实施例2
[0040] 将心天冬氨酸α-脱簇酶发酵菌液经高频超声破碎，取破碎后的发酵菌液化，不使 用纯水稀释。揽拌升溫至40°C，再加入25ml的pH值为7.0的天冬氨酸氨水溶液混合后进行催 化反应，在40°C下持续向反应体系加入天冬氨酸固体，调节反应体系pH值为6.0-8.0反应 2地。分别在1化和24h取样，使用高效液相色谱检测天冬氨酸残留与β-丙氨酸含量，检测结 果如下表，结果表明24h天冬氨酸总投料量103. Ig，i3-丙氨酸的选择性为89.1%。
[0041]
[0042] ~将所得反应物进行过滤、脱色、结晶处理，即得β-丙氨酸。
[0043] 经HPLC检测计算，本方法β-丙氨酸的转化率达87.1 %，β-丙氨酸的纯度达92.3%。
[0044] 实施例3
[0045] 按照实施例2的方法，区别点仅在于高频超声破碎后的发酵菌液使用纯水稀释1倍 后加入维生素 C憐酸醋0.5g，同样条件下反应2地。分别在1化和24h取样，使用高效液相色谱 检测天冬氨酸残留与β-丙氨酸含量，检测结果如下表，结果表明同实施例1未加酶稳定剂维 生素 C憐酸醋相比，在24h内β-丙氨酸的时空收率提高41 %，β-丙氨酸的选择性提高到为 97.8%。 Γ004Α1
[0047]将所得反应物进行过滤、脱色、结晶处理，即得β-丙氨酸。
[004引经HPLC检测计算，本方法β-丙氨酸的转化率达96.4%，β-丙氨酸的纯度达98.4%。
[0049] 实施例4
[0050] 按照实施例1的方法，区别点仅在于将酶催化反应溫度调整为50°C。分别在12h和 24h取样，使用高效液相色谱检测天冬氨酸残留与β-丙氨酸含量，检测结果如下表，结果表 明在24h天冬氨酸总投料量101.5g，i3-丙氨酸的选择性为92%。
[0化1 ]
[0052]将所得反应物进行过滤、脱色、结晶处理，即得β-丙氨酸。
[0化3] 经HPLC检测计算，本方法β-丙氨酸的转化率达88.7%，β-丙氨酸的纯度达91.9%。 [0054] 实施例5
[0055]按照实施例4的方法，区别点仅在于高频超声破碎后的发酵菌液使用纯水稀释1倍 后加入维生素拥溝酸醋〇.25g，同样条件下反应2地。分别在1化和24h取样，使用高效液相色 谱检测天冬氨酸残留与β-丙氨酸含量，检测结果如下表，结果表明同实施例1未加酶稳定剂 维生素 C憐酸醋相比，在24h内β-丙氨酸的时空收率提高41.2%，β-丙氨酸的选择性提高到 为 98.0%。
[0化6]
[0057]~将所得反应物进行过滤、脱色、结晶处理，即得β-丙氨酸。
[0化引经HPLC检测计算，本方法β-丙氨酸的转化率达97.5%，β-丙氨酸的纯度达98.7%。
[0059] 对比例1
[0060] 按照实施例1的方法，区别点仅在于不加入抑为7.0的天冬氨酸氨水溶液，分别在 1化和24h取样，使用高效液相色谱检测天冬氨酸残留与β-丙氨酸含量，检测结果如下表，结 果表明在24h天冬氨酸总投料量78.9g，i3-丙氨酸的选择性为90.2%。
[0061]
[0062] ~将所得反应物进行过滤、脱色、结晶处理，即得β-丙氨酸。
[0063] 经HPLC检测计算，本方法β-丙氨酸的转化率达88.2%，β-丙氨酸的纯度达92.6%。
[0064] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可W对之作一些修改或改进，运对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的运些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种提高L-天冬氨酸α-脱羧酶生物活性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步 骤： 1) 将L-天冬氨酸α-脱羧酶发酵菌液破碎，将所述破碎后的发酵菌液用纯水稀释； 2) 加入天冬氨酸氨水溶液，调节该反应体系pH值为6.0-8.0。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)还包括向破碎后的发酵菌液中加入 维生素 C磷酸酯；优选地，所述加入维生素 C磷酸酯的重量与所述发酵菌液体积的比例为 0.01-0.10g/L〇3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，采用高频超声方法破碎所述发酵菌液。4. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述破碎后的发酵菌液使用纯水稀释 0-2 倍。5. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述天冬氨酸氨水溶液的pH值 为6.0-8.0,优选为7.0。6. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述天冬氨酸氨水溶液用量为 总反应体积的0.5 % -2 %。7. -种β_丙氨酸的制备方法，其特征在于，包括按权利要求1-6任一项所述方法制得反 应体系;还包括持续向所述反应体系加入天冬氨酸固体，调节反应体系pH值为6.0-8.0;将 所得反应物进行过滤、脱色、结晶处理，即得β-丙氨酸。8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，向所述反应体系加入天冬氨酸固体后调节 所述反应体系温度为20_65°C。9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述反应体系温度调节为30-50°C。10. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 将L-天冬氨酸α-脱羧酶发酵菌液经高频超声破碎，将所述破碎后的发酵菌液用纯水 稀释0-2倍;加入维生素 C磷酸酯;所述加入维生素 C磷酸酯的重量与稀释前所述发酵菌液体 积的比例为0 · 01 -ο · 1 〇g/L; 2) 加入pH值为7.0的天冬氨酸氨水溶液;调节该反应体系pH值为6.0-8.0; 3) 持续向反应体系加入天冬氨酸固体，调节反应体系pH值为6.0-8.0,反应温度为30-50°C； 4) 将所得反应物进行过滤、脱色、结晶处理，即得β_丙氨酸。
【专利摘要】本发明提供了一种提高L-天冬氨酸α-脱羧酶生物活性的方法，包括将L-天冬氨酸α-脱羧酶发酵菌液破碎，用纯水稀释；加入天冬氨酸氨水溶液；调节pH值为6.0-8.0。本发明方法大大提高了L天冬氨酸α脱羧酶的活性，时空收率提高30％-50％，选择性提高到98％以上。
【IPC分类】C12P13/06, C12N9/88
【公开号】CN105543202
【申请号】CN201610070973
【发明人】张飞, 张渊, 杨为华, 徐斌, 纪传侠, 潘成莉
【申请人】安徽丰原发酵技术工程研究有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月28日