68/^ 23739-2009 检测土壤中有效态镉的含量，与修复前相比，处理A1使土壤有效态Cd含量下降了 30. 14%; 与空白对照（CK)相比，土壤有效态Cd含量下降了 23.28%。
[0081] 分次施加含海藻寡糖重金属生物修复剂对土壤理化性质变化影响较大，土壤pH、 有机质含量、全氮、有效磷、有效钾都有不同程度的提高。与处理CK相比，处理A3、A4的效 果最明显，其中处理A4可使土壤有效态Cd含量降低40. 00 %。
[0082] 表 5
[0083]
[0084] 2)菠菜种植40d采收，计算菠菜产量，并根据GB 5009. 15-2014检测菠菜的镉含 量。含海藻寡糖重金属生物修复剂对菠菜生长及Cd含量的影响如表6所不，处理A1的菠 菜平均产量为1572kg/亩，比处理CK的菠菜平均产量（1283kg/亩）增产22. 53%，而处理 A2、A3、A4的菠菜平均产量分别比处理CK的提高了 22. 21%、23. 85%和25. 80%。不同处 理均能使得菠菜地上部和根部的Cd含量降低，但是降低幅度不一样。其中处理A3中菠菜 地上部Cd含量为0. 25mg/g，比处理CK (空白对照组）降低了 40. 48%;而处理A2则能使菠 菜根部Cd降到最低（Cd含量为0. 75mg/kg)，比处理CK(空白对照组）降低了 33. 04%。
[0087] (4)结论：
[0088] 1)在重金属污染土壤中，施用含海藻寡糖重金属生物修复剂可以钝化土壤重金 属、改良土壤，提高土壤全氮、有效钾、有效磷、有机质含量，与空白对照（CK)相比，土壤有 效态Cd含量最大程度下降了 40. 00%。
[0089] 2)施用含海藻寡糖重金属生物修复剂可以提高菠菜产量，增产率最高达到 25. 80%〇
[0090] 3)施用含海藻寡糖重金属生物修复剂能够降低菠菜体内Cd含量，使其地上部Cd 含量最大程度降低了 40. 48 %，根部Cd含量最大程度降低了 33.04%。
[0091] 以上试验验证了本发明的含海藻寡糖重金属生物修复剂对重金属污染土壤的修 复效果明显，同时还能促进植物根系发育，提高作物产量。
[0092] 此外，本发明各种不同实施方式中间可以任意组合，只要不违背本发明的思想，应 视为本发明所公开的内容。
【主权项】
1. 一种含海藻寡糖重金属生物修复剂，其特征在于各组分的质量百分比为：海藻寡糖 5 %~15 %、枯草芽孢杆菌发酵液10 %~20 %、淡紫拟青霉固态发酵物65 %~85 %。2. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于包括 以下步骤： 1) 制备枯草芽孢杆菌发酵液 配制营养琼脂平板，将枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)三炬-07接种在营养琼脂 平板上进行划线培养，从营养琼脂平板上将活化好的枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis) 三炬-07用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液，将菌悬液接种至种子培养基中培养，得种子 液，再将种子液接种至发酵罐培养基中发酵，得枯草芽孢杆菌发酵液；所述枯草芽孢杆菌 (Bacillus Subtilis)三炬-07,已于2014年12月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号：CGMCC No. 10248 ; 2) 制备淡紫拟青霉固态发酵物 配制PDA培养基，将淡紫拟青霉（Paecilomyces Iilacinus)三炬03号种孢子 液，涂布于营养琼脂平板上培养，再用无菌生理盐水将营养琼脂平板上的淡紫拟青霉 (Paecilomyces Iilacinus)三炬03号种的孢子洗涤，制成孢子悬液；将孢子悬液接入种子 培养基中培养得种子液；将种子液接种至固体发酵培养基中，于28~32°C下培养1~2d后 翻盘一次，前3d保持湿度为70%~80%，后4d保持自然湿度，发酵7d后，孢子成熟，固体 发酵结束，固体发酵培养基经常温干燥后粉碎，制得淡紫拟青霉固态发酵物；所述淡紫拟青 霉（Paecilomyces Iilacinus)三炬03号种，已于2010年6月30日保藏于中国典型培养 物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO :M 2010165 ; 3) 制备含海藻寡糖重金属生物修复剂 将海藻寡糖、步骤1)所得枯草芽孢杆菌发酵液、步骤2)所得淡紫拟青霉固态发酵物混 合，即得含海藻寡糖重金属生物修复剂。3. