一种嗪草酮农药残留降解菌及其生产的菌剂和应用_2

文档序号:9661395阅读:来源:国知局

[0022] 菌株QCT10于2015年6月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,菌种保藏号为: CCTCCN0:Μ2015392ο
[0023] 实施例2菌株对嗪草酮的降解效果
[0024]无机盐液体培养基中降解菌QCT10对嗪草酮降解特性测定:挑取QCT10单菌落于 50mlLB液体培养基中,30°C、160r/min振荡培养12h,获得新鲜菌液。将3ml培养好的新鲜菌 液经6000r/min离心5min,弃去上清液,加入3ml无菌水重悬,为离心悬浮后的菌液。在20ml 含50mg/l嗪草酮的GMSM液体培养基(葡萄糖3.0克,K2HP〇4 1.5克,KH2P〇4 0.5克,NaCl1.0 克,MgS〇4 · 7H20 0.2克,水1000毫升,pH7.0-7.2)中,接入1.51111离心悬浮后的菌液,30°(3, 150r/min培养,第7天取样测定嗪草酮的含量。结果见表1,降解菌QCT10对嗪草酮的降解率 达到75.3%。
[0025] 土壤中降解菌QCT10对嗪草酮降解特性测定:称取600g土壤,加入嗪草酮,使土壤 中含嗪草酮浓度为15mg/kg,加入QCT10新鲜菌液,混匀,使土壤中的QCT10浓度为1011个细 胞/克土,置于30°C培养箱中黑暗条件下恒温培养,第30天取样测定嗪草酮在土壤中的残留 量,结果见表1,土壤中降解菌QCT10降解嗪草酮达到56.1%。
[0026] 表1菌株QCT10在GMSM液体培养基中和土壤中对嗪草酮的降解效果
[0028]实施例3菌剂的制备及对嗪草酮的降解效果
[0029]将本发明的农药残留降解菌QCT10的原种在LB试管斜面上活化。将试管斜面菌种 接种于含200ml肉汤培养基(牛肉膏10克,蛋白胨5克,NaC15克,水1000毫升,pH7.0-7.2)的 1000ml摇瓶中,30°C恒温振荡培养至对数期,准备接种种子罐。种子罐500升,投料量400升, 培养基配方(质量百分比):葡萄糖l.〇wt%,NH4N〇3 1.0wt%,K2HP〇4 0.2wt%,MgS〇4 0.05wt%,NaClO.Olwt%,CaC03 0.3%,酵母膏0.02%,pH值7.2-7.5。投料完毕后 121°C高 压湿热灭菌,灭菌完成冷却至33°C后,将上述培养好的摇瓶菌种按10% (体积百分比,下同) 的接种量接种入500升种子罐,培养至对数生长期,种子罐温度控制在30-32°C,搅拌速度为 220转/分,无菌空气通入量为1:0.8。生产罐所用培养基成分与种子罐培养基相同。生产罐 容量5吨,投料量4.5吨。投料后的生产罐1.11^/(^ 2的压力下,121°(3高压湿热灭菌,灭菌后 冷却至33°C后,通无菌空气保持无菌状态备用。将到达对数期的前述种子罐中的种子液按 10%的接种量接入生产罐培养,接种后的生产罐温度控制在30-32°C,生产罐的培养过程中 无菌空气的通气量为1:0.8,搅拌速度为220转/分,整个工艺流程培养时间为48小时。发酵 结束后菌体数量达到10亿个/ml以上。发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶 分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。
[0030] 土壤中QCT10液体降解菌剂对嗪草酮降解效果测定:取5000g长期使用嗪草酮的农 田土壤,嗪草酮残留浓度为4.7mg/kg,加入本实施例制备的QCT10液体降解菌剂,混匀,使土 壤中的QCT10浓度为108个细胞/克土,置于30°C,定时取样测定嗪草酮在土壤中的残留量, 结果见表2,土壤中QCT10液体降解菌剂对土壤中嗪草酮降解率达到52.3%。
[0031]表2QCT10嗪草酮降解菌剂在土壤中对嗪草酮的降解效果
【主权项】
1. 一种嗪草酮降解菌(1?11〇(1〇(3〇(^118 8口.)(>)0'10,2015年6月29日保藏于中国典型培养 物保藏中心,菌种保藏号为:CCTCCNO:M2015392。2. 权利要求1所述的嗪草酮降解菌QCT10在降解嗪草酮中的应用。3. 权利要求1所述的嗪草酮降解菌QCT10在生产嗪草酮农药残留降解菌剂中的应用。4. 一种由权利要求1所述的嗪草酮降解菌QCT10制备的菌剂。5. 根据权利要求4所述的菌剂,其特征在于通过以下方法制备而成: 1) 将权利要求1所述的嗪草酮降解菌QCT10接种于肉汤培养基摇瓶中,振荡培养至对数 期; 2) 将上述培养好的菌种按种子罐培养基的10 % (v/v)的接种量接种入500升种子罐,培 养过程中无菌空气的通气量为1:0.8-1.2,搅拌速度为180-240转/分,培养温度为30-32°C, 培养至对数生长期,种子罐所用的培养基配方为:葡萄糖1. 〇wt%,NH4N03 1.Owt%,K2HP〇4 0 · 2wt%,MgS〇4 0 · 05wt%,NaCIO· 0lwt%,CaC03 0 · 3wt%,酵母膏0 · 02wt%,pH值7 · 2-7 · 5; 3) 将上述种子液按生产罐培养基的10% (v/v)接种量接入生产罐培养,生产罐所用培 养基与上述种子罐培养基相同,培养过程中无菌空气的通气量为1:0.8-1.2,搅拌速度为 180-240转/分,培养温度为30-32°C,全流程培养时间为36-48小时,发酵结束后菌体数量达 到10亿个/ml以上,发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或 采用泥炭吸附用包装袋分装成固体剂型。6. 权利要求4或5所述的菌剂在降解嗪草酮中的应用。7. 根据权利要求6所述的应用,其特征在于所述菌剂在降解土壤中嗪草酮农药残留的 应用。
【专利摘要】本发明提供了一种嗪草酮农药残留降解菌及其生产的菌剂。该菌株为革兰氏阳性菌,经鉴定为红球菌(Rhodococcus?sp.),2015年6月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,菌种保藏号为:CCTCC?NO:M2015392。将QCT10菌种发酵完成后的培养液即为菌剂。QCT10菌株及其菌剂可使土壤中嗪草酮农药残留量降低50%以上,可以解决农业生产中嗪草酮农药残留超标问题。CCTCC NO: M201539220150629
【IPC分类】C12N1/20, A62D101/04, A62D101/28, A62D3/02, C12R1/01
【公开号】CN105420172
【申请号】CN201610013489
【发明人】黄星, 宋嫚, 郭素会, 成明根, 张 浩, 孙斌, 李强
【申请人】南京农业大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2016年1月8日
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