算测定结果：
[0173] 计算公式：
[0174] C#:样品管浓度；A样品管吸光度；A&标准管吸光度值；C#:标准液浓度（已 知）。
【主权项】
1. 一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒，其特征在于试剂盒包括显色剂（氧化剂）、 显色稳定剂和标准液； 其中所述显色剂为氧化剂，显色剂采用福林酚试剂，体积浓度为10% ; 所述显色稳定剂为碳酸钠溶液，质量体积浓度为12% ; 所述标准液为没食子酸溶液，质量浓度为〇.lmg/mL。2. 根据权利要求1所述的用于检测饮品总多酚含量的试剂盒，其特征在于试剂盒检测 体系中优选地的多酸终浓度范围为〇~6yg/mL，所述显色体系中标准液的终浓度为4yg/ mL〇3. -种用于检测饮品总多酚含量试剂盒的制备方法，其特征在于制备过程包括以下步 骤： (1) 测定波长的确定 用移液枪分别移取没食子酸标准液a和茶多酚标准液b，所述的没食子酸标准液a和 茶多酚标准液b的取样体积均为0. 16mL，分别置于标准管a和标准管b中；向两支标准管 中均加入超纯水和10%福林酚试剂，所述的超纯水和10%福林酚试剂的取样体积分别为 0. 8mL、0. 4mL ;涡旋振荡，混匀静止3min后分别向两支标准管加入12%碳酸钠溶液，所述的 碳酸钠溶液的体积均为〇. 64mL ;最后用超纯水定容至4mL，35°C水浴反应1. 5h后，用紫外分 光光度计在400~800nm范围内扫描，选择最佳测定波长； 茶多酚标准液b为5mg茶多酚标准品溶解于50mL超纯水中，涡流震荡充分溶解而成； (2) 显色稳定剂和显色剂体积比的确定 显色稳定剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述超纯水和标 准液的体积均为〇. 16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；向7支试管均加入超纯水 和10%福林酚试剂，所述超纯水和10%福林酚试剂的取样体积分别为0. 8mL、0. 4mL ;涡旋 振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积分别为 0mL、0. 16mL、0. 32mL、0. 48mL、0. 64mL、0. 8mL、0. 96mL，最后7支试管均用超纯水定容至4mL， 35°C水浴反应1. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定碳酸钠溶液的用量； 显色剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述标准液a的体积均 为0. 16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；7支试管均加入超纯水，所述超纯水的取 样体积为〇.8mL，而后向7支试管中均加入10%福林酚试剂，所述10%福林酚试剂的取样体 积分别为 〇mL、0. 08mL、0. 16mL、0. 24mL、0. 32mL、0. 4mL、0. 48mL ;涡旋振荡，混匀静止3min后 向7支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积0. 16mL，最后7支试管均用超纯 水定容至4mL，35°C水浴反应1. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定10%福林酚溶液的 用量； (3)显色温度的确定 用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述超纯水和标准液的体积均 为0. 16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入蒸馏水和10%福林酚 试剂，所述超纯水和10%福林酚试剂的取样体积分别为〇. 8mL和0. 48mL ;祸旋振荡，混匀 静止3min后向10支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0. 16mL，最后用 超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，分别在35°C、 45°C、55°C、65°C、75°C水浴反应1. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应的最佳 温度； (4) 显色时间的确定 用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述标准液的体积均为0. 16mL， 分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入超纯水和10%福林酚试剂，所述 超纯水和10%福林酸试剂的取样体积分别为0. 8mL和0. 48mL;涡旋振荡，混匀静止3min后 向10支试管加入12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0. 