，稍冷后在家5滴~10滴过氧化氢并分次消煮，直至溶 液呈无色或淡黄色清液后，继续加热l〇min，除尽剩余的过氧化氢。取下稍冷，小心加水至 30mL，加热至沸腾。取下冷却，用少量水冲洗弯颈小漏斗，洗液放入原凯氏烧瓶中，将消煮液 移入IOOmL容量瓶中，加水定容，用无磷滤纸过滤到干燥的蓝盖试剂瓶中，备用。设置三组 空白对照组，除不加试样外，其他操作与上述操作相同。
[0186] 3. 2. 3、全氮测定
[0187] 全氮测定方法参照中华人民共和国农业行业标准NY525-2012和NY/T297-1995进 行，但有所改进。
[0188] 吸取3. 2. 2中制备的消煮清液IOmL于50mL容量瓶中，加入2mL硼酸和200 μ L混 合指示剂混合液，加水定容至50mL。利用凯氏定氮仪进行蒸馏，用硫酸标准溶液滴定馏出 液，由蓝色变至紫红色为终点，记录消耗硫酸标准液体积（mL)。空白测定所消耗硫酸标准液 体积不得超过〇. lmL，否则重新测定。全氮（N)含量以g/kg表示，按下述公式计算：
[0190] 式中：
[0191] V一一试液滴定消耗硫酸标准溶液的体积，mL ;
[0192] V0一一空白滴定消耗硫酸标准溶液的体积，mL ;
[0193] c--硫酸标准溶液的浓度，mol/L ;
[0194] 0.014--与1.0 OmL硫酸（1/2H2S04)标准溶液相当的以克表示的氮的质量；
[0195] D--分取倍数，定容体积/分取体积，100/10 ;
[0196] m--称取试样质量，g ;
[0197] 1000--换算成每千克试样的含量。
[0198] 3. 2. 4、全磷测定
[0199] 全磷测定方法参照中华人民共和国农业行业标准NY525-2012和NY/T298-1995进 行，但有所改进。
[0200] 吸取磷标准溶液 0、1. 00、2. 00、3. 00、4. 00、5. 00、6. OOmL 分别置于 7 个 50mL 容量 瓶中，加入与吸取试样溶液等体积的空白溶液，加水至30mL，加400 μ L 2, 6-二硝基酚指示 剂溶液，用氢氧化钠溶液和硫酸溶液调节溶液刚呈微黄色，加10.0 mL钒钼酸铵试剂，摇匀， 用水定容至50mL。此溶液为ImL含磷（P) 0、1. 00、2. 00、3. 00、4. 00、5. 00、6. 00 μ g的标准溶 液系列。在室温15°C以上条件下放置20min后，在分光光度计波长440nm处用2cm光径比色 皿，以空白溶液调节仪器零点，进行比色，读取吸光度，根据磷浓度和吸光度绘制标准曲线， 求出直线回归方程。吸取3. 2. 2中制备的消煮清液IOmL于50mL容量瓶中，加水至30mL，与 标准溶液系列同条件显色、比色，读取吸光度。全磷含量以g/kg表示，按下述公式计算：
[0202] 式中：
[0203] c--由回归方程求得显色液磷浓度，μ g/mL ;
[0204] V--显色体积，50mL ;
[0205] D--分取倍数，定容体积/分取体积，100/10 ;
[0206] m--称取试样质量，g ;
[0207] 10 3--将μ g/g换算成g/kg的因数。
[0208] 3. 2. 5、全钾测定
[0209] 全钾测定方法参照中华人民共和国农业行业标准NY525-2012和NY/T299-1995进 行，但有所改进。
[0210] 吸取钾标准溶液0、2· 50、5· 00、7· 50、10· OOmL分别置于5个50mL容量瓶中，加入 与吸取试样溶液等体积的空白对照溶液，用水定容，此溶液为ImL含钾（K) 0、5. 00、10. 00、 15. 00、20. 00 μ g的标准溶液系列。在火焰光度计上，以空白溶液调节仪器零点，以标准溶 液系列中最高浓度的标准溶液调节满值至80分度出。再依次由低浓度至高浓度测量其他 标准溶液，记录仪器示值。根据钾浓度和仪器示值绘制校准曲线或求出直线回归方程。吸 取3. 2. 2中制备的消煮清液5. OOmL于50mL容量瓶中，用水定容。与标准溶液系列同条件 在火焰光度计上侧定，记录仪器示值。每测量5个样品后需用钾标准溶液校正仪器。全钾 含量以g/kg表示，按下述公式计算：
[0212] 式中：
[0213] c--由回归方程求得测定液浓度，μ g/mL ;
[0214] V--测定体积，本操作为50mL ;
[0215] D--分取倍数，定容体积/分取体积，100/5 ;
[0216] m--称取试样质量，g ;
[0217] IO3--由μ g/g换算为g/kg的因数。
[0218] 3. 2. 6、速效磷测定
[0219] 全钾测定方法参照中华人民共和国农业行业标准NY/T300-1995进行，但有所改 进。
