一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法与流程

本发明涉及一种药物中手性杂质的拆分技术，特别是一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法，属医药技术领域。

背景技术：

卡格列净 (Canagliflozin) 为FDA批准的首个SGLT2抑制剂，用于治疗成年患者的II型糖尿病，是一种新的钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）抑制剂药物，通过抑制肾脏对葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖排泄，进而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。

由于在卡格列净必须严格控制其合成过程产生的副产物R,S-构型五元环杂质的含量，R,S-构型五元环杂质混合物采用常规方法很难分离，无法对其进行结构解析和准确定量研究，因此发明一种R,S-构型五元环杂质的液相色谱拆分方法显得尤为重要。

R,S-构型五元环杂质结构式如下：

。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法。

本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下：一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法，其特点是：将原料五元环杂质对映体混合物溶于有机溶剂至浓度0.1~25mg/ml；采用高效液相色谱仪，以直链淀粉型手性柱为色谱柱，以正己烷和乙醇组成的混合液为流动相进行拆分制备。

本发明所术宾高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法：所述的直链淀粉型手性柱优选为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IE；填料优选为硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）。

本发明方法中所述的有机溶剂优选无水乙醇、正己烷、乙醇、甲醇中的一种或者几种组成的混合溶剂。特别优选由正己烷和无水乙醇组成的混合物，且二者的体积比为, 正己烷：无水乙醇=40~80 ：60~20，进一步优选正己烷：无水乙醇=60 ：40。

本发明方法中，所述的流动相流速优选为1.0~70mL/min，色谱柱温度优选为25~40℃，检测波长优选为220~290 nm。所述色谱柱温度进一步优选为30~35℃，检测波长进一步优选为220~254 nm。所述的进样量优选为2μL ~10mL。

本发明所述的流动相按体积百分比计算，优选为正己烷：无水乙醇为40~80 ：60~20，最优选为正己烷：无水乙醇=60 ：40。

本发明方法中，原料五元环杂质对映体混合物溶于有机溶剂至浓度优选为5~20mg/ml。

与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：本发明拆分制备卡格列净五元环杂质对映体的收率高，纯度可达到98%以上，适合作为新药研发对照品使用。本发明方法有效的实现了五元环杂质对映体中R构型、S构型的分离和制备，其分离度可达2.6以上。高效液相色谱拆分自动化程度高，制备效率高。

附图说明

图1为实施例6中色谱分离结果图；

图2为实施例7中色谱分离结果图；

图3和图4为实施例8中光学纯度检测结果图。

具体实施方式

下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。

实施例1，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法：将原料五元环杂质对映体混合物溶于有机溶剂至浓度0.1mg/ml；采用高效液相色谱仪，以直链淀粉型手性柱为色谱柱，以正己烷和乙醇组成的混合液为流动相进行拆分制备。所述的直链淀粉型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IE。所述的有机溶剂选自无水乙醇、正己烷、乙醇、甲醇中的一种；所述的流动相流速为1.0mL/min，色谱柱温度为25℃，检测波长为220nm。所述的进样量为2μL。流动相按体积百分比计算，正己烷：无水乙醇为40：60。

实施例2，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法：将原料五元环杂质对映体混合物溶于有机溶剂至浓度25mg/ml；采用高效液相色谱仪，以直链淀粉型手性柱为色谱柱，以正己烷和乙醇组成的混合液为流动相进行拆分制备。所述的直链淀粉型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IE。填料优选为硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）。

所述的有机溶剂选自无水乙醇、正己烷、乙醇、甲醇中的二种组成的混合溶剂。所述的流动相流速为70mL/min，色谱柱温度为40℃，检测波长为290 nm。所述的进样量为10mL。流动相按体积百分比计算，正己烷：无水乙醇为80 ：20，

实施例3，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法：将原料五元环杂质对映体混合物溶于有机溶剂至浓度5mg/ml；采用高效液相色谱仪，以直链淀粉型手性柱为色谱柱，以正己烷和乙醇组成的混合液为流动相进行拆分制备。所述的直链淀粉型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IE。

所述的有机溶剂选自无水乙醇、正己烷、乙醇、甲醇中的三种组成的混合溶剂。

所述的流动相流速为10mL/min，色谱柱温度为30℃，检测波长为280 nm。所述的进样量为1mL。流动相按体积百分比计算，正己烷：无水乙醇为50 ：50。

实施例4，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法：将原料五元环杂质对映体混合物溶于有机溶剂至浓度20mg/ml；采用高效液相色谱仪，以直链淀粉型手性柱为色谱柱，以正己烷和乙醇组成的混合液为流动相进行拆分制备。所述的直链淀粉型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IE。

