超纯水中，涡流振 荡使其充分溶解，质量浓度为〇.lmg/mL。
[0080] 标准液b的配置：分子天平称取5mg茶多酚标准品，溶于50mL超纯水中，涡流振荡 使其充分溶解，质量浓度为〇.lmg/mL。
[0081] 显色剂的配置：取1份福林酚试剂与9份蒸馏水混合，涡旋振荡混合均匀，体积浓 度为10%。
[0082] 显色稳定剂的配置：分子天平称取12mg碳酸钠粉末，溶于100mL超纯水中，涡流振 荡使其充分溶解，质量体积百分比浓度为12%。
[0083] 2、测定波长的确定
[0084] 用移液枪分别移取没食子酸标准液a和茶多酚标准液b，所述的标准液a和标准 液b的取样体积均为0. 16mL，分别置于标准管a和标准管b中；向2支标准管中均加入超纯 水和10%福林酚试剂，所述的超纯水和10%福林酚试剂的取样体积分别为0. 8mL、0. 4mL; 涡旋振荡，混匀静止3min后分别向2支管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体 积均为0. 64mL;最后用超纯水定容至4mL，35°C水浴反应1. 5h后，用紫外分光光度计在 400~800nm范围内扫描，选择最佳测定波长，整个实验过程应避光操作，最佳测定波长为 696nm(如图1所示）。
[0085] 3、显色稳定剂和显色剂体积比的确定
[0086] (1)显色稳定剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液，所述超纯水 和标准液的体积均为0. 16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；向7支试管均加入超 纯水和10%福林酚试剂，所述超纯水和10%福林酚试剂的取样体积分别为0. 8mL、0. 4mL; 涡旋振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积分 别为 0mL、0. 16mL、0. 32mL、0. 48mL、0. 64mL、0. 8mL、0. 96mL，最后 7 支试管均用超纯水定容至 4mL，35°C水浴反应1. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定碳酸钠溶液的用量，整个实验 过程应避光操作，显色稳定剂最佳体积为0. 16mL(如图2所示）。
[0087] (2)显色剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液，所述标准液的体 积均为〇. 16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；7支试管均加入超纯水，所述超纯水 的取样体积为〇.8mL，而后向7支试管中均加入10%福林酚试剂，所述10%福林酚试剂的 取样体积分别为 〇mL、0. 08mL、0. 16mL、0. 24mL、0. 32mL、0. 4mL、0. 48mL;涡旋振荡，混匀静止 3min后向7支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积0. 16mL，最后7支试管均 用超纯水定容至4mL，35°C水浴反应1. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定10%福林酚 溶液的用量，整个实验过程应避光操作。显色剂最佳体积为0. 48mL，显色稳定剂和显色剂的 最佳体积比为1:3 (如图3所示）。
[0088] 4、显色温度的确定
[0089] 用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述超纯水和标准液的体 积均为〇. 16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入蒸馏水和10%福 林酚试剂，所述超纯水和10 %福林酚试剂的取样体积分别为〇. 8mL和0. 48mL;涡旋振荡， 混匀静止3min后向10支试管加入12 %碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0. 16mL，最 后用超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，分别在 35°C、45°C、55°C、65°C、75°C水浴反应1. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应 的最佳温度，整个实验过程应避光操作，最佳显色温度为45°C(如图4所示）。
[0090] 5、显色时间的确定
