形 成抗原-抗体复合物；然后加入生物素标记的抗人CHI3L1抗体，形成抗体-抗原-生物素 标记抗体复合物；再加入辣根过氧化物酶（HR巧标记的亲和素，形成抗体-抗原-生物素标 记抗体-酶标亲和素复合物；最后加入3, 3'，5, 5' -四甲基联苯胺底物系统，发生显色反 应。显色反应结束后用酶标仪进行检测。根据校准品中CHI3L1的浓度和其对应的0D值做 标准曲线，通过标准曲线计算样本中CHI3L1浓度。
[0031] 本发明创造的试剂盒操作过程具有快速、简便的特点，根据试剂盒的检测方法可 W很快的得到准确的检测结果；同时适用于多个样本同时进行检测，便于体检的日常化、平 民化普及是临床检测的理想工具。
【具体实施方式】
[0032] 下面对本发明创造的具体实施例加W说明：
[003引一种用于肝硬化的检测试剂，包括W下试剂；CHI3L1微孔酶标板、CHI3L1检测抗 体、HRP标记亲和素、HRP标记亲和素稀释液、CHI3L1样本稀释液、显色剂A、显色剂B、洗漆 浓、终止浓、松准品和质控品。
[0034]所述显色剂A为含有双氧水的缓冲溶液，显色剂B为含有3, 3'，5, 5'-四甲基联 苯胺的缓冲溶液。所述CHI3L1微孔酶标板的微孔内包被有大鼠抗CHI3L1单克隆抗体，所 述CHI3L1微孔酶标板上设有8个微孔。所述CHI3L1检测抗体为生物素标记山羊抗CHI3L1 多克隆抗体。所述终止液为Imol/L的硫酸溶液。
[0035] 所述校准品中CHI3L1浓度如下表；浓度定值来源于LC-MS测定。
[0036]
【主权项】
1. 一种用于肝硬化的检测试剂，其特征在于：包括以下试剂：CHI3L1微孔酶标板、 CHI3L1检测抗体、HRP标记亲和素、HRP标记亲和素稀释液、CHI3L1样本稀释液、显色剂A、 显色剂B、洗涤液、终止液、校准品和质控品。
2. 根据权利要求1所述的一种用于肝硬化的检测试剂，其特征在于：所述显色剂A为 含有双氧水的缓冲溶液，显色剂B为含有3, 3'，5, 5' -四甲基联苯胺的缓冲溶液。
3. 根据权利要求1所述的一种用于肝硬化的检测试剂，其特征在于：所述CHI3L1微孔 酶标板的微孔内包被有大鼠抗CHI3L1单克隆抗体，所述CHI3L1微孔酶标板上设有8个微 孔。
4. 根据权利要求1所述的一种用于肝硬化的检测试剂，其特征在于：所述CHI3L1检测 抗体为生物素标记山羊抗CHI3L1多克隆抗体。
5. -种用于肝硬化的检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的所有试剂。
6. 根据权利要求5所述的一种用于肝硬化的检测试剂盒，其特征在于：还包括不干胶 片。
7. -种用于肝硬化的检测试剂盒的检测方法，其特征在于：使用权利要求5或6所述 的试剂盒，包括以下步骤： (1) 配置工作浓度的洗涤液，溶解校准品和质控品； (2) 稀释样本：待CHI3L1检测的血清样本用所述CHI3L1样本稀释液稀释，得稀释样 本； (3) 依次将步骤⑴和⑵中的所述校准品、质控品、稀释样本加入到所述CHI3L1微孔 酶标板的微孔中，所述校准品和质控品进行复孔，混匀，得混匀后的酶标板； (4) 将步骤（3)中所述酶标板用所述不干胶片覆盖，置于37°C孵育60分钟； (5) 将步骤（4)中孵育后的所述酶标板，弃不干胶片和酶标板的微孔内液体，采用步骤 (1)配置的所述工作浓度的洗涤液对酶标板的微孔进行洗涤，洗涤4次，或者采用洗板机对 所述酶标板的微孔进行洗涤，洗涤5次，拍干酶标板； (6) 将步骤（5)得到的干的酶标板加入所述CHI3L1检测抗体，用所述不干胶片覆盖所 述酶标板，置于37°C孵育60分钟； (7) 利用步骤（6)得到的孵育后的所述酶标板重复步骤（5)中的洗涤操作，得拍干的酶 标板； (8) 使用HRP标记亲和素稀释液与HRP标记亲和素配置工作浓度HRP标记亲和素，所述 工作浓度HRP标记亲和素加入到步骤（7)得到的所述酶标板的微孔中，用所述不干胶片覆 盖所述酶标板，置于37°C孵育30分钟； (9) 将步骤⑶得到的孵育后的所述酶标板重复操作步骤（5)中的洗涤操作，得拍干的 酶标板； (10) 配置显色剂：所述显色剂A :所述显色剂B按体积比1 :1混合，得显色剂； (11) 将步骤（10)得到的所述显色剂加入到步骤（9)得到的所述酶标板的微孔中，室温 避光反应15分钟； (12) 将所述终止液加入到步骤（11)得到的所述酶标板的微孔内，混匀； (13) 将步骤（12)得到的所述酶标板采用酶标仪读取OD值。
8. 根据权利要求7所述的一种用于肝硬化的检测试剂盒，其特征在于：所述步骤（1) 中所述洗涤液使用超纯水稀释，所述校准品和质控品使用去离子水溶解，溶解后的所述校 准品和质控品，于室温15分钟以上。
9.根据权利要求7所述的一种用于肝硬化的检测试剂盒，其特征在于：步骤（5)中每 次洗涤加入所述工作浓度的洗涤液需静置30~60秒，拍干后再重新加所述工作浓度的洗 涤液进行洗涤。
【专利摘要】本发明创造提供一种用于肝硬化的检测试剂盒及其检测方法，属于生物技术领域。本发明的检测方法，应用抗人壳多糖酶3蛋白1(CHI3L1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，使用时往包被抗体的微孔板中加入待检样本，若样本中含有被测物，便可结合于固相抗体上，从而形成抗原-抗体复合物；然后加入生物素标记的抗人CHI3L1抗体，形成抗体-抗原-生物素标记抗体复合物；再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素，形成抗体-抗原-生物素标记抗体-酶标亲和素复合物；最后加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺底物系统，发生显色反应。显色反应结束后用酶标仪进行检测。具有快速、简便、准确的确定检测结果的优点。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN104865385
【申请号】CN201510201168
【发明人】欧阳玉岭
【申请人】天益康（天津）医院管理有限公司
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年4月24日