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于在步 骤1)中，所述营养琼脂平板的组成为牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、琼脂20g/L， 灭前pH值为7. 3。4. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于在步 骤1)中，所述划线培养的条件是于28~32°C条件下培养24~48h ; 所述种子培养基的组成可为牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，灭菌前pH值为 7. 0 ;所述菌悬液接种的接种量按体积百分比可为菌悬液的5%，菌悬液0D6。。= 0. 84 ;所述 种子培养基中培养的条件可于30~35°C，150~200rpm条件下培养24~36h。5. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于在步 骤1)中，所述发酵培养基的组成为淀粉20. 0~30. 0g/L，蔗糖5. 0~10. 0g/L，豆柏粉10~ 20g/L，磷酸氢二钾2. 0~3. 0g/L，硫酸猛0? 1~0? 5g/L，酵母膏L 0~2. 0g/L ;所述种子 液接种至发酵罐培养基中发酵的接种量按体积百分比可为种子液的10% ;所述发酵的条件 可为：转速控制在200~300rpm，通气量控制在为lvvm，保持溶解氧10%以上，罐温控制在 28~30°C，罐压保持在0. 05~0. 06MPa，pH值通过10%氨水和10%盐酸控制在6. 5,发酵 时间为36~72h。6. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于在步 骤2)中，所述PDA培养基的组成为：去皮马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，自然pH 值；所述涂布于营养琼脂平板上培养的条件可于28~32°C条件下培养3~5d。7. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于在步 骤2)中，所述种子培养基的组成为：蔗糖15g/L，大豆粉10g/L，磷酸二氢钾lg/L，硫酸锌 0? lg/L，灭菌前pH值为6. 0。8. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于在 步骤2)中，所述将孢子悬液接入种子培养基的接种量按体积百分比为8%~15%，稀释至 0D_为0. 2 ;所述将孢子悬液接入种子培养基中培养的条件可于28~32°C，150~200rpm 下培养3~4d。9. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于在步 骤2)中，所述固体发酵培养基的组成为：麸皮、秸杆粉末、玉米粉、硫酸铵，麸皮、秸杆粉末、 玉米粉、硫酸铵按质量比可为（70~80) : (15~20) : (10~15) : (0.5~1.0);所述 将种子液接种至固体发酵培养基的接种量可将种子液以l〇〇mL/kg的比例接种至固体培养 基中。10. 如权利要求1所述一种含海藻寡糖重金属生物修复剂的制备方法，其特征在于 在步骤3)中，所述海藻寡糖是利用微生物直接降解龙须菜、马尾藻、褐藻等藻类植物中 至少一种所得的聚合度为4~8的寡糖；所述海藻寡糖、步骤1)所得枯草芽孢杆菌发 酵液、步骤2)所得淡紫拟青霉固态发酵物按质量百分比可为（5%~15%) : (10%~ 20%) : (65%~85%)。
【专利摘要】一种含海藻寡糖重金属生物修复剂及其制备方法，涉及重金属生物修复应用技术领域。所述含海藻寡糖重金属生物修复剂各组分的质量百分比为：海藻寡糖5％～15％、枯草芽孢杆菌发酵液10％～20％、淡紫拟青霉固态发酵物65％～85％；其中，有效活菌数≥2亿CFU/g。制备方法：1)制备枯草芽孢杆菌发酵液；2)制备淡紫拟青霉固态发酵物；3)将海藻寡糖、步骤1)所得枯草芽孢杆菌发酵液、步骤2)所得淡紫拟青霉固态发酵物混合，即得含海藻寡糖重金属生物修复剂。枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉对多种重金属具有较强耐受性，能直接吸附重金属离子，与海藻寡糖共同作用，能钝化土壤中的重金属。制备简单，对土壤重金属修复效果好，安全环保。CGMCC No. 1024820141229
【IPC分类】B09C1/10, C12R1/125, C12N1/14, C12R1/79, C12N1/20
【公开号】CN105234167
【申请号】CN201510782971
【发明人】余劲聪, 林克明, 尤越
【申请人】福建三炬生物科技股份有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月16日