成细胞与骨髓瘤细胞株的细 胞融合，可以获得杂交瘤。生成本发明的单克隆抗体的杂交瘤可通过以下的细胞融合法获 得。
[0049] 抗体生成细胞可使用来自被免疫的动物的脾细胞、淋巴结细胞、B淋巴细胞等。抗 原可使用本发明的肽。免疫动物可使用小鼠、大鼠等。这些抗原对这些动物的给予可按照 常规方法进行。例如将完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂等佐剂与作为抗原的本发明肽的悬 浮液或乳化液分多次给予动物的皮下、皮内、腹腔内，由此免疫动物。由被免疫的动物获 得作为抗体生成细胞的例如脾细胞，按照公知方法（G.Kohler等人.，Nature，256 495 (1975))使其与骨髓瘤细胞融合，制备杂交瘤。
[0050] 细胞融合中使用的骨髓瘤细胞株，例如小鼠有P3X63Ag8、P3Ul株、Sp2/0株等。进 行细胞融合时，可使用聚乙二醇、仙台病毒等融合促进剂，细胞融合后的杂交瘤的选择可按 照常规方法，使用次黄嘌呤?氨基蝶呤?胸苷（HAT)培养基。细胞融合得到的杂交瘤通过有 限稀释法等克隆。还可进一步根据需要通过使用本发明的肽的酶联免疫测定法进行筛选， 可获得生成特异性识别本发明的肽的单克隆抗体的细胞株。
[0051] 由上述得到的杂交瘤制备目标单克隆抗体时，可通过通常的细胞培养法或腹水形 成法培养该杂交瘤，由培养上清或腹水中纯化该单克隆抗体。培养上清或腹水中的单克隆 抗体的纯化可按照常规方法进行。例如可将硫酸铵分离法、凝胶过滤、离子交换层析、亲和 层析等适当组合使用。
[0052]上述抗体的片段也在本发明的范围内。抗体的片段有F(ab'）2片段、Fal/片段等。
[0053] (3)杀伤T细胞、辅助T细胞或含有它们的免疫细胞集团 本发明还涉及使用本发明的肽、通过体外刺激诱导的杀伤T细胞、辅助T细胞或含有它 们的免疫细胞集团。例如，用本发明的肽体外刺激末梢血淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞，则 显示肿瘤反应性的活化T细胞被诱导，该活化T细胞可有效用于癌症的过继免疫疗法。将 本发明的肽在强力的抗原呈递细胞 树突状细胞、在先体外后体内或者在体外表达，通 过给予表达该抗原肽的树突状细胞，可以诱导针对肿瘤的免疫反应。
[0054] 优选使用本发明的肽和免疫活化剂，通过先体外后体内或在体外进行刺激，由此 诱导含有杀伤T细胞、辅助T细胞或含有它们的免疫细胞集团。这里所使用的免疫活化剂 有细胞生长因子或细胞因子等。
[0055] 将上述得到的杀伤T细胞、辅助T细胞、或含有它们的免疫细胞集团转移到体内， 由此可抑制肿瘤，可以进行癌症的预防和/或治疗。
[0056] 通过使用本发明的肽，可以制备能够抑制上述肿瘤生长的杀伤T细胞、辅助T细胞 或含有它们的免疫细胞集团。因此，根据本发明，可以提供含有肿瘤反应性T细胞和本发明 的肽的细胞培养液。使用该细胞培养液，可以制备能够抑制肿瘤的杀伤T细胞、辅助T细胞 或含有它们的免疫细胞集团。根据本发明，可以提供含有上述细胞培养液、细胞培养容器 的、用于制备杀伤T细胞、辅助T细胞、或含有它们的免疫细胞集团的细胞培养试剂盒。
[0057] (4)本发明的用于肿瘤的治疗和/或预防的药物（癌症疫苗） 本发明的肽可以诱导癌细胞特异性杀伤T细胞，因此有望作为癌症的治疗、预防药。例 如，将编码本发明的肽的基因组整合到适当的载体中、用该重组DNA转化的BCG菌的细菌， 或者将编码本发明的肽的DNA整合到基因组中得到的痘苗病毒等病毒作为人类癌症的治 疗、预防用的活疫苗有效利用。癌症疫苗的给予量和给予方法与通常的种痘或BCG疫苗同 样。
[0058] S卩，编码本发明的肽的DNA(直接或者是以整合到表达载体中的质粒DNA的形 式）、含有该DNA的重组病毒或重组细菌可直接或者以分散于佐剂中的状态、以癌症疫苗的 形式给予包括人的哺乳动物。本发明的肽也同样以与佐剂分散的状态、以癌症疫苗的形式 给予。
[0059] 可在本发明中使用的佐剂有弗氏不完全佐剂、BCG、海藻糖二霉菌酸酯（TDM)、月旨 多糖（LPS)、明矾佐剂、硅佐剂等，从涉及抗体的诱导能力等考虑，优选使用弗氏不完全佐剂 (IFA)〇
