，25·I(CH 3，26-C)，23·2(CH3，27-C)，34·3(CH3，28-C)，23·4(CH 3，29-C)，27·4 (CH3,30-C)，171.1(C，l-0Ac)，20.7(CH3，l-0Ac)，171.8(C，7-0Ac)，21.1(CH 3,7-0Ac);碳原 子标记参见图I。红外波谱表明该化合物含有羟基(3446CHT1)和羰基（17280^1)基团。 1HNMR 谱显示九个甲基信号（δΗΙ .99,1.92,1.46,1.23,1.18,1.17,1.13,1.12,1.01，各3H，s)，一 个烯属质子（阳5.18，(1，1 = 2.5泡），四个含氧质子信号0!14.74，(1，1 = 7.5他；5.〇4，1^，8; 3 · 71，dd，J = 11 · 0，5 · OHz和3 · 47，t，J = 11 · OHz)。13C NMR、DEPT和HSQC谱中显示有34个碳信 号，包括九个甲基，七个亚甲基（一个含氧亚甲基），七个次甲基(两个含氧次甲基和一个烯 属次甲基），以及十一个季碳（四个羰基碳，三个含氧季碳和一个烯烃季碳KHMBC谱中，H-I 0財.74，(1，1 = 7.5抱）和!1-70!15.〇4，1^，8)分别与相应酯羰基碳0(：171.1和171.8)的相关 性表明C-I和C-7位各连有一个乙酰氧基。ROESY谱中，H-I与Me-19的交叉峰以及H-7与Me-30 的相关性表明两个乙酰氧基均为α构型。HMBC谱中H-I与C-3，C-5和C-10，H 2-2与C-3，Me-28 和Me-29与C-4，Me-19与C-I的相关性表明A环为七元内酯环。此外，通过HMBC谱中Me-19与C-5 和 C-9，Me-30 与 C-7，C-9 和 C-14，Me-18 与 C-12，C-14 和 C-17，烯烃质子 H-15 与 C-8，C-13 和 Ο-? 7 的相关性， 可知该化合物还含有B 、 C和 D环。 HMBC谱中 ，含氧亚甲 基质子H2-21 与含氧季碳 C-24(SC120.7)的相关性表明C-21和C-24之间存在氧桥。此外，Me-26和Me-27与含氧碳（δ C120.7)的交叉峰表明异丙基与C-24位相连。两个含氧碳信号（δ(：120.7，24-C; 56.7，25-C) 表明该化合物含有一个24，25-环氧基团。ROESY谱中，H-I与Me-19，Me-19与Me-29，Me-19与 Me-30，Me-30与H-7，以及Me-30与H-17的相关性表明H-I，H-7，Me-19，Me-29和Me-30为β构 型。此外，Me-18与Η-9，Η-9与Η-5，以及Η-5与Me-28的交叉峰表明它们均为α构型。综合氢谱、 碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所 示，立体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0025]实施例2:化合物（I)药理作用试验
[0026] -、材料和仪器
[0027] 腺样囊性癌细胞系SACC-M购自上海交通大学医学院口腔颂面外科实验室。化合物 (I)自制，HPLC归一化纯度大于98% ΑΡΜΙ-1640培养基、胰蛋白酶购于美国SIGMA公司。标准 胎牛血清购自邢台市汇丰生物技术研究所。Annexin-v-FITC/PI试剂盒购于北京宝赛生物 技术有限公司。PBS购于天津市光复精细化工研究所。MTT粉购于Amresco公司。二乙胺四乙 酸二钠(EDTA)购于北京益利精细化学品有限公司。青霉素、链霉素购于华北制药有限公司。 二甲基亚砜(DMSO)购于天津标准科技有限公司。Giemsa染液购于珠海贝索技术有限公司。 [0028] XYJ型医疗净化工作台（苏州净化设备有限公司），BB5060/BB16二氧化碳培养箱 (上海Heraeus公司），CX21光学显微镜（日本0LYMHJS)，XD-10198101倒置显微镜（江南公 司），流式细胞仪(Bection Dickinson Facsca Libur)，WeLLscan MK3全自动酶标仪（芬兰 LabsystemsDragon)，BFX5_320型低速离心机（中国上海於南科学仪器联营厂），GF_300型电 子天平（JapanA&DCompany，Limited)，725型超低温冰箱(Forma Scientific. Inc)，微量加 样器(EPPEND0RF公司）。
[0029]二、试验方法 [0030] 1、细胞培养
[0031] 1.1细胞复苏
