口蹄疫病毒a型抗原多肽、融合抗原多肽及疫苗的制作方法_5

br>[0129]Val-Tyr-Asn-Gly-X2-Ser-X3-Tyr-Ser-X4-X5-X6-X7-X8-Arg-Arg-Gly-Asp-X9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr_X15-Ile;(SEQIDN0:12);其中，X2=Val或Cys或Thr;X3=Arg或Lys;X4=Ala 或Thr;X5=Pro或Thr6_X7=Gin或Gly-Gly或Ala8=Asn或Gly或Thr9=Leu 或Ser;X10=Ser或Pron=Leu或Val13=Phe或Tyr14=Arg或Gin15=Glu 或Thr;
[0130]Val-Tyr-Asn-Gly-X2-Ser-X3-Tyr-Ser-X4-X5-X6-X7-X8-Arg-Arg-Gly-Asp-X9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr_X15-Ile;(SEQIDN0:13);其中，X2=Val或Cys或Thr;X3=Arg或Lys;X4=Ala 或Thr;X5=Pro或Thr6_X7=Gin或Gly-Gly或Ala8=Asn或Gly或Thr9=Leu 或Ser;X10=Ser或Pron=Leu或Val13=Phe或Tyr14=Arg或Gin15=Glu 或Thr;
[0131]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-X4-X5-X6-X7-X8-Arg-Arg-Gly-Asp-X9-G ly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:14);其中，X4=Ala或Thr;X5=Pro或Thr;X6-X7=Gln 或Gly-Gly或Ala;X8=Asn或Gly或Thr;X9=Leu或Ser;X10=Ser或Pro;XLeu或 Val;X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gin;X15=Glu或Thr;
[0132]Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-X4-X5-X6-X7-X8-Arg-Arg-Gly-Asp-X9-G ly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:15);其中，X4=Ala或Thr;X5=Pro或Thr;X6-X7=Gln 或Gly-Gly或Ala;X8=Asn或Gly或Thr;X9=Leu或Ser;X10=Ser或Pro;XLeu或 Val;X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gin;X15=Glu或Thr;
[0133] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-X4-X5-X6-X7-X8-Arg-Arg-Gly-Asp-X9-G ly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:16);其中，X4=Ala或Thr;X5=Pro或Thr;X6-X7=Gln或Gly-Gly或Ala ;X8= Asn或Gly或Thr ;X 9= Leu或Ser ;X 10= Ser或Pro ;X Leu或 Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0134] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Il e-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID N0:17);其中，X9=Leu或Ser;X10=Ser或 或Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0135] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Il e-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID N0:18);其中，X9=Leu或SerAic^Ser或 或Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0136] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Il e-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID N0:19);其中，X9=Leu或SerAic^Ser或 或Val ;X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0137] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-X 9-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Al a-Ile-X 14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQ ID NO :20);其中，X9= Leu或Ser 10= Ser或Pro n =Leu或Val ;X13= Phe或Tyr 14= Arg或Gin 15= Glu或Thr ;
[0138] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-X n-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:21);其中，X10=Ser或Pro;Xn=Leu或Val;X13 = Phe或Tyr ;X14= Arg或Gin 15= Glu或Thr〇
[0139] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-S er-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-X n-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:22);其中，X10=Ser或Pro;Xn=Leu或Val;X13 = Phe或Tyr ;X14= Arg或Gin 15= Glu或Thr〇
[0140] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly -Asp-Leu-Gly-X10-Leu-Ala-Ala-Arg-X n-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn -X13-Gly-Ala-Ile-X 14-Ala-Thr- X15-Ile(SEQ ID NO :23);其中，X10=Ser或Pro 或Val ;X13= Phe或Tyr 14= Arg或Gin 15= Glu或Thr〇
[0141] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-X 10-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:24);其中，X1〇=Ser或Pro;Xn=Leu或Val; X13= Phe或Tyr ;X 14= Arg或Gin ;X 15= Glu或Thr ;
[0142] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X 15-Ile(SEQ ID N0:25);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr;X14= Arg或Gin;X15=Glu或Thr;
