口蹄疫病毒a型抗原多肽、融合抗原多肽及疫苗的制作方法_2

Gly-Gly或Ala ;X8= Asn或Gly或Thr ;X 9= Leu或Ser ;X 10= Ser或 Pro ;X Leu或 Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0034] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Il e-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ IDN0:17);其中，X9=Leu或Ser;X10=Ser或 或Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0035] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Il e-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ IDN0:18);其中，X9=Leu或SerAic^Ser或 或Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0036] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Il e-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ IDN0:19);其中，X9=Leu或SerAic^Ser或 或Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0037] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Al a-Ile-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ IDNO:20);其中，X9= Leu或Ser 10= Ser或Pro n =Leu或Val ;X13= Phe或Tyr 14= Arg或Gin 15= Glu或Thr ;
[0038]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:21);其中，X10=Ser或Pro;Xn=Leu或Val;X13 = Phe或Tyr;X14=Arg或Gin15=Glu或Thr〇
[0039]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-S er-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:22);其中，X10=Ser或Pro;Xn=Leu或Val;X13 = Phe或Tyr;X14=Arg或Gin15=Glu或Thr〇
[0040]Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:23);其中，X10=Ser或Pro;Xn=Leu或Val;X13 = Phe或Tyr;X14=Arg或Gin15=Glu或Thr〇
[0041]Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:24);其中，X1〇=Ser或Pro;Xn=Leu或Val; X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0042] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:25);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr;X14= Arg或Gin ;X15= Glu或Thr ;
[0043] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-S er-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:26);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr;X14= Arg或Gin ;X15= Glu或Thr〇
[0044] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-X n-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:27);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr;X14= Arg或Gin ;X15= Glu或Thr ;
[0045] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-X n-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:28);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr; X14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0046] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala -Ile-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID N0:29);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gln;X15 = Glu或Thr。
[0047] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-S er-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala -Ile-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID N0:30);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gln;X15 = Glu或Thr ;
[0048] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala -Ile-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID N0:31);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gln;X15 = Glu或Thr ;
[0049] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gl y-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Val-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn -X13-Gly-Ala-Ile-X 14-Ala -Thr-X15-Ile(SEQ IDN0:32);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg 或Gin ;X15= Glu或Thr〇
[0050] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID NO :33);其中，X14= Arg或Gin 15= Glu或 Thr；
