cationtohumanlungcancer) "，单克隆抗体和癌症治疗（Monoclonal AntibodiesandCancer"Therapy)，AlanR.Liss公司，第 77-96 页（198巧）。通过CDR移 植产生单克隆抗体描述在美国专利号5, 585, 089、5, 693, 761、5, 693, 762和5, 225, 539中。 此外，单克隆抗体可W在无菌动物中产生，如在国际专利申请公开号W0 1989/012690中所 描述的。
[0031] 嵌合抗体可W通过，例如将来自于中期因子多肤特异性的小鼠抗体的基 因和来自于具有合适生物活性的人抗体的基因一起剪接来制备（Morrison等，J. Bacteriol., 159:870(1984) ;Neube;rge;r等，化1：11'6, 312:604-608(1984);和Takeda 等，化化re, 314:452-454(1985))。用于生产单链抗体的技术（如描述于例如美国专利号 5, 476, 786、5, 132, 405和4, 946, 778)可适于产生针对中期因子的抗体。
[0032] 包含针对中期因子抗体的独特型的抗体片段，可任何合适的方式产生，例如 使用已知的技术产生。合适的抗体片段包括但不限于，F(ab' )2片段，所述F(ab' )2片段 可W通过抗体分子的胃蛋白酶消化来产生；Fab'片段，所述Fab'片段可W通过还原所述 F(油'）2片段的二硫桥键来产生；W及F油片段，所述F油片段可W通过用木瓜蛋白酶和还 原剂处理抗体来产生。
[0033] 所述中期因子特异性的抗体也可W是在本领域中已知的抗中期因子抗体，例如得 自BioVendor(捷克共和国），Abeam公司（马萨诸塞州剑桥）或R&DSystems公司（明巧 苏达州明巧阿波利斯）的市售的抗中期因子抗体。
[0034] 在本发明的方法中，由于针对中期因子的抗体与样品中存在的中期因子结合，所 W检测所述抗体W确定中期因子的水平。对针对中期因子抗体的检测可W通过在本领域中 公知的任何合适的技术来完成。在一个实施方式中，抗体结合是通过检测偶联至针对中期 因子抗体的标记来进行检测。在另一个实施方式中，抗体结合是通过第二抗体或试剂与针 对中期因子的抗体的结合来检测，其中标记并且检测所述第二抗体。
[0035] 可W利用任何合适的标记，W确定样品中存在的中期因子的水平。合适的标记物 包括，但不限于，酶（例如，碱性磯酸酶，辣根过氧化物酶等）、巧光分子、化学发光分子、放 射性核素和染料分子。其它试剂和材料可用于简易化确定样品中存在的中期因子水平，所 述试剂和材料如预处理和阻断试剂、扩增试剂（例如生物素-抗生蛋白链霉素）、洗漆缓冲 液、阻断试剂、和共染色试剂。检测抗原-抗体复合物的方法是本领域技术人员所熟知的。
[0036] 在一些实施方式中，所述对照是在宿主细胞中重组生产的纯化的中期因子蛋白。 在其它实施方式中，所述对照是从细胞或组织中分离的纯化中期因子蛋白，所述细胞或组 织内源性地产生中期因子。因此，本发明的试剂盒可包括用作对照的一定量的纯化中期因 子蛋白，例如W建立标准曲线，用于与样品中存在的中期因子的水平进行比较。对照中期 因子蛋白可W与在人或其它哺乳动物的细胞或组织中发现的中期因子相同，或者对照中期 因子蛋白可W是经修饰的中期因子蛋白，例如融合蛋白、截短的蛋白，或含氨基酸取代的蛋 白。
[0037] 在本发明的方法中，样品中存在的中期因子的水平通常是标准化为样品中存在的 蛋白或其它物质的水平。在一些实施方式中，样品中存在的中期因子的水平标准化为某种 蛋白的水平，所述蛋白由样品中表达的"持家基因"编码。术语"持家基因"是指本领域熟 知的、在生理学和病理生理学条件下w相对恒定的水平表达的基因。通过任何持家基因编 码的蛋白可用于标准化样品中存在的中期因子水平。合适的标准化蛋白的示例包括，例如， 0-肌动蛋白、Hsp90和GAPDH。在一些实施方式中，用于标准化中期因子水平的蛋白是通 过组织特异性方式表达的基因来编码，所述组织特异是例如器官特异性或肿瘤特异性。例 如，甲状腺球蛋白的水平可W用来标准化甲状腺结节或甲状腺肿瘤中存在的中期因子的水 平。组织特异性基因及其蛋白产物是本领域技术人员所熟知的。在其他实施方式中，用于 标准化的物质代表一组相关的分子，例如样品中的总蛋白。在其他实施方式中，所述物质不 是蛋白质，而是存在于样品中的另一种组分，例如核酸、脂类、碳水化合物或小有机分子或 非有机分子。
