毒株或分离株、或者预防由一 或多种H7流感病毒毒株或分离株所致流感感染或疾病的方法。在运个实施方案中，所述方 法包括给有需要的对象施用治疗有效量的本发明所述单克隆抗体如鼠 mAb 11B9或mAb 62 或者嵌合的或人源化单克隆抗体或者其抗原结合片段、包含编码所述抗体或抗体片段的多 核巧酸的核酸分子、包含所述多核巧酸的载体、或者表达所述载体的细胞。在一个实施方案 中，所述对象是免疫功能低下的，是婴儿、幼儿或老人。在另一个实施方案中，所述施用提供 了治疗益处。在再一个实施方案中，所述治疗益处包括抑制流感病毒滴度的增加、降低流感 病毒滴度、抑制流感病毒复制的增加、降低流感病毒复制、抑制流感病毒增殖的增加或者降 低流感病毒增殖，或者降低对象中与流感病毒感染相关的一或多个症状或并发症的进展、 严重度、频率、持续时间或可能性。在一个实施方案中，所述症状或并发症选自发冷、发热、 咳嗽、咽喉痛、鼻充血、窦充血、鼻感染、窦感染、身体疼痛、头痛、疲劳、肺炎、支气管炎、耳感 染、耳痛和死亡。在另一个实施方案中，所述治疗益处包括促进对象从H7流感病毒感染中康 复。在进一步的实施方案中，给对象施用的药剂是在对象感染流感H7病毒之前、基本同时或 之后施用。
[0070] 本发明的抗体可W使用已知技术制备为生理学可接受的配制物，可包含药物可接 受的运载体、稀释剂和/或赋形剂。例如，将本发明的及如本文所述的抗体包括任何功能性 等价抗体或其功能部分与药物可接受的运载体、稀释剂和/或赋形剂组合W形成药物组合 物。合适的药物运载体、稀释剂和/或赋形剂为本领域熟知，包括例如憐酸盐缓冲盐水溶液、 水、乳状液如油/水乳状液、各种类型增湿剂、无菌溶液等。
[0071] 本发明的药物组合物的配制可W根据本领域技术人员已知的标准方法实现。见例 如通过引用并入本文的Remington:The Science and Practice of Pharma巧，21st Ed., Ed.D.B.Troy,Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,2006。
[0072] 本发明的组合物可W固体、液体或气雾剂形式W合适的药物有效剂量给对象施 用。举例的固体组合物包括丸剂、乳霜和可植入的剂量单位。丸剂可W 口服。治疗性乳霜可 W局部施用。可植入的剂量单位可W局部施用（例如在肿瘤部位），或者可W植入W全身性 释放治疗组合物(例如皮下植入）。举例的液体组合物包括适合肌肉、皮下、静脉内、动脉内 注射的配制物，及适于局部和眼内施用的配制物。举例的气雾剂配制物包括向肺部施用的 吸入性配制物。
[0073] 组合物可W通过标准施用途径施用。通常地，组合物可W通过局部、口服、直肠、 鼻、皮内、腹膜内或肠道外(例如静脉内、皮下或肌肉注射)途径施用。此外，组合物可W渗入 缓释基质如可生物降解的聚合物中，该聚合物植入希望施用的部位附近，例如在肿瘤部位。 所述方法包括施用单一剂量，在预定时间间隔施用重复剂量，及在预定时间持续施用。如本 文所用，持续释放基质是由通常为聚合物的材料制成的基质，所述聚合物可通过酶或酸/碱 水解或通过溶解而降解。一旦插入机体，所述基质通过酶和体液起作用。持续释放的基质选 自生物相容的材料如脂质体、聚交醋(聚乳酸）、聚乙交醋（乙醇酸的聚合物）、聚交醋共乙交 醋(乳酸与乙醇酸的共聚物）、聚酢、聚(正)醋、多肤、透明质酸、胶原、硫酸软骨素、簇酸、月旨 肪酸、憐脂、多糖、核酸、聚氨基酸、氨基酸如苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、多核巧酸、聚乙締 丙締、聚乙締化咯烧酬和娃树脂。优选的可生物降解的基质是聚交醋、聚乙交醋或聚交醋共 乙交醋(乳酸与乙醇酸的共聚物)之一的基质。
[0074] 本发明的组合物可W与其它组合物组合施用，所述其它组合物包含生物活性物质 或化合物，特别是选自如下一组的至少一种化合物:抗氧化刺激的化合物，抗调亡化合物， 金属馨合物，DNA修复抑制剂如赃仑西平和代谢物，3-氨基-1-丙横酸(3APS)，1，3-丙烷二横 酸（1，3PDS)，α-分泌酶激活物，β-和丫-分泌酶抑药剂，τ蛋白，神经递质，β-折叠破坏剂，淀 粉样β清除/耗竭细胞成分，Ν-末端截短的淀粉样β抑制剂包括焦谷氨酸化淀粉样盼-42,抗 炎分子，"非典型抗精神病药"如氯氮平、齐拉西酬、利培酬、阿立赃挫或奥氮平或者胆碱醋 酶抑制剂(化Els)如他克林、利斯的明、多奈赃齐和/或加兰他敏，Ml激动剂及其它药物包括 任何淀粉样或τ修饰药物和营养补充剂如维生素 B12，半脫氨酸，乙酷胆碱前体，卵憐脂，胆 碱，银杏(Ginkgo biloba)，乙酷-k肉毒碱，艾地苯酿，丙戊茶碱，或者黄嚷岭衍生物，W及 本发明的抗体，及任选药物可接受的运载体和/或稀释剂和/或赋形剂及治疗疾病的程序。 [00对蛋白质药物活性物质可Wlng-lOmg/剂的量存在。通常地，施用方案应在0.化g- lOmg本发明抗体范围之间，特别是在l.Oyg-l .Omg，及更特别是在1 .Oyg-lOOyg范围之间，运 些范围内的所有个体数值均也是本发明的一部分。如果通过持续注入形式施用，更合适的 剂量可W是在0.01 yg-lOmg单位/kg体重/小时之间，在运些范围内的所有个体数值均也是 部分的一部分。
