[0065] (3)采用LC-MS/MS方法分别对提取液、标准溶液进行分析。
[0066] 色谱分析条件：采用菲罗门C18液相色谱柱，柱温为40°C ;进样量5 y L ;流动相为 0. 1%醋酸水溶液，流速为0. 8ml/min ;采用等度洗脱程序，洗脱时间总共3min。
[0067] 标准溶液的色谱分析结果如图2所示，提取液的色谱分析结果如图3所示。
[0068] 质谱分析条件：离子源：电喷雾电离源（ESI);扫描方式：负离子扫描；检测方式： 多反应监测（MRM);电喷雾电压：-4500V ;离子源温度：550°C ;辅助气Gasl压力：60psi ;辅 助气Gas2压力：50psi ;去簇电压（DP) :-40V ;碰撞能（CE) :-25V ;离子对选择：定量离子对 179/87,定性离子对179/59。提取液的质谱图如图4所示。
[0069] (4)计算结果：
[0070] 以标准溶液中肌醇的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线如图 5所示，具体数据见表1。
[0071]表1
[0073] 将提取液色谱图中肌醇的色谱峰面积，代入以上标准曲线，得到提取液中的肌醇 含量，按照下式计算出烟丝中的肌醇含量。
[0074] m = 1000X (AXS)/n
[0075]式中：
[0076]m-烟丝中的肌醇含量（mg/g);
[0077] A-提取液中的肌醇含量（y g/mL);
[0078] S-提取液体积（mL);
[0079] n-称取烟丝的质量（g)。
[0080] 本实施例烟丝的肌醇含量为9. 3mg/g。
[0081]由表1和图4可知，所采用的色谱条件在烟草制品实际样品分析中几乎不存在杂 峰，目标物具有较好的线性相关性，将混合标准溶液稀释一定倍数，以信噪比S/N = 3计算 出肌醇的检出限为0. 07mg/g。
[0082]实施例2 :不同提取溶剂及不同浓度的比较
[0083]本实施例分别用纯水、磷酸钠缓冲溶液（NaH2P04-Na 2HP04)、磷酸钾缓冲溶液 (1(2册04-腿2?0 4)以及0.03111〇1/1、0.09111〇1/1、0.12111〇1/1、0.15111〇1/1的乙酸铵水溶液对烟草 制品进行提取，其他条件参考实施例1。
[0084] 磷酸钠缓冲溶液、磷酸钾缓冲溶液作为提取溶剂提取烟草制品没有检测到色谱 峰。其他提取溶剂色谱分析的峰面积如图6所示。
[0085] 由图6可知，与乙酸铵水溶液相比，纯水提取烟草制品的肌醇提取率低。当乙酸铵 水溶液浓度多0. lmol/L时，肌醇的提取率基本达到稳定，说明0. lmol/L乙酸铵水溶液可基 本将烟草制品的肌醇完全提取。
[0086]实施例3:乙酸铵水溶液不同添加量的比较
[0087] 本实施例分别向烟草制品中加入25ml、50ml、75ml和100ml的0. lmol/L乙酸铵水 溶液，其他参考实施例1，结果见表2。
[0088] 表 2
[0090] 由表2可知，对于不同的乙酸铵水溶液添加量，结果无明显差异。如图7-8所示，当 添加量较大时，如图8的100mL添加量，信号值较小，易受基线噪音影响，而添加量较小时， 如图7的25mL添加量，易出现信号值过饱和，影响测定结果。为了兼顾提取的完全性和检 测的准确性，同时保证取样的均匀性和减少试剂用量，实验选择添加量为50mL。
[0091]实施例4:不同提取时间的比较
[0092] 本实施例分别以10min、20min、30min、40min和50min作为提取时间，各自测得的 肌醇含量如图9所示。当超声时间多30min，测得的肌醇含量基本稳定，肌醇的提取率最高。 为避免过长时间超声导致样品的温度显著升高，同时为了使不同样品中的肌醇都能被完全 提取出来，提取时间采用30min。
[0093]实施例5 :不同质谱备件的比较
[0094] 本实施例将质谱碰撞能（CE)设定为-10V，定量离子对为179/161，其他参考实施 例1。得到的提取液色谱峰面积仅为实施例1提取液色谱峰面积的34%。
[0095]实施例6 :不同色谱梓的比较
[0096] 本实施例分别用Agilent公司生产的色谱柱ZORBAX Eclipse C18 (1 00mm X 2. 1mm，1. 8 y m)、ZORBAX Eclipse XDB-C8 (150mmX 4. 6mm，5m)、ZORBAX SB-C3 (150mmX 2. 1mm，5 y m)、ZORBAX SB-C3 (lOOmmX 3. 0mm，1. 8 y m)、ZORBAX XDB-Phenyl (150mmX 4. 6mm，3. 5 y m)、Z0RBAX300-SCX (150mmX 2. 1mm，5 y m)、热电公司 生产的的色谱柱APS_2Hypersil (100_X 2. 1mm, 5 y m)和菲罗门Luna 5u C18色谱柱 (150. 0_X 3. 9mm, 5 ym)进行分析测定，其他参考实施例1，结果表明，菲罗门Luna 5u C18 色谱柱（150.0 mmX 3. 9mm, 5 ym)的色谱峰型最好，响应值最高。
[0097]实施例7:不同流动相的比较