[0220] 精确称取3. 2. 1中冷冻干燥后的试样1.0 Og置于50mL三角瓶内，加入20mL 25°C 的柠檬酸溶液，加塞，在25°C下振荡30min，用无磷滤纸过滤至干燥的蓝盖试剂瓶中，备用。 设置三组空白对照组，除不加试样外，其他操作与上述操作相同。测定方法与3. 2. 4相同。 速效磷含量以mg/kg表示，按下述公式计算：
[
[0222] 式中：
[0223] c--由回归方程求得显色液磷浓度，μ g/mL ;
[0224] V--显色体积，50mL ;
[0225] D一一分取倍数，试样提取液体积/分取体积，20/5 ;
[0226] m--称取试样质量，g。
[0227] 3. 2. 7、速效钾测定
[0228] 精确称取3. 2. 1中冷冻干燥后的试样1.0 Og置于50mL三角瓶内，加入IOmL硝酸溶 液，插上小漏斗，在电炉上微沸lOmin，趁热过滤于50mL容量瓶中，用热水洗涤5次，冷却后 定容。设置三组空白对照组，除不加试样外，其他操作与上述操作相同。测定方法与3. 2. 5 中相同。速效钾含量以mg/kg表示，按下述公式计算：
[0230] 式中：
[0231] c--由回归方程求得测定液钾浓度，μ g/mL ;
[0232] V--测定体积，50mL ;
[0233] m--称取试样质量，g。
[0234] 3. 3、结果与分析
[0235] 3. 3. 1、全氮、全磷、全钾、速效磷和速效钾含量测定
[0236] 玉米秸杆经菌株液体发酵处理30d后，进行全氮、全磷、全钾、速效磷和速效钾测 定，结果如表11和图9~图11所示。玉米秸杆经过液体发酵后，按照差异显著性水平p = 0. 05和p = 0. 01分析，霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei) Sl发酵处理组的全氮、全 磷、全钾、速效磷和速效钾含量与空白对照组相比均差异不显著。因此，菌株对玉米秸杆进 行降解时不会影响其中的主要元素含量，试样依旧保存原有肥效。
[0237] 表11发酵处理后玉米秸杆中主要元素含量
[0240] 注：空白对照组不接入菌种。采用Duncan法进行多重比较。显著性水平p = 0.01 和p = 0. 05分别以大小写字母表示，η = 3。
[0241] 3. 4 结论
[0242] 霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei) Sl对玉米猜杆液体发酵处理30d后，试 样中的全氮、全磷、全钾、速效磷和速效钾含量均无明显变化。霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei) SI在降解样品时，不会引起样品中的主要元素含量，不会导致试样中的全氮、 全磷、全钾、速效磷和速效钾含量变化，样品依旧保存原有肥效。
【主权项】
1. 一株木质纤维素类物质高效降解菌S1，其特征在于它为霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei)S1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年12月12日，保藏号CGMCCNo. 10165。2. 如权利要求1所述的一株木质纤维素类物质高效降解菌S1的应用，其特征在于它用 于降解木质纤维素类物质。
【专利摘要】一株木质纤维素类物质高效降解菌S1及其应用，它涉及一株木质纤维素类物质高效降解菌S1及其应用。它为霍氏肠杆菌(Enterobacter？hormaechei)S1，于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC？No.10165。它用于降解木质纤维素类物质。本发明菌株具有增殖迅速，适应性强，应用广泛；经霍氏肠杆菌(Enterobacter？hormaechei)S1发酵处理后的袋料木耳废料的失重率在31％以上，经霍氏肠杆菌(Enterobacter？hormaechei)S1发酵处理后的玉米秸秆的失重率在33％以上。CGMCC No.1016520141212
【IPC分类】C12R1/01, C12N1/20
【公开号】CN105385632
【申请号】CN201510863793
【发明人】杨峰山, 刘春光, 孙永帅, 吴奇, 丁仕波, 杨微, 王鲲鹏, 王庆华, 魏才强, 曲金玲, 张慧, 于文全
【申请人】北京德瑞丰农业科技有限责任公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月1日