16mL，最后用超纯水定容至 4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，于45°C分别水浴0. 5h、lh、 1. 5h、2h、2. 5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应完全所需最佳时间； (5) 没食子酸标准曲线的建立 根据以上优化的检测体系建立标准曲线：用移液枪移取0yL、20yL、40yL、60yL、 80yL、100yL、120yL、140yL、160yL、180yL、200yL、220yL、240yL没食子酸标准液于 13支具塞试管中，向13支试管均加入超纯水和10%福林酚试剂，所述超纯水和10%福林 酚试剂的取样体积分别为〇. 8mL、0. 48mL;涡旋振荡，混匀静止3min后向13支标准管加入 12%碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0. 16mL，最后用超纯水定容至4mL，13支标准管 于45°C水浴0. 5h后，在696nm波长处测定吸光度。分别以以吸光度值和没食子酸浓度为 纵、横坐标绘制标准曲线，并用最小二乘法得到拟合直线回归方程：y= 0. 0694x+0. 0019,R2 =0. 9996。4. 根据权利要求3所述的用于检测饮品总多酚含量试剂盒的制备方法，其特征在于 步骤（1)中优选地最佳测定波长为696nm; 步骤（2)中优选地显色稳定剂和显色剂的最佳体积比为1:3,显色稳定剂最佳体积为 0. 16mL，显色剂最佳体积为0. 48mL; 步骤（3)中优选地最佳显色温度为45°C; 步骤（4)优选地最佳显色时间为0. 5h; 步骤（5)优选地，所述标准曲线测量的检测体系中多酚终浓度范围为0~6iig/mL，确 定试剂盒标准液的终浓度为4yg/mL。5. 使用权利要求1和权利要求3所述的试剂盒进行饮品总多酚含量检测方法，其特征 在于测定步骤如下： (1) 用移液枪分别移取超纯水、标准液和液态待测样品，所述的超纯水、标准液和待测 样品的取样体积均为〇. 16mL，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中； (2) 在步骤（1)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入超纯水，所述的超纯水取样 体积为〇. 8mL; (3) 避光状态，在步骤（2)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色剂，所述显 色剂的取样体积为〇. 48mL，涡旋振荡，室温下避光静置3min; (4) 避光状态，在步骤（3)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色稳定剂，所 述的显色稳定剂的取样体积均为0. 16mL，3支管均用超纯水定容至4mL，所述的超纯水的取 样体积为2. 4mL，涡旋振荡充分混匀，45°C水浴30min后用紫外分光光度计或半自动生化分 析仪测定； (5) 取步骤（4)所得各管的混合液在半自动生化分析仪上测定，测定遵循以下顺序： a)在半自动生化分析仪上设定相关参数，波长（696nm)，温度（37°C)，延迟时间（2s)， 测量时间（2s)，试剂空白（要），标准值（4.0yg/mL)，吸入量（lOOOyL); b)按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入蒸馏水、试剂空白、标准液（定标）、样品进 行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白吸光值、标准液吸光值、系数、样品液吸光 值及样品液总多酚浓度； (6)取步骤（4)所得各管的混合液用5_比色皿在紫外分光光度计上测定，试剂空白调 零，测定标准液和样品液吸光度值，按以下公式计算测定结果： 计算公式其中C# :样品液浓度；A# :样品液吸光度；A# :标准液吸光度值；C# :标准液浓度（已 知）。
【专利摘要】本发明提供了一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒、制备方法和使用试剂盒进行饮品中总多酚含量检测的方法，属于食品营养检测领域。所述的试剂盒包括显色剂、显色稳定剂和标准品，本发明采用优化的Folio-Ciocalteu法，饮品样本与组合试剂在45℃水浴反应0.5h后显色，降低了显色反应时间；所述试剂盒在紫外分光光度计和半自动生化分析仪的应用简单易行、灵敏度高、无需制定标曲，大大缩短检测时间，尤以半自动生化分析仪的应用，可直观读取检测结果，降低检测难度；可同时对多个饮品样本进行显色和检测，高效、准确、快捷，易于批量检测。因此，本申请的试剂盒和检测方法在液体或固体饮品总多酚含量检测中具有很大的应用前景。
【IPC分类】G01N21/78
【公开号】CN105021608
【申请号】CN201510512454
【发明人】陈朝银, 李 杰, 赵声兰, 葛锋, 刘迪秋
【申请人】昆明理工大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年8月20日