所述的有机溶剂为由正己烷和无水乙醇组成的混合物，且二者的体积比为, 正己烷：无水乙醇=60 ：40。所述的流动相流速为30mL/min，色谱柱温度为35℃，检测波长为254nm。所述的进样量为5mL。流动相按体积百分比计算，正己烷：无水乙醇=60 ：40。

实施例5，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法：将原料五元环杂质对映体混合物溶于有机溶剂至浓度1mg/ml；采用高效液相色谱仪，以直链淀粉型手性柱为色谱柱，以正己烷和乙醇组成的混合液为流动相进行拆分制备。所述的直链淀粉型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IE。

所述的有机溶剂为由正己烷和无水乙醇组成的混合物，且二者的体积比为, 正己烷：无水乙醇=80 ： 20。所述的流动相流速为5mL/min，色谱柱温度为32℃，检测波长为254 nm。所述的进样量为5mL。流动相按体积百分比计算，正己烷：无水乙醇=60 ：40。

实施例6，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法实验一：

将五元环杂质对映体混合物用1~2ml色谱级无水乙醇溶解，采用分析型高效液相色谱仪进行分离纯化，色谱柱尺寸为0.46 cm I.D. × 15 cm L，硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）填料为大赛璐药物手性技术（上海）有限公司产品，粒径为5μm，进样2μl，色谱柱温度为35℃，流动相为正己烷/无水乙醇（60/40，V/V），等度洗脱1ml/min，洗脱时间8min。采用的紫外光度检测器的检测波长为254nm。

色谱分离结果见图1所示，从图1 中可以看出，R -构型五元环杂质色谱峰保留时间为5.043min，S-构型的五元环杂质色谱峰保留时间为6.099min，R -构型和S-构型的五元环杂质两者分离度为2.637。

实施例7，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法实验二：

将五元环杂质对映体混合物用1~2ml色谱级无水乙醇溶解，采用分析型高效液相色谱仪进行分离纯化，色谱柱尺寸为0.46 cm I.D. × 25 cm L，硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）填料为大赛璐药物手性技术（上海）有限公司产品，粒径为5μm，进样30μl，色谱柱温度为35℃，流动相为正己烷/无水乙醇（60/40，V/V），等度洗脱1ml/min，洗脱时间20min。采用的紫外光度检测器的检测波长为254nm，R -构型五元环杂质色谱峰保留时间为10.864 min，S-构型的五元环杂质色谱峰保留时间为11.974min，R -构型和S-构型的五元环杂质两者分离度为2.391。

色谱分离结果见图2所示，从图2中可以看出，R -构型五元环杂质色谱峰保留时间为10.864min，S-构型的五元环杂质色谱峰保留时间为11.974min，R -构型和S-构型的五元环杂质两者分离度为2.391。

实施例8，一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法实验三：

将五元环杂质对映体混合物用10ml色谱级无水乙醇溶解，采用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，色谱柱尺寸为5.0 cm I.D. × 25 cm L，硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）填料为大赛璐药物手性技术（上海）有限公司产品，上样量231.9mg，进样10ml，色谱柱温度为35℃，流动相为正己烷/无水乙醇（60/40，V/V），等度洗脱60ml/min，洗脱时间8min。采用的紫外光度检测器的检测波长为254nm，分别收集R -构型和S-构型的五元环杂质。将收集液40℃浓缩至干。

光学纯度检测结果见图3~4所示，从图3中可以看出，R-构型五元环杂质ee% 为99.90%。从图4中可以看出，S-构型的五元环杂质ee%为98.68%。

R-构型五元环杂质收率：0.1330g（57.4%），S-构型五元环杂质收率：0.0940g（40.5%），总收率为97.9%。

R-构型五元环杂质HRMS：[M+Na]⁺= 467.13190；MS：[M+Na]^＋=467

R-构型五元环杂质¹H-NMR(CDCl_3，400M) ：δ=7.59 (dd，2H)；7.27(d，1H)；7.26(s，1H)；7.21(d，1H)；7.19(t，2H)；7.11(d，1H)；6.79(d，1H)；5.35(s,1H)；4.85(s，1H)；4.60(s，1H)；4.46(d，3H)；4.41(s，1H) ；4.11(s，2H)；4.00(s，1H)；3.85(m，1H)；3.82(m，1H)；3.81(m，1H)；3.64(d，1H)；3.44(dd，1H)；2.26(s，3H)。

综上所述，本发明的一种卡格列净五元环杂质对映体的高效液相色谱拆分、制备方法，可以有效的将R-构型和S-构型的五元环杂质很好的分离，并达到快速制备。

以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。