[0032] 预备37°C恒温水浴箱，将液氮保存的SACC-M细胞冻存管取出，直接投入水浴箱，轻 轻摇动，待其迅速融化后，从水箱中取出冻存管，此步骤宜快，应在30-60秒内完成。之后以 75%酒精擦拭消毒管口后开启冻存管，将管内细胞悬液吸出，滴入50mL离心管并在离心管 中滴加10倍以上含10%血清的RPMI-1640培养液，轻轻吹打，使其成为细胞悬液，低速离心 (1000转/分)5分钟后，吸去上清液，再用10 %的RPMI-1640培养液洗涤一次，并再次离心，吸 去上清液后，用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养液将细胞稀释成细胞悬液，接种于50mL 培养瓶中，轻轻抒松瓶盖，然后放入C〇2培养箱中培养，第二日更换一次培养液，之后在培养 液颜色由淡红变黄后更换培养液，观察细胞爬满瓶底壁的80 %时，进行细胞传代。
[0033] 1.2细胞传代
[0034] 首先使用弯头吸管吸取原培养液后，反复吹打瓶底，之后去除瓶内旧培养液，向瓶 内加入混合消化液(0.25%胰蛋白酶和0.04%EDTA 1:1)少量（以能够完全覆盖培养瓶底为 宜），缓慢摇动瓶身使消化液浸湿瓶底，然后吸去大部分消化液，仅留少量进行消化。将培养 瓶置于CO 2培养箱内（或25°C室温下)进行消化，2~5分钟后取出培养瓶，放倒置显微镜下观 察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大，部分细胞由多角形变为圆形，且已有细胞开始悬浮时， 应立即停止消化。吸出残存的消化液，加入适量不含血清的培养液，轻轻转动培养瓶，冲掉 残留的消化液后，将其吸出，再加入新培养液，用弯头吸管吸取瓶内培养液后反复吹打瓶 底，使贴。于瓶底的细胞脱离，形成细胞悬液，注意吹打时动作要轻柔，以防用力过猛，使细 胞受损。吸取细胞悬液置于离心管内，离心后，去上清，收集细胞，加入适量含10 %胎牛血清 的RPMI-1640培养液，将细胞吹打成混悬液，计数，以1.0 X IO5AiL浓度接种在新的培养瓶 内。
[0035] 2、MTT比色试验
[0036] (1)接种细胞:取对数生长期细胞，用含有10%胎牛血清的1640培养液制成浓度为 2 X IO5AiL的单细胞悬液，接种于96孔板内，每孔IOOyL。（2)培养细胞:将上述96孔板置于CO2 培养箱，在37°C、5 % CO2以及饱和湿度条件下，继续培养24h。（ 3)加药:用药组每孔加入稀释 后的化合物(I)药液IOOyL，使其终浓度为2.5、5.0、7.5、10、12.5mmol/L;对照组每孔加100μ L不含血清的1640培养液。用药组和对照组每组均设6个复孔，并设调零孔，加药后继续培 养。（4)呈色:继续培养24h、48h和72h后，用药组和对照组每孔加入浓度为5g/L的MTT溶液20 yL，继续培养4h后，吸去全部上清液，在各孔中加入200yL的二甲基亚砜(包括调零孔），置振 荡器上振荡摇匀1分钟，使结晶充分溶解。（5)比色:将96孔板置于酶标仪上，在波长为490nm 处，测定各孔吸光度值(A)。重复实验3次，取其平均值。（6)计算并绘图：细胞增殖抑制率= (1-用药组平均A值/对照组平均A值）X 100%。根据以上公式计算各浓度的生长抑制率，然 后以时间为横轴，抑制率为纵轴，绘制5个浓度的抑制率曲线。
[0037] 3、流式细胞术检测
[0038] 3.1细胞的处理
[0039]细胞接种、培养后，取对数生长期细胞，以2 X IO5AiL浓度接种于6孔板中，而后加 药，设时间对比组、浓度对比组和对照组(正常凋亡组）：（1)时间对比组:将细胞接种于6孔 板中，培养24小时，细胞贴壁后，用吸管沿各孔壁将原培养液彻底吸出，然后于各孔加入等 量的终浓度为12.5mmol/L含化合物（I)药液的培养液(用药组）。加入不含化合物（I)的培养 液作为对照组，分别继续培养24h、48h、72h。（2)浓度对比组:细胞接种并贴壁成功后，用吸 管彻底吸净原培养液，各孔中分别加入终浓度为2.5、5.0、7.5、10、12.5mmol/L的含化合物 (I)培养液（用药组）。对照组加入不含化合物（I)的培养液，继续培养721!。（3)正常凋亡组： 接种细胞并贴壁成功后，去除各孔中原培养液，加入不含化合物（I)的培养液，继续培养 24h、48h、72h。
[0040] 3.2样品的制备
[0041] (1)收集细胞:分别吸取6孔板各孔上清液，加入离心管中，取PBS液2mL漂洗6孔板 各底壁后，倒入同一离心管内，然后将2mL混合消化液滴入各孔中消