高表达的SPARC蛋白质的肽，将 该肽应用于肿瘤的免疫疗法。本发明要解决的课题在于：鉴定可诱导对肿瘤显示反应性的 人杀伤T细胞、和辅助T细胞的来自SPARC蛋白质的肽，以高表达SPARC的各种癌症的患者 为对象，提供可进行肿瘤的免疫疗法的方法。
[0018] 本发明人通过弥漫性浸润性胃癌的cDNA微阵列分析，鉴定了在弥漫性浸润性胃 癌中高表达的基因SPARC。SPARC的表达在部分正常组织中也可观察到，但是与癌症部位相 比，其表达显著低。为了研究SPARC特异性的杀伤T细胞是否诱导抗肿瘤免疫，利用结合肽 的氨基酸序列相关特征与日本人中频率最高的HLA-A24相同的、表达小鼠Kd分子的BLAB/ c小鼠。即，对于具有95%同源性的人和小鼠的SPARC，通过在两者中氨基酸序列共通的肽， 合成具有人的HLA-A24和小鼠Kd共通的结合基序的复合物。通过将负载了这些肽的混合物 的、来自骨髓的树突状细胞免疫BALB/c小鼠（表达Kd)，研究是否诱导了肽特异性的、且破 坏表达SPARC的癌细胞的杀伤T细胞。并且，在接受了按照同样的免疫方法进行预处理的 小鼠中，对移植的小鼠中表达SPARC的癌细胞的增殖是否受到抑制、存活期间是否延长进 行了研究。对于肽免疫的小鼠中，对随着自身免疫现象的发生而观察到的有害现象是否出 现也进行了研究。结果确认：含有SEQIDN0: 1-3中任一项所示氨基酸序列的肽可诱导破 坏表达SPARC的癌细胞的杀伤T细胞，并且这些肽免疫的小鼠中，移植的小鼠中表达SPARC 的癌细胞的增殖受到抑制，存活期间延长，本发明根据这些认识完成。
[0019]SP，本发明提供以下的发明。
[0020] (1)以下任意的肽： (A) SEQIDN0: 1-3中任一项所示氨基酸序列的肽； (B) 具有杀伤T细胞的诱导能力的、在由SEQIDN0: 1-3所示氨基酸序列形成的肽中 有1或多个氨基酸取代或附加而成的氨基酸序列组成的肽。
[0021] (2)癌症的免疫诱导剂，该癌症免疫诱导剂含有至少一种以上（1)所述的肽。
[0022] (3)肿瘤的治疗和/或预防用的药物，该药物含有至少一种以上（1)所述的肽。
[0023] (4)用于诱导抗原呈递细胞的药物，该药物含有至少一种以上（1)所述的肽，其 中，所述的抗原呈递细胞诱导肿瘤反应性T细胞的能力高。
[0024] (5)用于诱导肿瘤反应性T细胞的药物，该药物含有至少一种以上（1)所述的肽。
[0025] (6)用于诱导抗原呈递细胞的药物，该药物含有编码以下任何的肽的基因，其中， 所述的抗原呈递细胞诱导肿瘤反应性T细胞的能力高。
[0026]㈧SEQIDN0: 1-3中任一项所示氨基酸序列的肽； (B)具有杀伤T细胞的诱导能力的、在由SEQIDN0: 1-3所示氨基酸序列形成的肽中 有1或多个氨基酸取代或附加而成的氨基酸序列组成的肽。
[0027] (7)针对⑴所述的肽的抗体。
[0028] (8)杀伤T细胞、辅助T细胞或含有它们的免疫细胞集团，这些细胞用（1)所示的 肽诱导。
[0029] (9)抗原呈递细胞，该抗原呈递细胞呈递HLA分子与（1)所述肽的复合体。
[0030] (10) (9)所述的抗原呈递细胞，该抗原呈递细胞由（4)或（6)所示药物诱导。
[0031] 实施发明的最佳方式 (1)本发明的肽以及含有该肽的、癌症的免疫诱导剂 本发明的肽是以下任意的肽。
[0032]㈧SEQIDN0: 1-3中任一项所示氨基酸序列的肽； (B)具有杀伤T细胞的诱导能力的、在由SEQIDN0: 1-3所示氨基酸序列形成的肽中 有1或多个氨基酸取代或附加而成的氨基酸序列组成的肽。
[0033] 本说明书中所述的具有诱导细胞毒性T细胞的能力的肽是指具有刺激杀伤T细胞 的T细胞诱导活性的肽。
[0034] 本发明肽的获得、制备方法没有特别限定，可以是化学合成的肽、通过基因重组技 术制备的重组肽的任意一种。
[0035]获得化学合成肽时，例如可按照Fmoc法（荷甲氧羰基法），tBoc法（叔丁氧羰基 法）等化学合成方法合成本发明的肽。还可以利用各种市售的肽合成仪合成本发明的肽。
[0036] 生产本发明的肽作为重组蛋白质时，可获得具有编码该肽的碱基序列的DNA或其 突变体或同源体，将其导入到适当的表达系统中，制备本发明的肽。
