶剂。
[0019]C步骤1)中所述的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂的体积配比为25:1、20:1、15:1、 10:1、7:1、5:1、2:1和 0:1〇
[0020]C步骤2 )中所述的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂的体积配比为15:1、10:1、7:1、5:1、 2:1 和 0:1 〇
[0021] D将C步骤中以2:1配比的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液 经半制备高效液相色谱,以体积配比为50:50的甲醇-水为流动相,流速2. 5ml/min,250 X10mm,5ym的C18为固定相,紫外检测器检测波长为210nm,每次进样50yL,收集 34~36min的色谱峰,多次累加后蒸干,得到所述的二萜类化合物14-氧-对映-8 (9),15-海 松二稀酸(14-〇x〇-ent_pimara-8(9),15-diene_19-〇icacid)。
[0022] 本发明的应用为所述的二萜类化合物在制备预防和/或治疗炎症药物中的应用。
[0023] 所述的二萜类化合物在制备预防和/或治疗急慢性炎症药物中的应用。
[0024] 下面以具体实施例对本发明做进一步说明: 实施例1 化合物的制备 材料来源:黑果土当归采于云南昆明,经云南民族大学民族医药学院杨青松副教授鉴 定为Arabiat/i/azeter?Hand. -Mazz,标本保存于云南民族大学民族医药学院标本馆。
[0025] 采用以下步骤: a. 粉碎:将10Kg黑果土当归根瞭干粉碎成粒径0.lcm大小的颗粒,得黑果土当归粉, 备用; b. 回流提取:将步骤a中制得的黑果土当归粉在65°C的温度下回流提取4次,每次2 小时,每次用60Kg80%浓度的乙醇提取,合并乙醇提取液,备用; c、 浓缩:将步骤b制得的乙醇提取液经80-120微米滤纸过滤并在50°C的温度下用旋 转蒸发仪进行减压浓缩,至比重为1. 2时,得浸膏1380g,备用; d、 萃取:将1380g浸膏混悬于4500ml水中,依次用4500ml石油醚、4500ml乙酸乙酯以 及4500ml正丁醇进行萃取,每种溶剂萃取5次,再用旋转蒸发仪减压浓缩,分别得石油醚、 乙酸乙酯以及正丁醇萃取物390g、112g、405g。
[0026]e.分离:将步骤d中制得的石油醚萃取物(150g)经100-200目硅胶柱色谱, 用体积比25:1、20:1、15 :1、10:1、7:1、5:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱得到 Fr. 1-Fr. 8 共 8 个组分,Fr. 1 为 6. 4g,Fr. 2 为 6. 5g,Fr. 3 为 3.lg,Fr. 4 为 16.lg,Fr. 5 为 3.28,?匕6为60.88,?匕7为2.88,?匕8为39.38,?匕6(10 8)经200-300 目硅胶柱色谱, 用体积比15:1、10:1、7:1、5:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱得到Fr. 6-1-Fr. 6-6 共 6 个组分,,Fr. 6-1 为 0.3g,Fr. 6-2 为 1.7g,Fr. 6-3 为 1.4g,Fr. 6-4 为 0.9g,Fr. 6-5 为2. 4g,Fr. 6-6为2. 2g,Fr. 6-5经半制备高效液相色谱仪制备,以体积配比为50:50的甲 醇-水为流动相,流速2. 5ml/min,250X10mm,5ym的C18为固定相,紫外检测器检测 波长为210nm,每次进样50yL,收集34~36min的色谱峰,多次累加后蒸干,制备得到目标 化合物 14-氧-对映-8(9),15-海松二稀酸(14-〇x〇-ent_pimara-8(9),15-diene_19-〇ic acid) (14mg) 〇