[0060] 本说明书中所述的癌症的种类没有特别限定，具体例子有胃癌、直肠结肠癌、食道 癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、黑素瘤（恶性黑素瘤）、皮肤癌、 骨肉瘤、褐色细胞瘤、头颈癌、脑肿瘤、慢性骨髓性白血病、急性骨髓性白血病、恶性淋巴瘤、 肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、子宫癌、卵巢癌、或软组织肉瘤等，其中特别是像胃癌（特 别是弥漫性浸润性胃癌）、胰腺癌或黑素瘤（恶性黑素瘤）等的高表达SPARC的癌症。
[0061] 本发明的肽作为T细胞表位，可诱导癌细胞特异性的杀伤T细胞或辅助T细胞，因 此可用作人的癌症预防、治疗药物。本发明的抗体只要是可以抑制作为癌症抗原的SPARC 活性即可用作人癌症的预防、治疗药。实际的使用方法可以是将本发明的肽或抗体直接或 者与药物可接受的载体和/或稀释剂一起、再根据需要加入以下助剂，制成注射剂的形式 给予，也可以通过喷雾等方法由粘膜等透皮吸收给予。这里所述的载体例如是人血清白蛋 白，稀释剂例如有PBS、蒸馏水等。
[0062] 给予量是成人每人例如每次以0.01mg-100mg的范围给予本发明的肽或抗体，但 并不限于该范围。制剂的形态没有特别限定，可以是冻干制剂，也可以加入糖等赋形剂制成 颗粒。
[0063] 可添加到本发明的药物中的、用于提高肿瘤反应性T细胞诱导活性的助剂有：除 胞壁酰二肽（MDP)之外的BCG菌等菌体成分、Nature,vol. 344，p873 (1990)所述的 ISC0M、J.Immunol,vol. 148，pl438 (1992)文献所述的皂苷类的QS-21、脂质体、氢氧化 铝等。还可以使用香菇多糖、裂裥多糖、沙培林等的免疫活化剂作为助剂。另外，IL-2、IL-4、 IL-12、IL-1、IL-6、TNF等增强T细胞的增殖、分化增强细胞因子等，以及活化NKT细胞的α 半乳糖苷神经酰胺，或与Toll样受体结合、活化自然免疫系统的CpG、脂多糖（LPS)等也可 用作助剂。
[0064] 在试管内，向由HLA-A24阳性患者采集的细胞、或者来自HLA-A24阳性的人(异源 的）的细胞中加入该抗原肽，进行抗原呈递，然后给予患者的血管内，可以在患者体内有效 地诱导杀伤T细胞。还可以向患者末梢血淋巴细胞中加入该肽，在试管内培养，在试管内诱 导杀伤T细胞后返回患者血管内。上述细胞移植的治疗已经作为癌症治疗方法实施，是本 领域所熟知的方法。
[0065] 将本发明的肽注入体内，可以诱导肿瘤反应性T细胞，结果有望获得抗肿瘤效果。 先体外后体内或在体外用本发明的肽刺激淋巴细胞、诱导活化T细胞，将该活化的T细胞注 入患部，还可有效地用于过继免疫疗法。
[0066] 通过以下实施例进一步说明本发明，本发明并不受这些实施例的限定。 实施例
[0067][实施例1] (1) cDNA微阵列分析 将摘取的弥漫性浸润性胃癌患者的癌部位或非癌部位的组织通过激光捕获显微切割 分别切出，由各组织中提取RNA。通过反转录反应，由这些RNA合成cDNA，此时将癌部位的 cDNA用Cy5、非癌部位的cDNA的用Cy3荧光标记，然后混合，制成靶DNA。在探针cDNA作为 阵列的玻片上进行杂交，然后洗涤并除去非特异性结合，使用CCD照相机或荧光扫描仪摄 取杂交后的荧光图像，以伪彩色（Cy5 :红，Cy3 :绿）展示，同时分别计算荧光强度的比（R/ G)，以基因表达分布表示。并且，对20例弥漫性浸润性胃癌患者的癌症部位和非癌症部位 的23040种基因的表达进行比较研究，在很多的症例中选出15种癌部位/非癌部位表达比 为5以上的基因（图1)。
[0068] 下面，对于各基因，分析29种器官（包括胚胎期的4种器官）的正常组织中23, 040 种基因的表达分布，选出在正常器官中表达低的基因。本次，我们作为肿瘤抗原选定的 SPARC，在20例弥漫性浸润性胃癌患者中的11例中癌部位/非癌部位的表达比为5以上 (平均133, 359倍）。SPARC也在一部分正常组织中表达，但与癌症部位相比其表达显著低 (图 2)。
[0069][实施例2] (2) 人HLA-A24和小鼠Kd约束性SPARC肽的所有组成成分的选择 在具有95%同源性的人和小鼠的SPARC中选择了以下的肽，并且所选择的肽是从具有 在人和小鼠中共同的氨基酸序列的SPARC肽部分中选择的。根据与人HLA-A24和小鼠#分 子均强烈结合的肽中均可观察到的氨基酸序列的已知信息，对SPARC分子的全部氨基酸序 列进行分析，利用计算机程序选择了推定与两分子结合亲和性高的