条，然后浸入不同浓度的亚硫酸氢钠水溶液（a:0, b: I X KT5M, c: 1 X 10_4M, d: I X 10_3M, e: I X 10_2M, f: I X I(T1M)，在可见光及紫外灯下拍照即可。
【具体实施方式】
[0025] 实施例1
[0026] 由已知方法合成3-醛基-7-二乙胺基香豆素与5-乙酰基苯并咪唑，然后二者反 应得到具有红色荧光的3-((3' -苯并咪唑）_羰基丙烯）-7_二乙胺基香豆素。具体是：
[0027] 将3-醛基-7-二乙胺基香豆素（1，5. Ommol)，5-乙酰基苯并咪唑（2, 7. 5mmol)和 ImL哌啶加入到IOOmL无水乙醇中，加热至回流，反应9小时后冷至室温，有红色固体析出， 抽滤，乙醇洗三次，粗产品用乙醇重结晶得到鲜红色固体即为3-((3' -苯并咪唑）-羰基丙 烯）-7_二乙胺基香豆素出10))，熔点：287-292°〇，产率61%。单晶见图1。
[0028] 红外测定（KBr，cnT1) : 3250 (NH)，3063 (ArH)，2969 (CH2CH3)，1721 (C = 0)，1563 (C = C) 〇
[0029] 核磁共振氢谱测定:? NMR(400MHz，DMS(Hi6): δ = I. 〇9(t，J = 7· 0Hz，6H，CH3), 3. 47(? J =7. 0Hz, 4H, CH2), 6. 60 (d, J = 2. 0Hz, 1H, ArH), 6. 78 (dd, J = 2. Oand 9. 0Hz, 1H, ArH), 7. 35-7 .37 (m, 2H, ArH), 7. 54 (d, J = 9. 0Hz, 1H, ArH), 7. 59 (s, 1H, ArH), 7. 83 (d, J = 15. 8Hz, 1H, -CO-CH =),7. 88 (s, 1H, ArH), 8. 40 (d, J = 15. 8Hz, 1H, = CH-Ar), 8. 45 (s, 1H, 4-H of coumarin), 13. 39 (s, 1H, NH)。
[0030] 核磁共振碳谱测定：13C NMR(100MHz, DMS(KI6): 12. 83,44. 85, 96. 67,108. 99,110. 43,113. 46, 121. 27,131. 43,140. 31,147. 25,149. 83,152. 62,175. 04,160.15,181. 51 〇
[0031] 高分辨质谱：m/z[M+H]+calcd for C23H22N3O3:388. 1661, found 388. 1670。
[0032] 3-( (3'_苯并咪唑）-羰基丙烯）-7-二乙胺基香豆素可以与亚硫酸氢根在水溶液 中发生迈克加成反应，阻断共轭体系，释放出香豆素蓝色荧光。其反应过程如下式所示：
[0033]
[0034] 实施例2
[0035] 用微量注射器分别向盛有IOmL配好的3- ((3' -苯并咪唑）-羰基丙烯）-7-二乙胺 基香豆素的PBS缓冲液（CTAB ImM，pH = 7. 4)的溶液中，分别定量加入10当量的Cys，GSH， 巯基乙醇，2-氨基吡啶，HSO3' CH3CO2' ClO3' CN' CO32' H2PO4' HCO广，HPO42' Γ，Cl' Br' Γ，I 0% NO2' Ν03? S2O广，SO广，SO,的水溶液，作用1小时后进行紫外可见分光光度法和荧光 分光光度法测试，显示探针3-((3' -苯并咪唑）-羰基丙烯）-7-二乙胺基香豆素对亚硫酸 氢根有很好的选择性，加入亚硫酸氢根前后对照显示荧光发射波长发生了 147nm的蓝移， 具有非常好的比率响应。见图3,4。
[0036] 实施例3
[0037] 细胞内荧光成像测试：
[0038] A、B两组为对照组，对照组A :在37 °C条件下，A549细胞在加入I. 0 μ M的 3_ ((3' -苯并咪唑）-羰基丙烯）-7-二乙胺基香豆素的细胞培养液中培养1小时；对照组 B :Α549细胞在加入I. 0 μΜ的2-(3-乙酰基）香豆素基丙烯酸酯的细胞培养液中培养1小 时，PBS缓冲溶液洗涤三次后，然后再在含有5mM NaHSO3的细胞培养液中浸泡0. 5小时。
[0039] 荧光成像显示3-((3' -苯并咪唑）_羰基丙烯）-7_二乙胺基香豆素渗透进细胞 内。对照组A细胞蓝色通道无荧光，红色通道亮色荧光。对照组B蓝色通道显荧光，红色通 道荧光淬灭。见图5。
[0040] 实施例4
[0041] 本发明的探针作为亚硫酸氢根试纸测试：
[0042] 用0· 01mg/mL的3-((3' -苯并咪唑）-羰基丙烯）-7-二乙胺基香豆素溶液浸泡 滤纸，烘干制成试纸条，然后浸入不同浓度的亚硫酸氢钠水溶液（a:0, b: IX 10_5M，c: IX 10_ 4M, d: I X KT3M, e: I X KT2M, f: I X I(T1M)，在可见光及紫外灯下拍照。
[0043] 结果：随亚硫酸氢钠浓度增大，可见光下试纸由淡红色变为淡蓝色，紫外灯下试纸 由红色变为蓝色。见图6。
【主权项】
1. 一种水溶性亚硫酸氢根比率荧光探针，其特征在于：所述荧光探针是含a，-不饱 和酮的3_((3'_苯并咪唑）_羰基丙烯）_7_二乙胺基香豆素，其化学结构式如式（I)所示，〇2. 权利要求1所述的水溶性亚硫酸氢根比率荧光探针在裸眼检测含亚硫酸氢根样品 中的应用。3. 如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述含亚硫酸氢根样品是生物细胞、含亚硫 酸氢根的食品或含亚硫酸氢根的溶液。4. 权利要求1所述的水溶性亚硫酸氢根比率荧光探针在制备亚硫酸氢根裸眼检测试 纸中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种水溶性亚硫酸氢根比率荧光探针，所述探针是含α,β-不饱和酮的3-((3’-苯并咪唑)-羰基丙烯)-7-二乙胺基香豆素，其化学结构式如式(I)所示。本发明的探针可以选择性地与亚硫酸氢根作用，由红色变为淡蓝色，可肉眼分辨，具有荧光比率响应效应，也可以通过紫外吸收和荧光光度法进行分析。不仅可以比率检测亚硫酸氢根离子，实现细胞内的比率成像，而且做成的试纸条可以迅速裸眼检测液体样中亚硫酸氢根含量。有望在工业生产和食品检测及生物科学中发挥作用，具有广阔的应用前景。
【IPC分类】C07D405/06, C09K11/06, G01N21/64
【公开号】CN104946248
【申请号】CN201510400148
【发明人】赵宝祥, 苗俊英, 戴溪, 张涛
【申请人】山东大学
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年7月9日