一种细胞株16号及其产生的单克隆抗体和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种细胞株16号及其产生的单克隆抗体和应用；细胞株16号的制备步骤为：首先，将半抗原1即H1:3-[氰[顺-3-[2-氯-3，3，3-三氟乙基-2，二甲基]环丙烷-苯氧基]苯丙酸，通过活性酯法和血蓝蛋白KLH偶联；然后将半抗原2即H2:氰基-[3-（4-氨基苯氧基）苯基-顺-3-[2-氯-3，3，3-三氟乙烯基-2，2-二甲基]环丙烷酸酯，通过重氮化法和牛血清白蛋白偶联，用作包被原；最后通过动物免疫、血清测定、细胞融合、筛选和亚克隆技术得到细胞株16号。采用小鼠体内诱生法生产腹水，然后通过辛酸-硫酸铵沉淀法纯化得到相应的单克隆抗体；该抗体灵敏度高，半数抑制浓度（IC50）为13.26±1.23ng/mL；特异性强，为国内农产品中高效氯氟氰菊酯的残留检测提供了技术，具有较好的市场前景。
【专利说明】一种细胞株16号及其产生的单克隆抗体和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种细胞株，具体的说是一种细胞株16号、其产生的抗高效氯氟氰菊酯单克隆抗体及其应用。
【背景技术】
[0002] 高效氯氟氰菊酯又名功夫菊酯(cyhalothrin, CAS号91465-08-6),化学名:(IR/IS)-顺式-(Z) -2, 2- 二甲基-3- (2-氯-3，3, 3- 二氟-1-丙烯基)环丙烷羧酸_ (S) -a-氰基-3-苯氧基苄酯(I:1的混合物)，是一种拟除虫菊酯类杀虫、杀螨剂，具有趋避、击倒及毒杀作用，杀虫谱广，活性高，药效迅速，喷洒后耐雨水冲刷，广泛地用于果树、蔬菜、棉花、烟草、玉米等作物。随着高效氯氟氰菊酯的广泛应用，现已对生态环境造成了一定的影响。毒理学研究表明，高效氯氟氰菊酯对于鱼类和水生节肢动物具有高毒性，半数致死量(LC50, 50% lethal concentration)小于3 ppb。同时,农产品中高效氯氟氰菊酯的残留问题也日益突出；通过食物链，最终会影响人类健康。因此，研究高效氯氟氰菊酯的残留检测具有十分重要的意义。
[0003]目前，检测高效氯氟氰菊酯最常用的方法是气相色谱法，但该法需要昂贵的仪器设备、专业的操作技术和繁琐的样品净化，不适用于现场的快速检测。随着农产品中拟除虫菊酯类农药最大残留限量越来越严格，迫切需要建立操作简单、成本低的快速检测技术。而免疫分析技术正好具有上述的优点，如酶联免疫法具有低成本和高通量的优势；胶体金免疫层析试纸条具有简单、快速和现场检测的优势；便携式免疫传感器具有灵敏度高的优势。
[0004]建立高效氯氟氰菊酯免疫检测的关键在于抗体的制备。在生产抗体的过程中，首先进行半抗原设计和合成，高效氯氟氰菊酯的半抗原合成步骤多，过程繁琐，并且含有多种旋光异构体，因此说，高效氯氟氰菊酯的抗体制备难度大。到目前为止，仅有关于氯氟氰菊酯多克隆抗体制备的报道[I];和多克隆抗体相比，单克隆抗体制备过程长，成本高，但容易重复生产，质量相对稳定，特异性强，因此在市场上更受欢迎。然而迄今为止，尚没有关于高效氯氟氰菊酯单克隆抗体制备的报道。
【发明内容】
[0005]本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种细胞株16号，分类命名为单克隆细胞株，已于2013年I月23日保藏中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC N0.7216。其所产生的单克隆抗体，可以实现农产品中高效氯氟氰菊酯残留的快速检测，用于制备检测高效氯氟氰菊酯的酶联免疫法和胶体金试纸条。
[0006]本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是:
一种细胞株16号，按照如下步骤获得:首先，将半抗原I (Hl，3 -[氰[顺-3 -[2-氯-3，3，3-三氟乙基-2，二甲基]环丙烷-苯氧基]苯丙酸)通过活性酯法和血蓝蛋白(KLH)偶联，用作免疫原，过程如下:
【权利要求】
1.一种细胞株16号，其特征在于:分类命名为单克隆细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC N0.7216。
2.根据权利要求1所述的细胞株16号的制备方法，其特征在于:按照如下步骤获得:首先，将半抗原1即H1: 3-[氰[顺-3- [2-氯-3, 3, 3-二氟乙基-2, 二甲基]环丙烷-苯氧基]苯丙酸，通过活性酯法和血蓝蛋白KLH偶联；然后将半抗原2即H2:氰基-[3-(4-氨基苯氧基)苯基_顺_3_ [2_氣-3, 3, 3_ 二氣乙烯基-2, 2_ 二甲基]环丙烷酸酷，通过重氮化法和牛血清白蛋白偶联，用作包被原；最后通过动物免疫、血清测定、细胞融合、筛选和亚克隆技术得到细胞株16号。
3.一种由权利要求1所述的细胞株16号产生的抗高效氯氟氰菊酯单克隆抗体，其特征在于:单克隆抗体的重链为IgG2b型，轻链为Kappa链，亲和常数为2.8 > IO6 L/mol。
4.根据权利要求3所述的细胞株16号产生的抗高效氯氟氰菊酯单克隆抗体在高效氯氟氰菊酯残留检测中的应用。
5.根据权利要求4所述的细胞 株16号产生的抗高效氯氟氰菊酯单克隆抗体在高效氯氟氰菊酯残留检测中的应用，其特征在于:将所述单克隆抗体用于制备检测高效氯氟氰菊酯残留的酶联免疫试剂盒。
6.一种根据权利要求4所述的细胞株16号产生的抗高效氯氟氰菊酯单克隆抗体在高效氯氟氰菊酯残留检测中的应用，其特征在于:将所述单克隆抗体用于制备检测高效氯氟氰菊酯残留的胶体金试纸条。
【文档编号】G01N33/577GK103911348SQ201410000987
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年1月2日 优先权日:2014年1月2日
【发明者】陈秀金, 胥传来, 郭金英, 任国艳, 李道敏, 孙军杰, 张敏, 辛莉 申请人:河南科技大学