一种二羟基丙酮的合成方法_2

文档序号:9919823阅读:来源:国知局
°C,密封发酵5?8天,待发酵结束,再向其中加入土壤菌种质量5?8%硫酸盐还原菌,提升温度至38?55°C,继续密封发酵3?5天,得发酵后的土壤还原菌种液;随后在无菌平皿中加入筛选培养基,加入量为无菌平皿体积的1/4,之后在筛选基表面覆盖5张无菌滤纸,并将上述得到的土壤还原菌种液滴加到滤纸上,在温度50?600C,湿度30?50%下培养3?5天,之后选取培养基表面覆盖的第三张滤纸,轻轻将滤纸上面的孢子刮下,加入去离子水分别稀释成10—4、10—5、10—6 CFU/mL,分别均匀涂抹在平板上,在温度27?28°C,湿度35?40%的条件下培养5?8天;待培养结束,选取菌落形态好、菌落密度适宜的平板,从此平板上挑选单菌落接种至筛选培养基,在温度27?28°C,湿度35?40%的条件下培养3?5天,之后从培养好的筛选培养基上挖取0.5?0.8cm2的菌苔接种到种子培养基中,在温度27?28°C,湿度35?40%的条件下摇瓶培养20?25h,然后测定效价,挑选出高纯菌株,放入发酵罐中,并向其中加入发酵罐体积1/5的清水,混合后,密封发酵罐,在35?40°C,湿度为30?45%条件下发酵25?35h,待发酵结束,离心分离,得含有二羟基丙酮的滤液;最后将上述含有二羟基丙酮的滤液放入容器中,于45°C下真空蒸发至原有体积的1/3,得浓缩液,随后将得到的浓缩液中加入浓缩液质量2?3倍质量浓度为75 %乙醇溶液,搅拌后再于45°C下真空蒸发至原有体积的1/2,重复操作3?5次,直至出现结晶时,立即将容器置于-5?_3°C的冰水中,持续搅拌,直至产生大量晶体为止,之后将得到的晶体放入干燥箱内干燥,控制干燥箱温度为35?45°C,干燥25?35min,即可得到一种二羟基丙酮。
[0014]其中筛选培养基是由5?8g蛋白陈、3?6g酵母膏、50?10g甘油、10?12g山梨醇、15?20g葡萄糖、13?15g琼脂以及300?400g去离子水,在pH值为7.0的条件下混合而成;种子培养基是由20?30mL甘油、5?8g酵母提取粉、10?12g蛋白陈、3?6g琼脂以及250?280g去离子水,在pH值为4.8?5.8的条件下混合而成。
[0015]实例I
首先称取600g新鲜柠檬,洗净切片后,放入榨汁机中,榨汁5min,得澄清柠檬汁,倒入2L的烧杯中,并向烧杯中加入100mL质量浓度为80%乙醇溶液,混合均匀,置于超声振荡仪中,在超声频率为25KHz,超声功率为100W下振荡反应Ih,随后过滤去除滤渣,得滤液放入索氏抽提器中,抽提40min,收集滤液抽提液,移入蒸馏装置中,在65°C下加热25min,蒸馏去除乙醇,得柠檬提取液;然后称取1g肌醇、0.2g烟酸、0.0lg烟酸硫胺素、25g蔗糖以及6g琼脂倒入装有IL蒸馏水的烧杯中,用搅拌棒充分搅拌均匀,再用可调动液器向其中加入0.3mg吲哚乙酸,继续保持搅拌状态2min后,用上述得到的柠檬酸提取液调整pH至5.8,待pH调整结束,将混合物放入灭菌锅中灭菌30min,得培养基;之后将上述得到的培养基放入冷浴锅中,冷却至30°C时,立刻倒入培养皿中,倒入量为培养皿体积的2/3,凝固后制成平板,随后用铲子铲取200g离地面5cm处的土壤,放入容器中,并向容器中加入土壤质量3倍去离子水,形成土壤悬浮液,并将得到的土壤悬浮液用无菌吸管涂布均匀于制成的平板上,待涂布结束,放入保温箱中,在温度25°C下培养8天,得土壤菌种;接下来将上述得到的土壤菌种放入发酵罐中,并向其中加入土壤菌种质量20%清水,混合均匀后,控制发酵罐温度为35°C,密封发酵5天,待发酵结束,再向其中加入土壤菌种质量5%硫酸盐还原菌,提升温度至38°C,继续密封发酵3天,得发酵后的土壤还原菌种液;随后在无菌平皿中加入筛选培养基,加入量为无菌平皿体积的1/4,之后在筛选基表面覆盖5张无菌滤纸,并将上述得到的土壤还原菌种液滴加到滤纸上,在温度50°C,湿度30%下培养3天,之后选取培养基表面覆盖的第三张滤纸,轻轻将滤纸上面的孢子刮下,加入去离子水分别稀释成10—4、10—5、10—6 CFU/mL,分别均匀涂抹在平板上,在温度27°C,湿度35%的条件下培养5天;待培养结束,选取菌落形态好、菌落密度适宜的平板,从此平板上挑选单菌落接种至筛选培养基,在温度27 V,湿度35 %的条件下培养3天,之后从培养好的筛选培养基上挖取0.5cm2的菌苔接种到种子培养基中,在温度27°C,湿度35%的条件下摇瓶培养20h,然后测定效价,挑选出高纯菌株,放入发酵罐中,并向其中加入发酵罐体积1/5的清水,混合后,密封发酵罐,在35°C,湿度为30%条件下发酵25h,待发酵结束,离心分离,得含有二羟基丙酮的滤液;最后将上述含有二羟基丙酮的滤液放入容器中,于45°C下真空蒸发至原有体积的1/3,得浓缩液,随后将得到的浓缩液中加入浓缩液质量2倍质量浓度为75%乙醇溶液,搅拌后再于45°C下真空蒸发至原有体积的1/2,重复操作3次,直至出现结晶时,立即将容器置于-5°C的冰水中,持续搅拌,直至产生大量晶体为止,之后将得到的晶体放入干燥箱内干燥,控制干燥箱温度为35 °C,干燥25min,即可得到一种二羟基丙酮。