[0051] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp -Ser-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID NO :34);其中，X14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr；
[0052] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-Tyr-G ly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID NO :35);其中，X14= Arg或Gin ;X 15= Glu或 Thr；
[0053] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Val-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-Phe-Gl y-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:36);其中，X14=Arg或Gln;X15=Glu或Thr;
[0054] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-Arg-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:37);其中，X15=Glu或Thr;
[0055] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp -Ser-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-Arg-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:38);其中，X15=Glu或Thr;
[0056] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-Tyr-G ly-Ala-Ile-Arg-Ala-Thr-X 15-Ile ; (SEQ ID NO :39);其中，X15= Glu或Thr ;
[0057] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Val-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-Phe-Gl y-Ala-Ile-Gln-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:40);其中，X15=Glu或Thr。
[0058] 更优选地，所述口蹄疫病毒A型抗原多肽，包含SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39或SEQ ID NO :40所示的氨基酸序列。
[0059] 本发明的抗原多肽包含上述氨基酸序列在一个或多个氨基酸位点进行一个或多 个氨基酸的替换、添加和/或删除所产生的序列。氨基酸替换包括保守替换和非保守替换。 保守替换是指性质相似的氨基酸之间的替换，例如极性氨基酸之间的替换（如谷氨酰胺和 天冬酰胺之间的替换），疏水性氨基酸之间的替换（如亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸和缬氨酸 之间的替换），以及带相同电荷的氨基酸之间的替换（如精氨酸、赖氨酸和组氨酸之间的 替换，或者谷氨酸和天冬氨酸之间的替换）等。非保守替换是指不同性质的氨基酸之间的 替换，本发明所包含的非保守替换将不会改变所述抗原多肽针对口蹄疫病毒的特异性免疫 原性和活性。本发明所述的氨基酸的添加和/或删除将不超过1个，2个，3个，4个，5个，6 个，7个，8个，9个或10个氨基酸。根据本发明的一个方面，在上述氨基酸序列（例如SEQID NOs: 1-40的序列）的N端添加和/或删除不超过1个，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个， 9个或10个氨基酸；根据本发明的另一个方面，在上述氨基酸序列（例如SEQIDNOs:1-40 的序列）的C端添加和/或删除不超过1个，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个或10 个氨基酸；根据本发明的另一个方面，在上述氨基酸序列（例如SEQIDNOs:1-40的序列） 的N端和/或C端添加和/或删除不超过1个，2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个或 10个氨基酸。
[0060] 第二个方面，本发明提供一种核酸序列，所述核酸序列用于编码所述抗原多肽。
[0061] 优选地，所述核酸序列如下SEQIDNO:56所示：
[0062]ACCACCGCCACCGGGGAATCAGCAGACCCCGTCACAACCACCGTCGAGAACTACGGTGGTGAGACAC AAGTGCAGCGACGCCACCACACCGACGTCAGCTTCATAATGGACAGGTTTGTGCAAATCAAGCCTGTGAGCCC CACACATGTCATTGACCTCATGCAAACACACCAACACGGGCTGGTGGGCGCTATGTTGCGCGCGGCCACCTACTA CTTTTCTGATCTTGAGATTGTGGTGAACCACACGGGTCGCCTAACGTGGGTACCCCATGGAGCACCTGAGGCAGCA CTGGACAACACGAGCAACCCCACTGCTTACCATAAAGCACCGTTCACACGGCTTGCACTCCCTTACACCGCGCCAC ACCGCGTGTTGGCAACTGTGTACAACGGGACTAGCAAGTACTCTGCGCCTGCAACACGGCGAGGTGACTTGGGGTCT CTCGCGGCGAGGCTCGCCGCACAGCTTCCTGCCTCCTTCAACTACGGCGCGATTCGAGCCACGGAGATCCAAGAACT CCTCGTGCGCATGAAGCGTCCGAGCTCTACTGCCCCAGGCCACTGCTGGCGGTGGAGGTGACGTCACAAGACAGACA CAAGCAGAAAATTATTGCCCCTGCAAAGCAGCTCCTG
[0063] 所述抗原多肽的制备可以通过本领域的已知技术来实现，其可以通过化学合成 方法制备，也可以通过基因工程方法制备。化学合成方法主要包括固相合成和液相合成 两种方法。固相多肽合成方法包括，例如Merrifield固相合成法，该方法已详细记载 在文献"Merrifield，J·Am.Chem.Soc. 85:2149-2154" 和 "M.Bodanszky等人，"Peptide Synthesis",Johnffiley&Sons,SecondEdition, 1976" 以及"J.Meienhofer,"Hormonal ProteinsandPeptides"，Vol.2，p. 46,AcademicPress(NewYork) ,1983"中。在此通过引 用方式将这些文献全文并入到本申请中用作参考。Merrifield固相合成法主要包括以下 步骤，根据目标多肽的氨基酸序列，先使被保护的C末端氨基酸与树脂连接；连接后洗涤树 脂；脱去C末端氨基酸α氨基上的保护基（例如，叔丁氧羰基），脱去这个保护基的时候必 须要确保不断裂该氨基酸和树脂间的连接键；然后在所得的树脂上偶联倒数第二个C末端 被保护的氨基酸，进行这一偶联时，在第二个氨基酸的游离羧基和连在树脂上的第一个氨 基酸的氨基之间形成一个酰胺键；根据目标多肽的氨基酸连接顺序，依次重复前述反应过 程，直到所有氨基酸都连接到树脂上；最后