[0037] 表达载体优选可在宿主细胞中自主复制，或者可以整合到宿主细胞的染色体中， 可以使用在可表达编码肽的基因的位置含有启动子的载体。另外，可以通过将上述表达载 体导入宿主中制备具有编码本发明的肽的基因的转化体。宿主可以是细菌、酵母、动物细 胞、昆虫细胞的任意一种，可以根据适合各宿主的公知的方法向宿主中导入表达载体。
[0038] 本发明中，培养上述制备的转化体，在培养物中生成并积蓄本发明的肽，由该培养 物中收集本发明的肽，由此可以分离重组肽。
[0039] 转化体为大肠杆菌等原核生物、酵母菌等真核生物时，培养这些微生物的培养基 可以含有该微生物可利用的碳源、氮源、无机盐类等，只要是可高效地进行转化体的培养的 培养基即可，可以是天然培养基、合成培养基的任意一种。另外，培养条件也可按照培养该 微生物时通常所使用的条件进行。培养后，在从转化体的培养物中分离纯化本发明的肽时， 可以使用通常的肽的分离、纯化方法。
[0040] 本说明书中的"1或多个氨基酸"通常是指1-10个氨基酸，优选1-8个氨基酸，更 优选1-5个氨基酸，特别优选1-3个氨基酸（例如1个、2个或3个氨基酸）。
[0041] 对于在由SEQIDN0: 1-3中任一项所示氨基酸序列形成的肽中有1或多个氨基 酸取代或附加得到的氨基酸序列组成的肽，本领域技术人员可根据SEQIDN0: 1-3中任一 项所述的氨基酸序列的信息适当制备或获得。即，在SEQIDNO: 1-3中任一项所示的氨 基酸序列中有1或多个氨基酸取代或附加得到的氨基酸序列、具有细胞毒性T细胞诱导能 力的肽可通过上述化学合成、基因工程方法或诱变等本领域已知的任意方法制备。例如，作 为基因工程的方法之一的位点专一性诱变法是可以向特定位置导入特定突变的方法，因此 有用，可按照MolecularCloning:AlaboratoryMannual, 2ndEd·，ColdSpringHarbor Laboratory,ColdSpringHarbor,NY.，1989 (以下简称分子克隆第 2 版）、Current ProtocolsinMolecularBiology,Supplement1-38,JohnWiley&Songs(1987-1997) 等所述方法进行。
[0042] 上述本发明的肽，如后述实施例所示，可以诱导对癌症的免疫。因此，本发明可以 提供含有本发明的肽的癌症的免疫诱导剂。
[0043] 本发明的癌症的免疫诱导剂可以在体内、先体外后体内或在体外、优选先体外后 体内使用，可以诱导杀伤T细胞、辅助T细胞或含有它们的免疫细胞集团，由此可以赋予对 癌的免疫功能。
[0044] (2)本发明的抗体 本发明涉及识别以上述本发明的肽的一部分或全部作为表位（抗原）的抗体、以及该 肽进行先体外后体内或体外刺激而诱导的杀伤T细胞。通常已知，与抗体相比，杀伤T细胞 显示强的抗肿瘤活性。
[0045] 本发明的抗体可以是多克隆抗体也可以是单克隆抗体，其制备可按照规定方法进 行。
[0046] 例如，多克隆抗体可以用本发明的肽作为抗原，免疫致敏哺乳动物或鸟类，由该哺 乳动物或鸟类采集血液，由采集的血液分离并纯化抗体获得。例如可以免疫小鼠、仓鼠、豚 鼠、鸡、大鼠、兔、狗、山羊、绵羊、牛、马等哺乳动物或鸟类。免疫致敏的方法在本领域是公知 的，例如可以将抗原例如以7-30天的间隔给予2-3次。给予量可以是每次例如给予抗原约 0.05-2mg左右。给予途径没有特别限定，可以适当选择皮下给予、皮内给予、腹膜腔内给 予、静脉内给予、肌内给予等。抗原可以溶解于含有适当的佐剂的缓冲液，例如完全弗氏佐 剂或氢氧化铝等通常所使用的佐剂的适当的缓冲液中使用。
[0047] 将免疫致敏的哺乳动物或鸟类饲养一定期间后，如果抗体效价升高，则使用例如 100μg-1000μg的抗原进行追加免疫。自最后的给予1-2个月后，由免疫致敏的哺乳动 物或鸟类采集血液，将该血液通过离心、使用硫酸铵或聚乙二醇的沉淀、凝胶过滤层析、离 子交换层析、亲和层析等层析等常规方法分离纯化，由此可以获得识别本发明的肽的多克 隆抗体。
[0048] 单克隆抗体可以制备杂交瘤获得。例如，通过抗体生