小刀在育苗杯内插2~3刀，深度约8cm左右；再将试管苗浸泡到装有接 种专用复合病原菌的盆中，液面要淹过育苗杯杯口 2cm左右，浸泡时间约5min。
[0088] 香蕉种苗伤根接种后，即刻脱掉育苗杯，种植到试验小区内，每个小区种植约15 株，株距2m。种植后24h左右再淋足定根水。
[0089] 香蕉种苗种植后15天、45天、90天分别接种一次。接种方法是：用小锄头在离香 蕉球茎约20-30cm处打3个小穴，每个小穴淋150ml接种专用复合病原菌，再覆盖泥土。接 种后24h内禁止淋水，以便病原菌定殖。
[0090] 6)结果与分析：
[0091 ] 表1不同品种田间发病率调查表
[0093] 据查资料，巴西蕉、广粉1号为香蕉枯萎病感病品种，东蕉1号为中抗品种，抗枯5 号、海贡、东莞中把大蕉、粉杂1号为高抗品种。
[0094] 从表1中对照来看，巴西蕉发病率为68. 3%，抗病水平表现为耐病，与品种本身的 抗病性（感病品种）有所不同；东蕉1号发病率为26. 8%，抗病水平表现为抗病，与品种本 身的抗病性（中抗品种）有所不同。抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、广粉1号、粉杂1号5 个品种的发病率分别为3. 5%、2. 6%、2. 2%、91. 7%、3. 4%，抗病水平分别表现为高抗、高 抗、高抗、感病、高抗，与品种本身的抗病性表现一致。说明对照与大田生产比较一致，但与 品种本身的抗病性略有差异。
[0095] 从香蕉枯萎病复合病原菌处理来看，巴西蕉、广粉1号的发病率分别为95. 4%和 98. 6%，抗病水平表现为感病，与品种本身的抗病性（感病品种）表现一致。东蕉1号的 发病率分别为45. 1%，抗病水平表现为中抗，与品种本身的抗病性（中抗品种）表现一致。 抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、粉杂1号4个品种的发病率分别为6. 4%、7. 8%、6. 5%、 8. 6%，抗病水平表现为高抗，与品种本身的抗病性（高抗品种）表现一致。说明通过香蕉 枯萎病复合病原菌处理，可以比较准确的鉴定品种的抗病性，从而筛选出抗（耐）香蕉枯萎 病品种。
[0096] 表2不同品种田间发病时间调查表
[0098] 从表2可以看出，对于感病品种巴西蕉和广粉1号、中抗品种东蕉1号而言，通过 接种香蕉枯萎病复合病原菌处理后，发病时间分别缩短75. 8天、32. 3天、44. 5天，缩短时间 比较明显。对于抗病品种抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、粉杂1号而言，通过接种香蕉枯萎 病复合病原菌处理后，发病时间分别缩短20. 4天、17. 2天、11. 9天、24. 9天，有所缩短。说 明通过香蕉枯萎病复合病原菌处理，缩短了香蕉品种抗病性鉴定的时间，对感病和中抗品 种效果更明显。
【主权项】
1. 一种香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，由液体病原菌菌液和固体病原菌菌块组 成，每1L所述液体病原菌菌液中混合80~120g所述固体病原菌菌块。2. 如权利要求1中所述香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，所述液体病原菌菌液由 香蕉枯萎病菌块接种于马铃薯-乳糖培养液中制得；所述固体病原菌菌块由香蕉枯萎病病 原菌母液接种至麦粒培养基中制得。3. 如权利要求2中所述香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，所述液体病原菌菌液为 浓度为106cfu/mL的香蕉枯萎病4号生理小种病原菌菌液和1号生理小种病原菌菌液混 合物，所述香蕉枯萎病4号生理小种病原菌菌液和1号生理小种病原菌菌液之间的体积比 3 ~5 : 1〇4. 如权利要求2中所述香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，所述固体病原菌菌块为 香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生理小种固体病原菌菌块的混合物，所述 香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生理小种固体病原菌菌块之间的重量比 3 ~5 : 1〇5. 如权利要求1-4中任意一项所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于， 具体为： (1) 病原菌母液的培养：将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接种于 马铃薯-乳糖培养液中，22°C~28°C下培养5~7天后，分别制得香蕉枯萎病4号生理小种 的病原菌母液和香蕉枯萎病1号生理小种的病原菌母液； (2) 液体病原菌菌液制备： A. 