[003引在本领域中已知的任何合适的方法可W用来确定蛋白的水平，所述蛋白的水平用 于标准化样品中的中期因子的水平。在一些实施方式中，用于测定样品中标准化蛋白的水 平的方法与用于确定样品中中期因子的水平的方法相同，除了用标准化蛋白特异性的抗体 来取代抗中期因子抗体。
[0039] 对照可W是任何合适的比较物。在一些实施方式中，对照是从具有生长的相同对 象获取的正常组织样品，并且优选是从具有所述生长的相同器官获取。例如，如果生长是甲 状腺结节，对照可W是从患有甲状腺结节的对象获取的正常甲状腺组织的样品。在其他实 施方式中，对照是从与具有生长的对象的相同物种的另一个成员获取的正常组织的样品， 并且优选是从具有所述生长的相同器官获取。例如，如果生长是在人对象中的甲状腺结节， 所述对照可W是从另一个人对象中获取的正常甲状腺组织的样品。所述对照也可W是历史 对照，如从先前的生长样品中确定的中期因子水平，所述样品与随后的生长样品是从相同 的对象中获得。随后的样品可衍生自与先前的样品相同的生长，或者不同的生长。例如，如 果生长是在人对象中的甲状腺结节，所述对照可W是中期因子水平，所述中期因子水平是 从取自相同人对象的甲状腺结节的先前样品中确定。优选地，将用于标准化生长样品中的 中期因子水平的相同方法来用于标准化对照组织样品中的中期因子水平。
[0040] 在其他实施方式中，对照是预先确定的中期因子水平或预先确定的一组中期因子 水平。因此，在本发明的上下文中，没有必要对对照样品实施测定W提供对照中期因子水 平。在一些实施方式中，预先确定的中期因子水平由生长样品所获取的相同物种的其他个 体中的良性生长、恶性生长，和/或正常组织的预先研究来确定。
[0041] 对照可W是上述对照的任何两种或更多种的组合。本领域技术人员应理解，合适 对照的确定将取决于几个因素，如组织来源和预测的生长恶性程度。
[0042] 在本发明方法的实施方式中，与对照比较，尤其是与良性对照比较，生长样品中中 期因子水平的相等或降低是良性生长的诊断依据，而与已知良性对照比较，生长样品中中 期因子水平的升高是恶性生长的诊断依据。术语"良性"指的是非癌性的和缺乏转移能力 的生长，而术语"恶性"是指癌性的并且往往有转移能力的生长。恶性生长可W是任何恶性 程度，例如，恶变前的、低度的、中度的、高度的。本领域的普通技术人员应理解对每种类型 的癌症分级系统各不相同。本申请所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域技术人 员通常理解的含义，除非另有明确说明。
[0043] 用于确定从样品中测定的中期因子水平是良性生长或恶性生长的指示的"临界" 值或"截止"值是可变的，并且取决于多个因素，如生长的组织来源、样品数和对照数，W及 免疫测定和标准化蛋白的选择。本领域的普通技术人员可基于上述因素的任何组合来凭经 验确定适当的截止值。
[0044] 在某些实施方式中，本发明的方法和试剂盒用于确定甲状腺生长是良性或恶性 的，标准化蛋白是甲状腺球蛋白，并且临界值是10纳克中期因子/毫克甲状腺球蛋白。良 性甲状腺生长的例子包括腺瘤样/胶体结节、滤泡状腺瘤，W及与潜在的慢性淋己细胞性 甲状腺炎相关的结节。恶性甲状腺生长的例子包括乳头状甲状腺癌（PTC)、滤泡状甲状腺 癌、甲状腺髓样癌和甲状腺未分化癌。