[0091] 用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述标准液的体积均为 0. 16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入超纯水和10%福林酚试 剂，所述超纯水和10 %福林酚试剂的取样体积分别为〇. 8mL和0. 48mL;祸旋振荡，混匀静 止3min后向10支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0. 16mL，最后用超 纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，于45°C分别水 浴0. 5h、lh、l. 5h、2h、2. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应完全所需最佳时 间（如图5所示），整个实验过程应避光操作，最佳显色时间为0. 5h(如图5所示）。
[0092] 实施例2 :没食子酸标准曲线的建立
[0093] 根据实施例1优化的检测体系建立标准曲线：用移液枪移取0yL、20yL、40yL、 60yL、80yL、100yL、120yL、140yL、160yL、180yL、200yL、220yL、240yL没食子酸 标准液于13支具塞试管中，向13支试管均加入超纯水和10%福林酚试剂，所述超纯水和 10%福林酚试剂的取样体积分别为0. 8mL、0. 48mL;涡旋振荡，混匀静止3min后向13支标 准管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0. 16mL，最后用超纯水定容至4mL，13 支标准管于45°C水浴0. 5h后，在696nm波长处测定吸光度，整个实验过程应避光操作。分别 以以吸光度值和没食子酸浓度为纵、横坐标绘制标准曲线，并用最小二乘法得到拟合直线 回归方程：y= 0. 0694x+0. 0019,R2= 0. 9996。没食子酸标准溶液的质量浓度在0~6yg/ mL范围内与吸光度有良好的线性关系，可用于饮料样品总多酚的测定（如图6所示）。
[0094] 实施例3 :Folin_Ciocalteu分析方法的评价
[0095] 1、重复性评价
[0096] 该分析方法的重复性评价以组间实验进行验证。分别取5份0. 16mL稀释8倍的品 牌1混合果汁样品（市购）、5份0? 16mL稀释8倍的品牌2绿茶样品（市购）、5份0? 16mL 和品牌3果醋样品（市购）、5份0? 16mL稀释8倍的品牌4桃汁样品（市购）于20支具塞 试管中，按实施例1建立的显色体系测定吸光度，并根据实施例2建立的回归方程计算样品 所含多酚含量。计算相对标准偏差，评价分析方法的精密度。4种样品的5个平行实验测定 的相对标准偏差均远小于5%左右，表明该分析方法具有较高的精密度（如表1所不）。
[0097] 表1精密度实验结果
[0098]
[0099] 2、稳定性评价
[0100] 分别取0. 16mL稀释8倍的品牌1混合果汁样品（市购）、0. 16mL稀释8倍的品牌 2绿茶样品（市购）、0. 16mL品牌3果醋样品（市购）、0. 16mL稀释8倍的品牌4桃汁样品 (市购）各3个平行于12支具塞试管中，按实施例1建立的显色体系于反应后2. 5h内每 隔30min测定一次吸光度，并根据实施例1建立的回归方程计算样品所含多酚含量。计算 相对标准偏差，评价分析方法的稳定性。随着时间延长，4种样品的多酚含量基本趋于稳定， 测定的相对标准偏差均在1 %左右，多小于1 %，可见该分析方法稳定性高（如表2所示）。
[0101] 表2稳定性实验结果
[0102]
[0103] 3、加标回收评价
[0104] 取5份0. 16mL稀释8倍的农夫果园30%混合果汁饮料样品（市购），分别加入不 同体积（0. 016mL、0. 032mL、0. 048mL、0. 064mL、0. 08mL)的没食子酸标准液，按实施例1建立 的显色体系测定吸光度，并根据实施例1建立的回归方程计算样品所含多酚含量。计算没 食子酸的回收率和实验结果的相对标准偏差。另取5份0. 16mL稀释8倍的康师傅绿茶样 品（市购）、5份0? 16mL和宜露苹果醋样品（市购）、5份0? 16mL稀释8倍的汇源100%桃 汁样品（市购），操作与稀释8倍的农夫果园30%混合果汁饮料样品相同，计算其没食子酸 回收率和实验结果的相对标准偏差，评价实验方法的可靠性。4种样品的没食子酸加标回收 率均在97. 5%~120%之间，平均回收率在100%~110%之间，相对标准偏差在3. 4%~ 7. 1%之间，表明该方法准确度较高，可用于饮料总多酚含量的测定（如表3所示）。
[0105] 表3加标回收实验结果
[0106]
[0108] 实施例4 :试剂盒的制备
[0109] 1、试剂盒的组成：
[0110] (1) 1X标准液，10mL，标准液浓度为0?lmg/mL。
[0111]