将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母液分别接种到初级马铃 薯-乳糖培养液中，22°C~28°C下培养6~8天，得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理 小种的初级培养物； B. 接着将初级培养物接种到次级马铃薯-乳糖培养液中，22°C~28°C下培养7-9天至 菌液浓度为108cfu/mL，分别得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液； C. 分别将所述香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液，稀释至106cfu/ mL，再将稀释后的两者菌液按体积比3~5 : 1的比例混合均匀，得到所述液体病原菌菌 液； (3) 固体病原菌菌块制备：香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母液分 别接种至麦粒培养基中，22°C~28°C下培养8~12天，分别得到香蕉枯萎病4号生理小种 和1号生理小种的固体菌块，将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的固体菌块按重 量比3~5 : 1的比例混合均匀，得到所述固体病原菌菌块； (4) 复合病原菌的制备：按1L液体病原菌菌液加入80~120g固体病原菌菌块的量， 将所述固体病原菌菌块捣碎在所述液体病原菌菌液中，混合均匀即得所述香蕉枯萎病复合 病原菌。6. 如权利要求5中所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于，所述初级马 铃薯-乳糖培养液和次级马铃薯-乳糖培养液为配方相同的马铃薯-乳糖培养液培养液。7. 如权利要求6中所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于，所述的马铃 薯-乳糖培养液通过以下方法制得：称取去皮马铃薯块100~300g，加水800~1200ml 煮沸15~25min至马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止，用双层纱布过滤取汁，加水至1000ml， 称取15~25g乳糖加入马铃薯过滤夜中，搅拌均匀，装入三角瓶中，放入高压灭菌锅内在 121°C±2°C和98kpa±0. 2kpa下高温灭菌15~25min;制得所述马铃薯-乳糖培养液。8. 如权利要求5中所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于，所述的麦粒 培养基通过以下方法制得：将麦粒用水浸泡4~6h，沥干，取70~80g麦粒，装入体积为 100~150ml的培养瓶中，盖好瓶盖，放入高压灭菌锅内在121°C±2°C和98kpa±0. 2kpa下 高温灭菌15~25min;制得所述麦粒培养基。9. 一种香蕉枯萎病复合病原菌在抗病品种选育中的应用，其特征在于：使用了权利要 求1-8中任意一项所述的香蕉枯萎病复合病原菌。10. -种香蕉种苗和植株接种方法，其特征在于，具体为： 首先，在香蕉枯萎病病区选择田块作为试验基地； 其次，选择7~8片生长健壮的二级试管苗作为试验种苗，用锋利小刀在育苗杯内插2~3刀，深度约8cm左右，进行伤根处理， 再将试管苗浸泡到装有权利要求1-8中任意一项所述的香蕉枯萎病复合病原菌的盆 中，浸泡时间约5min;再次，将伤根浸泡接种后的香蕉种苗种植于试验基地，种植后24h左 右再淋足定根水； 另外，在香蕉种苗种植后15天、45天、90天分别挖穴淋菌接种一次权利要求1-8中任 意一项所述的香蕉枯萎病复合病原菌。
【专利摘要】本发明属于农业植物保护技术领域，具体涉及一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制备方法和应用；本发明将香蕉枯萎病病原菌4号和1号生理小种菌块分别接种于马铃薯-乳糖培养液中得到病原菌母液；将香蕉枯萎病4号和1号病原菌母液分别在马铃薯-乳糖培养液中培养后稀释混合，得到液体病原菌菌液；将香蕉枯萎病4号和1号病原菌母液分别在麦粒培养基中培养出生理小种固体菌块，再将两者按比例混合得到固体病原菌菌块；最后，在液体病原菌菌液中添加固体病原菌菌块，混合均匀即得接种专用复合病原菌。本发明的复合病原菌可以准确的鉴定不同香蕉品种的抗病性，缩短香蕉品种抗病性鉴定的时间。
【IPC分类】C12R1/77, C12N1/14, A01G7/06
【公开号】CN105400708
【申请号】CN201510964537
【发明人】李洪波, 吕顺, 刘文清, 高芳云, 庄华才, 曾莉莎, 郑汉文, 王芳, 陶金
【申请人】东莞市香蕉蔬菜研究所
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月18日