[0027] 实施例2化合物的制备 采用以下步骤: a. 粉碎:将10Kg黑果土当归根瞭干粉碎成粒径0.lcm大小的颗粒,得黑果土当归粉, 备用; b. 回流提取:将步骤a中制得的黑果土当归粉在67°C的温度下回流提取3次,每次2. 5 小时,每次用60Kg84%浓度的乙醇提取,合并乙醇提取液,备用; C、浓缩:将步骤b制得的乙醇提取液经80-120微米滤纸过滤并在50°C的温度下用旋 转蒸发仪进行减压浓缩,至比重为1. 2时,得浸膏1340g,备用; d、萃取:将1340g浸膏混悬于4000ml水中,依次用4000ml石油醚、4000ml乙酸乙酯以 及4000ml正丁醇进行萃取,每种溶剂萃取4次,再用旋转蒸发仪减压浓缩,分别得石油醚、 乙酸乙酯以及正丁醇萃取物372g、103g、396g。
[0028] e.分离:将步骤d中制得的石油醚萃取物(150g)经100-200目硅胶柱色谱, 用体积比25:1、20:1、15:1、10 :1、7:1、5:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱得到 Fr. 1-Fr. 8共8个组分,Fr. 1为6. 8g,Fr. 2为6. 9g,Fr. 3为3. 7g,Fr. 4为17. 3g,Fr. 5为 2. 8g,Fr. 6为58. 2g,Fr. 7为2. 9g,Fr. 8为37. 0g,Fr. 6 (10g)经200-300目硅胶柱色谱, 用体积比15:1、10:1、7:1、5:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱得到Fr. 6-1-Fr. 6-6 共6个组分,Fr. 6-1为0? 3g,Fr. 6-2为1. 8g,Fr. 6-3为1. 2g,Fr. 6-4为0? 7g,Fr. 6-5 为2.3g,Fr.6-6为2.4g,Fr. 6-5经半制备高效液相色谱仪制备,以体积配比为50:50的甲 醇-水为流动相,流速2.5ml/min,250XIOmm,5ym的C18为固定相,紫外检测器检测 波长为210nm,每次进样50yL,收集34~36min的色谱峰,多次累加后蒸干,制备得到目标 化合物 14-氧-对映-8(9),15-海松二稀酸(14-〇x〇-ent_pimara-8(9),15-diene_19-〇ic acid) (15mg) 〇
[0029] 实施例3 化合物的制备 采用以下步骤: a. 粉碎:将10Kg黑果土当归根瞭干粉碎成粒径0.lcm大小的颗粒,得黑果土当归粉, 备用; b. 回流提取:将步骤a中制得的黑果土当归粉在69°C的温度下回流提取5次,每次2 小时,每次用60Kg88%浓度的乙醇提取,合并乙醇提取液,备用; c、 浓缩:将步骤b制得的乙醇提取液经80-120微米滤纸过滤并在50°C的温度下用旋 转蒸发仪进行减压浓缩,至比重为1. 2时,得浸膏1410g,备用; d、 萃取:将1410g浸膏混悬于4500ml水中,依次用4500ml石油醚、4500ml乙酸乙酯以 及4500ml正丁醇进行萃取,每种溶剂萃取5次,再用旋转蒸发仪减压浓缩,分别得石油醚、 乙酸乙酯以及正丁醇萃取物395g、117g、411g。
[0030] e.分离:将步骤d中制得的石油醚萃取物(150g)经100-200目硅胶柱色 谱,用体积比25:1、20:1、15 :1、10:1、7:1、5:1、2:1、0:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱得 到Fr. 1-Fr. 8 共 8 个组分,Fr. 1 为 7. 2g,Fr. 2 为 7. 4g,Fr. 3 为 3. 9g,Fr. 4 为 17. 8g, Fr. 5 为 3.lg,Fr. 6 为 57. 3g,Fr. 7 为 3. 2g,Fr. 8 为 36. 3g,Fr. 6 (10g)经 200-300 目 硅胶柱色谱,用体积比15:1、10:1、7:1、5:1、2 :1、0:1的石油醚-乙
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