一种癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法和检测方法与流程

文档序号:12452297阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于具体制备步骤如下,

步骤1:取聚邻苯二胺纳米微球0.013g,利用超声震荡分散在1mL的水中,并在室温下保存备用;

步骤2:将玻碳电极:用清洗剂超声清洗5~10min后,在沉积电位为1.75V下,0.1M pH=5.0的PBS中,用线性扫描溶出伏安法沉积300s,得到处理后的玻碳电极;

步骤3:处理后的玻碳电极在扫描电位为+0.3~+1.3V,pH=7.0的PBS中做循环伏安曲线直到获得稳定的电流电压曲线为止;

步骤4::将此电极浸泡在20mM的戊二醛溶液中12~24h,得到戊二醛修饰的玻碳电极;

步骤5:用水充分清洗以除去玻碳电极上非化学吸附的戊二醛,把该电极浸入100μL HRP标记的CEA抗体溶液与200μL聚邻苯二胺纳米微球溶液的混合液中5~10h后得到聚邻苯二胺纳米微球/HRP标记的CEA抗体修饰电极;

步骤6:用水将电极冲洗干净,晾干;

步骤7:将制备好的免疫传感器浸泡于4℃ 0.1M pH=7.0的PBS中,即可得到癌胚抗原电化学免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,所述聚邻苯二胺纳米微球的制备方法为:200μL 0.1M邻苯二胺加入3mL水中,向溶液中以30ml/min的速度通入臭氧并不断搅拌,在常温下搅拌3~5h后将反应得到的产物在7000G的重力加速度下离心5min,分离得到的沉淀物即是聚邻苯二胺纳米微球。

3.根据权利要求1或2所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,所述清洗剂超声清洗的步骤为:

步骤1,经过体积比为1:1的HNO3清洗;

步骤2,然后通过甲苯或者无水乙醇清洗;

步骤3,最后通过纯水的清洗干净。

4.根据权利要求1或3所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,电极浸泡在20mM的戊二醛溶液中12h。

5.根据权利要求2所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,所述通入臭氧后的搅拌时间为5h。

6.根据权利要求1所述的一种癌胚抗原电化学免疫传感器的检测方法,其特征在于,具体检测方法如下:

步骤1:取5μL的CEA标准样品配置成浓度为0.1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml的溶液作为测试溶液,并在室温(25±1.0℃)下孵育10~60min;

步骤2:测试溶液在2.0mM H2O2和pH=5.0~8.0无氧的PBS混合溶液中进行差分脉冲伏安扫描,其扫描电压为-0.5~-0.75V;

步骤3:启动电化学反应,分别测量0.1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml的CEA溶液对应的电流强度,建立电化学电流强度与CEA溶液浓度之间的定量关系。

7.根据权利要求6所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的检测方法,其特征在于,所述测试溶液孵育时间为40min。

8.根据权利要求7所述的癌胚抗原电化学免疫传感器的检测方法,其特征在于,所述无氧的PBS的混合溶液的pH=7.0。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1