[0098] 本实施例以纯水作为流动相进行分析，其他参考实施例1，得到色谱图如图10所 不〇
[0099] 将图10与图2-3比较可知，以纯水作流动相时，肌醇的峰强度较低，而采用0. 1% 醋酸作为流动相时，色谱峰型较好，响应值较高。
[0100] 实施例8 :不同讲样量的比较
[0101] 本实施例分别以luL、2yL和10yL进样，其他参考实施例1。
[0102] 结果表明，色谱峰响应值会随着进样量的增加而增加，当达到10yL的进样量时， 肌醇色谱峰出现裂峰。
[0103]实施例9:重复件和加标回收率的考察
[0104] 分别向样品中加入5mg/g、10mg/g和20mg/g三种不同浓度的标准溶液，进行加标 回收率试验，每个样品分别测定6次，分析方法参考实施例1。根据分析结果计算烟草制品 中肌醇的加标回收率，结果如表3所示。
[0105] 表3烟草制品中肌醇的回收率和重复性（n = 6)
[0106]
[0108] 由表3可以看出，在3个加标水平上，利用此方法分析检测烟草制品中肌醇的回 收率在93. 4% -94. 9%之间，样品测试结果的相对标准偏差小于5%，说明本法的回收率较 高，重复性较好。
[0109]实施例10 :不同烟草制品肌醇含量的测宙
[0110] 采用实施例1的分析方法测定不同产地、不同类型烟叶中的肌醇含量，结果见表 4〇
[0111] 表4不同产地、不同类型烟叶的肌醇含量
[0112]
[0113]
[0114] 尽管本发明的【具体实施方式】已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根 据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保 护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
【主权项】
1. 一种检测样品中肌醇的方法，包括如下步骤： 用乙酸铵水溶液浸润样品，得到提取液。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述样品为烟草或烟草制品。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于如下（1)-(6)中的任意一项或者多项： (1) 所述检测为定量检测； (2) 所述乙酸铵水溶液的浓度为0? 09-0. 15mol/L，优选为0?lmol/L; (3) 向每克样品中添加乙酸铵水溶液的量为250-1000mL，优选为500mL; (4) 所述浸润在超声下进行； (5) 浸润时间彡lOmin，具体地，彡30min，优选为30min; (6) 浸润温度为30-60°C。4. 根据权利要求1所述的方法，其中，还包括将提取液进行过滤的步骤；具体地，以水 相滤膜过滤提取液；更具体地，所述水相滤膜的孔径为0. 22ym。5. 根据权利要求1所述的方法，其中，还包括采用液相色谱-质谱分析提取液的步骤。6. 根据权利要求5所述的方法，其中，液相色谱条件为如下（1) - (6)中的任意一项或者 多项： (1) 色谱柱为菲罗门C18液相色谱柱； (2) 进样量为5yL; (3) 流动相为0. 1 %醋酸水溶液； ⑷流速为0? 8mL/min; (5) 柱温为40°C; (6) 采用等度洗脱程序，洗脱时间3min。7. 根据权利要求5所述的方法，其中，质谱条件为如下（1)-(7)中的任意一项或者多 项： (1) 扫描方式为负离子扫描； (2) 定量离子对179/87,定性离子对179/59 ; (3) 碰撞能为-25V; (4) 离子源为电喷雾电离源； (5) 检测方式为多反应检测； (6) 电喷雾电压为-4500V; (7) 离子源温度为550 °C。8. -种检测样品中肌醇的试剂盒，包括乙酸铵水溶液和水相滤膜。9. 根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于如下（1)-(5)中任意的一项或者多项： (1) 所述乙酸铵水溶液的浓度为〇? 09-0. 15mol/L，优选为0?lmol/L; (2) 乙酸铵水溶液的量至少为250mL，具体为250-1000mL，优选为500mL; (3) 所述水相滤膜的孔径为0. 22ym; (4) 所述试剂盒为定量分析试剂盒； (5) 所述样品为烟草或烟草制品。10. 权利要求8或9所述试剂盒在检测样品中肌醇，或者在控制样品质量中的用途；具 体地，所述样品为烟草或烟草制品。
【专利摘要】本发明属于分析技术领域，涉及一种检测样品中肌醇的方法，包括用乙酸铵水溶液浸润样品的步骤。还涉及一种检测样品中肌醇的试剂盒。本发明所述方法和试剂盒可用于检测烟草或烟草制品中的肌醇含量，或者用于烟草或烟草制品的质量控制。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN104931611
【申请号】CN201510297054
【发明人】邓其馨, 刘泽春, 黄朝章, 谢卫, 张廷贵, 黄延俊, 张鼎方
【申请人】福建中烟工业有限责任公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月3日