[0045] 在其他实施方式中，本发明的方法和试剂盒用于诊断与另一癌症相关的生长，包 括但不限于急性淋己细胞性白血病、急性髓性白血病、肾上腺皮质癌、艾滋病相关淋己瘤、 艾滋病相关的恶性肿瘤、肛口癌、小脑星形细胞瘤、肝外胆管癌、膀脱癌、骨肉瘤/恶性纤维 组织细胞瘤、脑干胶质瘤、室管膜瘤、视路和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌、类 癌瘤、胃肠道类癌、癌、肾上腺皮质、膜岛细胞癌、原发性中枢神经系统淋己瘤、小脑星形细 胞瘤、子宫颈癌、慢性淋己细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、腫銷透明细胞肉瘤、结肠癌、 结肠直肠癌、皮肤T细胞淋己瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤文氏肉瘤/家族肿瘤、 顾外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌包括眼内黑色素瘤和视网膜母 细胞瘤、胆囊癌、胃肠道类癌、卵巢生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、毛细胞白血病、头和 颈癌、霍奇金病、下咽癌、下丘脑和视觉通路胶质瘤、眼内黑色素瘤、卡波西氏肉瘤、喉癌、急 性淋己细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性淋己细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、肝癌、 非小细胞肺癌、小细胞肺癌、霍奇金病、非霍奇金氏淋己瘤、华氏（Waldenstrom)巨球蛋白 血症、恶性间皮瘤、恶性胸腺瘤、髓母细胞瘤、黑素瘤、眼内黑素瘤、Merkel细胞癌、隐匿性 原发性的转移性鱗状颈癌、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤/浆细胞瘤、葦样肉芽 月中、骨髓增生异常综合征、慢性髓细胞性白血病、骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生性 疾病、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌，口腔和唇癌、口咽癌、骨肉瘤/恶性骨 纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢低恶性潜在肿瘤、膜腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴 茎癌、嗜铭细胞瘤、垂体瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞（肾）癌、移行细胞 癌（例如肾孟和输尿管）、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、骨恶性纤维组织细胞 瘤、软组织肉瘤、塞扎里综合征、皮肤癌、小肠癌、胃（胃部）癌、幕上原始神经外胚层和松果 体瘤、皮肤T细胞淋己瘤、睾丸癌、恶性胸腺瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、尿道癌、子宫肉瘤、阴道 癌、外阴癌W及维尔姆斯氏瘤。
[0046] 本发明的方法和试剂盒可与其他用于诊断生长的方法结合使用。因此，在一些实 施方式中，使用针刺活检或手术活检获得的样品的一部分可W用于本发明的方法中，而相 同样品的另一部分可用于常规的诊断和/或预后方法中，由此降低了在对象中的昂贵和/ 或侵入性过程的需要。在一些实施方式中，本发明的方法和试剂盒与生长的常规组织学或 细胞学检查结合使用。
[0047] 在一些实施方式中，存在于样品水平中的中期因子水平被用来评估恶性程度，预 测疾病的预后，预测对治疗的响应，和/或指导针对生长的治疗的选择。
[0048] 本发明的一个优点是中期因子测定的高灵敏度