挑取菌落边缘的菌丝接入PDA培养基中，在25°C下培养7天，7天后可看到明显的菌落，再次挑取菌落边缘的菌丝接入TOAP培养基中，于25°C下培养7天，7天后可看到明显的菌落。
[0026]复壮:再次挑取菌落边缘的菌丝接入培养基(每升中土豆20g，蛋白胨2.5g，大豆蛋白2.5g，糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾Ig，琼脂20g，pH5.6-5.8)中，于25 °C下培养7天，即可得到洁白长势旺的菌种。
[0027]5)将所得菌种进行出菇实验。
[0028]以新鲜子实体组织分离出的菌种为对照组(I)原种培养
原种培养基配方为:甘蔗渣78%、麦麸20%、石膏1%、蔗糖1%，料水比为1:1.5，PH5.6-5.8，将料拌好装入650ml的瓶中，高压灭菌，冷却后分别接入，将新鲜子实体组织分离出的菌种和干子实体组织分离出的菌种接种，新鲜子实体组织分离出的菌种为对照组，干子实体组织分离出的菌种为处理组，各接种50瓶，在25°C的发菌室中发菌。(2)栽培出燕
栽培培养基配方为:甘蔗渣80%、麦麸18%、石膏1%、蔗糖1%，料水比为1:1.5，？!15.6-5.8，将料拌好，装入15x26CM的袋中，每袋装干料300g，高压灭菌，冷却后分别接入对照组和处理组的原种，各接100袋，在25的发菌室中发菌，待菌丝长满后移入出菇房中进行出菇。处理组和对照组的物学效率分别为67.8%和50.2%，处理组的出菇整齐，朵大。
[0029]6)用不完的菌种放入4°C环境下保藏。
[0030]实施例2
除采用风干并于4°C下保藏一年之后的子实体之外，其余与实施例1 一致。所得结果为:成功分离获得菌种，进行栽培出菇实验时，生物学效率为66.3%和50.2%，相较于对照组，出燕整齐、朵大。
[0031]对比实施例1
风干的白参菌子实体用75%酒精的消毒30s，在加入0.1%的氯化汞消毒2min，4min，8min, 1min , 12min , 16min , 18min，20min然后将其接入培养基(每升中土豆20g，蛋白胨2.5g，大豆蛋白2.5g，糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾Ig，琼脂20g，pH5.6-5.8 )，于25 °C下培养，处理2min, 4min, 8min, 1min的均全部污染，处理12min, 16min的有部分污染，其余的全死亡，处理18min，20min的无污染，但全部死亡。
[0032]对比实施例2
无菌条件下，取0.5-lcm2大小的风干的白参菌子实体菌盖和基部组织，分别用无菌水浸泡，完全软化后，放入灭过菌的研钵，加入无菌水lml，研磨制备组织悬液，分别取组织悬液接种于培养基(每升中土豆20g,蛋白胨2.5g,大豆蛋白2.5g，糖20g,硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾lg，琼脂20g，pH5.6-5.8)和麦粒培养基中；在25°C避光培养，三天后全被真菌和细菌污染，此时并未有白参菌丝长出，也无法进行纯化，7天后污染菌盖过整个培养基。
[0033]对比实施例3
直剪取白参菌干子实体长Icm的基部，用75%酒精的消毒30s，在加入0.1%的氯化汞消毒llmin，在无菌环境下用手术刀切取基部内的组织于培养基中(每升中土豆20g，蛋白胨2.5g，大豆蛋白2.5g，糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾Ig，琼脂20g，pH5.6-5.8)，在25 °C避光培养，三天后全被真菌污染，也未见白参菌丝长出。
[0034]对比实施例4
直接收集风干白参菌的孢子，于无菌环境下接入培养基中(每升中土豆20g，蛋白胨2.5g，大豆蛋白2.5g，糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾Ig，琼脂20g，pH5.6-5.8)，在25 °C避光培养，三天后孢子还没萌发，培养基就以被细菌污染，7天后真菌污染盖过培养基。
【主权项】
1.一种白参菌风干子实体菌种分离方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤: 1)将自然风干的白参菌子实体用无菌水泡开发胖； 2)将步骤I)所得子实体于12°C下培养7-10天，取菌柄基部长出的白色菌丝； 3)将步骤2)所得菌丝放入培养基中培养得到菌落； 4)对步骤3)所得菌落进行纯化处理后，再进行复壮处理，即得菌种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I)中，浸泡时，水温为室温，时间为3小时。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中的培养方法为:将所得白参菌子实体装入组培瓶中，用无菌水将纱布打湿盖住瓶口，放入人工气候培养箱中遮光培养，湿度保持在80%-85%，温度设置在12 0C培养7-10天。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中取白色菌丝时的方法为:剪取带有白色菌丝0.5cm?1.0cm长的白参菌菌柄基部，然后移入洁净台中，用长而细的针或铁丝轻轻挑取菌柄基本的白色菌丝。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中的培养温度为12°C。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中的培养基的成分为:每升培养基中含土豆20 g、蛋白胨2.5 g、大豆蛋白2.5 g、糖20 g、硫酸镁0.5 g、磷酸二氢钾I g、琼脂20 g,pH=5.6-5.8o7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中的纯化处理方法为:挑取步骤3)所得菌落边缘的菌丝接入TOA培养基中，在25°C下培养7天，得到一次纯化后菌落;再次挑取一次纯化后菌落边缘的菌丝接入PDAP培养基中，于25°C下培养7天，7天后可看到明显的菌落。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中的复壮处理方法为:挑取纯化后菌落边缘的菌丝接入培养基中，于25°C下培养7天，即得到洁白长势旺的菌种;所述培养基的成分为:每升培养基中含土豆20 g、蛋白胨2.5 g、大豆蛋白2.5 g、糖20 g、硫酸镁0.5 g、磷酸二氢钾I g、琼脂20 g,pH=5.6-5.80
【专利摘要】本发明提供了一种白参菌风干子实体菌种分离方法，该方法包括如下步骤：1）将自然风干的白参菌子实体用无菌水泡开发胖；2）将步骤1）所得子实体于12℃下培养7-10天，取菌柄基部长出的白色菌丝；3）将步骤2）所得菌丝放入培养基中培养得到菌落；4）对步骤3）所得菌落进行纯化处理后，再进行复壮处理，即得菌种。本发明解决了利用白参菌新鲜子实体获取菌种所面临的受季节性因素限制、新鲜子实体贮藏成本高、易污染等缺点，实现了可以在全年任何时间进行菌种分离和栽培出菇；本发明大幅提高了白参菌出菇的生物学效率，提升幅度高达35%；利用本发明方法所得菌种进行栽培出菇时，所得菌菇更为整齐、朵更大。
【IPC分类】C12N1/14, C12N1/02, C12R1/645
【公开号】CN105567571
【申请号】CN201510972853
【发明人】李蕾, 丁长春, 周利宏
【申请人】文山学院
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月23日