其中筛选培养基是由5g蛋白陈、3g酵母膏、50g甘油、102g山梨醇、15g葡萄糖、13g琼脂以及300g去离子水,在pH值为7.0的条件下混合而成;种子培养基是由20mL甘油、5g酵母提取粉、1g蛋白陈、3g琼脂以及250g去离子水,在pH值为4.8的条件下混合而成。
[0016]本实例操作简单易行,使用时,将本发明制得的二羟基丙酮放入化妆乳液中,其中每10mL的化妆乳液中添加5g 二羟基丙酮,充分搅拌混匀,每天早晚洁面后取3mL混合液,均匀涂抹在皮肤上,即可。长期使用,可以阻止皮肤水分的过度蒸发,起到保湿、防晒和防紫外线辐射的作用,另外也可以淡化黑色素,减少脸部色斑,具有显著的美白作用。
[0017]实例2
首先称取700g新鲜柠檬,洗净切片后,放入榨汁机中,榨汁6min,得澄清柠檬汁,倒入2L的烧杯中,并向烧杯中加入1050mL质量浓度为80%乙醇溶液,混合均匀,置于超声振荡仪中,在超声频率为28KHz,超声功率为125W下振荡反应1.5h,随后过滤去除滤渣,得滤液放入索氏抽提器中,抽提45min,收集滤液抽提液,移入蒸馏装置中,在68°C下加热30min,蒸馏去除乙醇,得柠檬提取液;然后称取13g肌醇、0.35g烟酸、0.02g烟酸硫胺素、30g蔗糖以及7g琼脂倒入装有IL蒸馏水的烧杯中,用搅拌棒充分搅拌均匀,再用可调动液器向其中加入
0.45mg吲哚乙酸,继续保持搅拌状态2.5min后,用上述得到的柠檬酸提取液调整pH至6.0,待pH调整结束,将混合物放入灭菌锅中灭菌35min,得培养基;之后将上述得到的培养基放入冷浴锅中,冷却至31°C时,立刻倒入培养皿中,倒入量为培养皿体积的2/3,凝固后制成平板,随后用铲子铲取230g离地面8cm处的土壤,放入容器中,并向容器中加入土壤质量4倍去离子水,形成土壤悬浮液,并将得到的土壤悬浮液用无菌吸管涂布均匀于制成的平板上,待涂布结束,放入保温箱中,在温度8°C下培养9天,得土壤菌种;接下来将上述得到的土壤菌种放入发酵罐中,并向其中加入土壤菌种质量25%清水,混合均匀后,控制发酵罐温度为45°C,密封发酵7天,待发酵结束,再向其中加入土壤菌种质量7%硫酸盐还原菌,提升温度至45°C,继续密封发酵4天,得发酵后的土壤还原菌种液;随后在无菌平皿中加入筛选培养基,加入量为无菌平皿体积的1/4,之后在筛选基表面覆盖5张无菌滤纸,并将上述得到的土壤还原菌种液滴加到滤纸上,在温度550C,湿度40%下培养4天,之后选取培养基表面覆盖的第三张滤纸,轻轻将滤纸上面的孢子刮下,加入去离子水分别稀释成10—4、10—5、10—6 CFU/mL,分别均匀涂抹在平板上,在温度27.5°C,湿度38 %的条件下培养7天;待培养结束,选取菌落形态好、菌落密度适宜的平板,从此平板上挑选单菌落接种至筛选培养基,在温度27.5°C,湿度38%的条件下培养4天,之后从培养好的筛选培养基上挖取0.65cm2的菌苔接种到种子培养基中,在温度27.5°C,湿度38 %的条件下摇瓶培养23h,然后测定效价,挑选出高纯菌株,放入发酵罐中,并向其中加入发酵罐体积1/5的清水,混合后,密封发酵罐,在38°C,湿度为40%条件下发酵30h,待发酵结束,离心分离,得含有二羟基丙酮的滤液;最后将上述含有二羟基丙酮的滤液放入容器中,于45°C下真空蒸发至原有体积的1/3,得浓缩液,随后将得到的浓缩液中加入浓缩液质量2.5倍质量浓度为75%乙醇溶液,搅拌后再于45°C下真空蒸发至原有体积的1/2,重复操作4次,直至出现结晶时,立即将容器置于-4°C的冰水中,持续搅拌,直至产生大量晶体为止,之后将得到的晶体放入干燥箱内干燥,控制干燥箱温度为38 V,干燥30min,即可得到一种二羟基丙酮。其中筛选培养基是由7g蛋白陈、5g酵母膏、SOg甘油、Ilg山梨醇、18g葡萄糖、14g琼脂以及350g去离子水,在pH值为7.0的条件下混合而成;种子培养基是由25mL甘油、7g酵母提取粉、I Ig蛋白陈、5g琼脂以及265g去离子
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