[0076] 通常是肠道外施用，例如静脉内注射。肠道外施用的制备物包括无菌水性或非水 性溶液、悬浮液和乳状液。非水性溶剂包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄揽油，及 可注射有机醋如油酸乙醋。水性溶剂可W选自水、乙醇/水溶液、乳状液或悬浮液，包括盐水 和缓冲剂。肠道外运载体包括氯化钢溶液、Ringer's葡萄糖、葡萄糖和氯化钢、乳酸化 Ringer's或者不挥发油。静脉内运载体包括液体和营养补充剂、电解质补充剂（如基于 Ringer's葡萄糖的那些补充剂）等。也可W存在防腐剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、馨合 剂、惰性气体等。
[0077] 药物组合物可进一步包含蛋白质运载体如血清白蛋白或免疫球蛋白，特别是人来 源的。进一步地，根据指定用途，生物活性剂可W存在于本发明的药物组合物中。
[0078] 第Ξ方面，本发明提供了使用本文描述的单克隆抗体或其片段鉴别、表征和定量 H7表达的方法和组合物。在一些实施方案中，所述单克隆抗体是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在一 个实施方案中，册表达与H7流感病毒的HA表达相关。在一个实施方案中，所述组合物包含本 文描述的单克隆抗体或其片段。在一些实施方案中，所述单克隆抗体是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在另一个实施方案中，所述方法包括检测H5与本文描述的单克隆抗体或其片段的结合。 在一些实施方案中，所述单克隆抗体是鼠 mAb 11B9或mAb62。在一个实施方案中，本发明设 及利用运种单克隆抗体或相关结合蛋白的免疫巧光测定（IFA)、免疫组织化学测定及其它 方法，包括ELI SA、血凝抑制化I)测定及病毒中和(VN)测定。所有运些测定为本领域技术人 员熟知。在一个实施方案中，可W利用如本文所述的双功能的ELISA。
[0079] 在一些实施方案中，鉴别和/或定量H7表达的方法和组合物是用于鉴别和/或定量 疫苗中的H7病毒免疫原性物质。在一个实施方案中，所述免疫原性物质包含血凝素或其抗 原性部分或者编码血凝素或其抗原性部分的核酸。在另一个实施方案中，所述抗原性部分 包括血凝素的表位。在一个实施方案中，所述免疫原性物质是包含血凝素的病毒。在另一个 实施方案中，所述病毒是灭活的。在再一个实施方案中，所述病毒是减毒的病毒。在另一个 实施方案中，所述病毒是病毒体形式。在进一步的实施方案中，所述病毒得自蛋或细胞培 养。在另一个实施方案中，所述免疫原性物质是包含血凝素的分裂病毒或者分裂病毒抗原 性制备物。在一个实施方案中，所述免疫原性物质是血凝素或其抗原性部分。在另一个实施 方案中，所述血凝素或其抗原性部分已经分离。在再一个实施方案中，所述血凝素或其抗原 性部分是通过表达系统产生的。在一个实施方案中，所述表达系统是任何表达系统，如病毒 表达载体，其中血凝素或其抗原性部分呈现或展示在病毒表面上。在一个实施方案中，所述 病毒表达载体是任何病毒表达载体，如修饰的痘苗病毒表达载体、腺病毒表达载体、痘病毒 表达载体、杆状病毒表达载体等。在一个实施方案中，所述表达载体是杆状病毒表达载体， 且呈现或展示血凝素或其抗原性部分的病毒是杆状病毒。在另一个实施方案中，所述免疫 原性物质是编码血凝素或其抗原性部分的核酸，其能在对象中表达。
[0080]第四方面，本发明提供了检测生物样品中甲型流感H7亚型病毒或者检测生物样品 中针对甲型流感H7血凝素的抗体(在此称作抗-H7抗体）的试剂盒和方法。在检测生物样品 中甲型流感H7亚型病毒的一个实施方案中，所述方法包括将样品与第一抗体接触，第一抗 体是如本文所述单克隆抗体或其抗体片段(有时称作捕获抗体）。在另一个实施方案中，所 述方法进一步包括将样品与本文所述第二抗体或其抗体片段接触，第二抗体或其抗体片段 特异性结合甲型流感H7血凝素的表位，其中第二抗体含有或者与可检测元件缀合(有时称 作检测抗体）。在检测生物样品中甲型流感H7亚型病毒血凝素的抗体的一个实施方案中，所 述方法包括将已经加入甲型流感H7亚型病毒的对照H7血凝素(在此有时称作对照H7抗原） 的样品与第一抗体接触，第一抗体是如本文所述的单克隆抗体或其抗体片段(有时称作捕 获抗体）。在另一个实施方案中，所述方法进一步包括将样品与如本文所述的第二抗体或其 抗体片段接触，第二抗体或其抗体片段特异性结合甲型流感H7亚型病毒的表位，其中第二 抗体含有或与可检测元件缀合(有时称作检测抗体）。