[0143]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-S er-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:26);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr;X14= Arg或Gin;X15=Glu或Thr〇
[0144]Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:27);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr;X14= Arg或Gin;X15=Glu或Thr;
[0145]Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Xn-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:28);其中，Xn=Leu或Val;X13=Phe或Tyr; X14=Arg或Gin;X15=Glu或Thr;
[0146]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala -Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:29);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gln;X15 = Glu或Thr。
[0147]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp-S er-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala -Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:30);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gln;X15 = Glu或Thr;
[0148]Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp-L eu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-X13-Gly-Ala -Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:31);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gln;X15 = Glu或Thr;
[0149]Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Val-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-X13-Gl y-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:32);其中，X13=Phe或Tyr;X14=Arg或Gin; X15=Glu或Thr。
[0150]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDNO :33);其中，X14=Arg或Gin15=Glu或 Thr；
[0151]Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp -Ser-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDNO :34);其中，X14=Arg或Gin15=Glu或 Thr；
[0152]Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-Tyr-G ly-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDNO:35);其中，X14=Arg或Gin;X15=Glu或Thr；
[0153] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Val-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-Phe-Gl y-Ala-Ile-X14-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:36);其中，X14=Arg或Gln;X15=Glu或Thr;
[0154] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-Arg-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:37);其中，X15=Glu或Thr;
[0155] Val-Tyr-Ser-Gly-Cys-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Gln-Asn-Arg-Arg-Gly-Asp -Ser-Gly-Pr〇-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Cys-Ser-Phe-Asn-Phe-G ly-Ala-Ile-Arg-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:38);其中，X15=Glu或Thr;
[0156] Val-Tyr-Asn-Gly-Thr-Ser-Lys-Tyr-Ser-Ala-Pr〇-Ala-Thr-Arg-Arg-Gly-Asp -Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Leu-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ala-Ser-Phe-Asn-Tyr-G ly-Ala-Ile-Arg-Ala-Thr-X15-Ile;(SEQIDNO:39);其中，X15=Glu或Thr;
[0157] Val-Tyr-Asn-Gly-Val-Ser-Arg-Tyr-Ser-Thr-Thr-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Gly-A sp-Leu-Gly-Ser-Leu-Ala-Ala-Arg-Val-Ala-Ala-Gln-Leu-Pr〇-Ser-Ser-Phe-Asn-Phe-Gl y-Ala-Ile-Gln-Ala-Thr-X15-Ile(SEQIDN0:40);其中，X15=Glu或Thr。
[0158] 实施例1.多肽的固相合成
[0159] 仪器设备：PSI300B全自动多肽合成仪，以RinkAmideMBHA树脂作为固相载体； PallCentrasette正切向流超滤系统，使用Omega系列膜包。
[0160] 原料和试剂：9_芴甲氧羰基（Fmoc)保护的氨基酸作为起始原料，固相合成中用到 的其它试剂具体见实施例的以下部分。合成中用到的所有原料和试剂都可以在市场上通过 购买方式获得或者本领域技术人员根据已知技术经简单配制后获得。
[0161] 通过Merrifield固相合成法合成SEQIDNOs:48~51所示的融合抗原多肽（记 为融合抗原多肽1、2、3、4)。
[0162] 1、多肽的合成
[0163] Merrifield固相合成的合成顺序是从C端开始到N端。在调试好的PSI300B全 自动多肽合成仪中按照目标多肽的氨基酸顺序依次不断地添加Fmoc保护的氨基酸并依次 进行如下反应步骤：
[0164] (1)将RinkAmideMBHA氨基树脂置于含有15~30% (v/v)六氢吡啶的N-甲 基吡咯烷酮（NMP)溶液中，在20°C~28°C条件下反应25~60分钟，以脱除氨基树脂上的 Fmoc基团；
[0165] (2)反应后的...