在一些实施方案中，第二抗体含有放 射性原子，与巧光分子缀合，或者与酶缀合。在其它实施方案中，第一抗体固定在固体表面 上。在一些实施方案中，第一单克隆抗体是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在其它实施方案中，第二 单克隆抗体是mAb 11B9或mAb 62。在一个实施方案中，对照H7抗原是重组H7抗原。在另一个 实施方案中，对照H7抗原是表面表达H7的病毒如杆状病毒。在一个实施方案中，本发明设及 利用运种单克隆抗体或相关结合蛋白的免疫巧光测定（IFA)、免疫组织化学测定及其它方 法，包括化ISA、血凝抑制化I)测定和病毒中和(VN)测定。在一个实施方案中，利用如本文所 述的双功能化ISA测定。
[0081 ]在一个实施方案中，所述测定是双功能ELISA，其对于H7禽流感病毒的抗原和抗体 检测均有效。在一个实施方案中，mAb 11B9或mAb 62之一用作捕获抗体，mAb 11B9或mAb 62 的另一种用作检测抗体。在一个实施方案中，捕获抗体包被在固相上，如微滴定板、微珠等。 为了检测生物样品中的抗原，将样品与捕获抗体接触足W使得样品中的任何H7抗原均与捕 获抗体结合的一段时间。然后将检测抗体与已结合的样品H7抗原(如果有的话)接触足W使 得检测抗体结合已结合的样品H7抗原的一段时间。然后确定任何检测抗体的结合情况，W 确定样品中H7抗原的存在和/或量。为了检测生物样品中的抗-H7抗体，将对照H7抗原加入 生物样品中制备混合物。在一个实施方案中，在生物样品中加入固定量的对照H7抗原。对照 H7抗原结合生物样品中也许存在的任何抗-H7抗体。然后将混合物与捕获抗体接触足W使 得对照H7抗原结合捕获抗体的一段时间。如果抗-H7抗体存在于生物样品中，则结合捕获抗 体的对照H7抗原中的一些将结合抗-H7抗体，且结合捕获抗体的对照H7抗原中的一些将游 离于结合的抗体。在一个实施方案中，对照H7抗原是重组H7抗原。在另一个实施方案中，对 照H7抗原是表面表达H7的病毒如杆状病毒。然后将检测抗体与未被样品H7抗体(如果有的 话)结合的任何结合的对照H7抗原接触一段时间，所述时间足W使得检测抗体结合未被样 品H7抗体结合的结合的对照H7抗原。然后确定检测抗体的结合情况，W确定样品中H7抗体 的存在和/或量。在一个实施方案中，结合的检测抗体的水平降低表示生物样品中存在抗- H7抗体。
[0082]在一个实施方案中，试剂盒包含第一抗体，其是本文所述单克隆抗体或其抗体片 段W及进行检测甲型流感H7亚型病毒的测定的说明书。在一些实施方案中，所述单克隆抗 体是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在另一个实施方案中，所述试剂盒进一步包含第二抗体，其特异 性结合甲型流感病毒的H7血凝素的表位，其中第二抗体含有或者与可检测元件缀合。在一 些实施方案中，第二抗体是mAb 11B9或mAb 62。在一些实施方案中，第二抗体含有放射性原 子，与巧光分子缀合，或者与酶缀合。在其它实施方案中，第一抗体固定在固体表面上。在另 一个实施方案中，试剂盒进一步包含H7血凝素抗原。在一些实施方案中，H7血凝素抗原是重 组H7蛋白。在其它实施方案中，H7血凝素抗原是表面表达Η 7的病毒如杆状病毒。在一个实 施方案中，所述试剂盒可用于鉴别和/或定量疫苗中的Η7病毒免疫原性物质。在另一个实施 方案中，所述试剂盒可用于检测生物样品中的Η7血凝素或者针对Η7血凝素的抗体。在一些 实施方案中，所述试剂盒设及利用运种结合蛋白的免疫巧光测定(IFA)、免疫组织化学测定 及其它方法，包括化ISA、血凝抑制化I)测定和病毒中和(VN)测定。所有运些测定均为本领 域技术人员熟知。在一些实施方案中，可利用如本文所述的双功能ELISA。
[00削在本研究中，表征了针对H7HA1的一组mAb,并鉴定其代表性中和表位。在用册AI H7N7病毒感染攻击的小鼠中评估运些mAb的预防效力。通过观测体重丧失、存活率及感染的 小鼠肺中病毒荷载清除率的动力学确定效力。
[0084] 如本文所示，在H7N1免疫的小鼠中产生的mAb 11B9和mAb 62能特异性结合及中和 不同的H7流感病毒毒株。基于其中和活性，使用逃逸突变体测序鉴别两个mAb的中和表位。 被动施用抗体仍是对抗流行性感冒的策略。因此，在小鼠中根据存活百分比和体重百分比 评估两种抗H7流感病毒的mAb的预防效力。在单一剂量中施用mAb 11B9或mAb 62在小鼠模 型中示出针对致死性H7N7流感的100%保护作用。用运两种mAb治疗帮助控制感染的初始进 程，因此使得动物增加有效的免疫应答。运些研究示出使用mAb 11B9或mAb 62的被动免疫 治疗在预防高致病性H7N7感染中是有效工具，提供了将来流感流行需要的立即免疫力。运 种方法的临床应用通过人源化运些抗体及在用H7N7流感病毒攻击的非人灵长类动物中作 为治疗剂进行评估而进一步确定。
[0085] 除非特别指出，实施本发明是应用本领域技术人员已知的常规化学、分子生物学、 微生物学、重组DNA技术、遗传学、免疫学、细胞生物学、细胞培养和转基因生物学技术进行， 见例女日Maniatis et al. , 1982 .Molecular Clonin邑（Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York)；Sambrook et al.,1989.Molecular Cloning,2nd Ed.(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York)；Sambrook and Russell,2001.Molecular Cloning,3rd Ed.(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York);Green and Sambrook,2012,Molecular Cloning, 4th Ed.(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, New York); Ausubel et al.,1992,Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley&Sons, including periodic updates);Glover ,1985,DNA Cloning(IRL Press.Oxford)； Russell,1984,Molecular biology of plants :a laboratory course manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.)；Anand,Techniques for the Analysis of Complex Genomes ,(Academic Press ,New York,1992)；Guthrie and Fink,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology(Academic Press,New York, 1991);Harlow and Lane，1988，Antibodies，（Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,New York)；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Hames&S.J.Higgins eds.1984)；Transcription And Trans1ation(B.D.Hames&S.J.Higgins eds.1984); Culture Of Animal Cells(民.I.Freshney，Alan 民.Liss，Inc.，1987);Immobilized Cells And Enzymes(I民L Press，1986);B.Perbal，A Practical Guide To Molecular Cloning (1984)；the treatise,Methods In Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Methods In Enzymology，Vols.154and 155(Wu et al.eds.)，Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Mayer and Walker，eds.，Academic Press，London，1987); Handbook Of Experimental Immunology，Volumes I-IV(D.M.Weir and C.C.Blackwell， eds.,1986);民iott,Essential Immunology，6 th Edition ,Blackwel1 Scientific Publications,Oxford,1988；Fire et al.，民NA Interference Technology:From Basic Science to Drug Development，Cambridge University Press，Cambridge，2005; Schepers，RNA Interference in Practice,Wiley-VCH,2005；EngeIke,RNA Interference (RNAi):The N