钵中，分别加入0.2g甲基转移酶，1.0gl-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，17g负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物，混合均匀，在玛瑙研钵中研磨均匀，即得甲基转移酶/1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐/负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物碳糊；然后将其碳糊装入连有铜线的内经为Φ4_的玻璃管内，压实，用金相砂纸打磨，抛光，去离子水洗涤，即得碳糊电极；
(4)纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备:取质量百分浓度为0.5%的壳聚糖乙酸溶液15 μ L滴涂在步骤(3)制备的碳糊电极的表面，于室温干燥，再将电极浸泡在质量百分浓度为0.2%的戊二醛溶液中1.5 h，取出后，再于其表面滴涂15yL 15mg/mL的甲基转移酶的溶液，于5~8°C干燥，即得纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极。
[0017]实施例2
(1)碳纳米管和石墨粉预处理:在反应器中，分别加入15g石墨粉，4g碳纳米管，14mL浓硫酸，5mL浓硝酸，于90°C恒温反应3h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，即得预处理碳纳米管和石墨粉混合物；
(2)碳纳米管和石墨粉负载纳米铂的制备:在反应器中，分别加入13g预处理碳纳米管和石墨粉混合物，45mL丙酮，超声分散10 min, 1.0g氯铀酸，搅拌溶解，再加入3.0g梓檬酸，搅拌均匀，调节pH=7.5，将温度升至120°C恒温反应20h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，即得负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物；
(3)碳糊电极的制备:在玛瑙研钵中，分别加入0.1g甲基转移酶，0.Sgl-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，9g负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物，混合均匀，在玛瑙研钵中研磨均匀，即得甲基转移酶/1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐/负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物碳糊；然后将其碳糊装入连有铜线的内经为Φ4_的玻璃管内，压实，用金相砂纸打磨，抛光，去离子水洗涤，即得碳糊电极；
(4)纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备:取质量百分浓度为0.5%的壳聚糖乙酸溶液15 μ L滴涂在步骤(3)制备的碳糊电极的表面，于室温干燥，再将电极浸泡在质量百分浓度为0.2%的戊二醛溶液中2 h，取出后，再于其表面滴涂15 μ L 15mg/mL的甲基转移酶的溶液，于5~8°C干燥，即得纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极。
[0018]实施例3
(1)碳纳米管和石墨粉预处理:在反应器中，分别加入1g石墨粉，6g碳纳米管，13mL浓硫酸，7mL浓硝酸，于80°C恒温反应5h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，即得预处理碳纳米管和石墨粉混合物；
(2)碳纳米管和石墨粉负载纳米铂的制备:在反应器中，分别加入7g预处理碳纳米管和石墨粉混合物，15mL丙酮，超声分散10 min,0.6g氯铀酸，搅拌溶解，再加入1.0g梓檬酸，搅拌均匀，调节pH=8.5，将温度升至120°C恒温反应24h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，即得负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物；
(3)碳糊电极的制备:在玛瑙研钵中，分别加入0.5g甲基转移酶，5gl-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，40g负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物，混合均匀，在玛瑙研钵中研磨均匀，即得甲基转移酶/1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐/负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物碳糊；然后将其碳糊装入连有铜线的内经为Φ4_的玻璃管内，压实，用金相砂纸打磨，抛光，去离子水洗涤，即得碳糊电极；
(4)纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备:取质量百分浓度为0.5%的壳聚糖乙酸溶液15 μ L滴涂在步骤(3)制备的碳糊电极的表面，于室温干燥，再将电极浸泡在质量百分浓度为0.2%的戊二醛溶液中lh，取出后，再于其表面滴涂15 μ L 15mg/mL的甲基转移酶的溶液，于5~8°C干燥，即得纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极。
[0019]实施例4
(1)碳纳米管和石墨粉预处理:在反应器中，分别加入22g石墨粉，7g碳纳米管，IImL浓硫酸，7mL浓硝酸，于88°C恒温反应4.5h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，即得预处理碳纳米管和石墨粉混合物；
(2)碳纳米管和石墨粉负载纳米铂的制备:在反应器中，分别加入32g预处理碳纳米管和石墨粉混合物，76mL丙酮，超声分散10 min, 2.0g氯铀酸，搅拌溶解，再加入6.0g梓檬酸，搅拌均匀，调节pH=7.8，将温度升至120°C恒温反应23h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，即得负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物；
(3)碳糊电极的制备:在玛瑙研钵中，分别加入0.25g甲基转移酶，1.0gl-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，22g负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物，混合均匀，在玛瑙研钵中研磨均勾，即得甲基转移酶/1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐/负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物碳糊；然后将其碳糊装入连有铜线的内经为Φ4_的玻璃管内，压实，用金相砂纸打磨，抛光，去离子水洗涤，即得碳糊电极；
(4)纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备:取质量百分浓度为0.5%的壳聚糖乙酸溶液15 μ L滴涂在步骤(3)制备的碳糊电极的表面，于室温干燥，再将电极浸泡在质量百分浓度为0.2%的戊二醛溶液中1.5h，取出后，再于其表面滴涂15 μ L 15mg/mL的甲基转移酶的溶液，于5~8°C干燥，即得纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极。
[0020]实施例5
将上述实施例1~4所制备的纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极传感器，用于药品中SAM的检测，步骤如下:
(1)标准溶液配制:配制一组包括空白标样在内的不同浓度的SAM标准溶液，底液为pH7.5的磷酸盐缓冲溶液；
(2)工作曲线绘制:将Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为辅助电极，本发明制备的电极为工作电极组成三电极系统，连接CHI660B电化学工作站，采用计时电流法扫描该溶液，工作电压为-1.1V，取不同浓度下SAM的峰电流值与SAM浓度做工作曲线，工作曲线的回归方程为1=0.018+0.356c ( μ mol/L)，相关系数R=0.9992，检测的线性范围为0.5?15 ymol/L，检出限 1.12X10 mol/L ；
(3)SAM的检测:取思美泰药片20片，研磨后，用去离子水浸去I小时，过滤，滤液定容在250 mL容量瓶中，测定时稀释到工作曲线范围内，用待测样品代替步骤(I)中的SAM标准溶液，按照步骤(2)的方法进行检测，根据响应电流值和工作曲线，得到待测样品中SAM的含量；回收率在95.86-104.8%之间。
[0021]本发明制备的固载甲基转移酶电极传感器成功用于药品、食品、生物样品中SAM的检测中，回收率在95.86-104.8%之间，因此本发明制备的分子印迹传感器可广泛应用于化工、生物医药、食品、环保检测等相关领域，解决了 SAM检测的困难。
【主权项】
1.一种纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备方法，其特征在于，该方法具有以下工艺步骤: (1)碳纳米管和石墨粉预处理:在反应器中，按如下质量百分比加入石墨粉:20~30%，碳纳米管:8~15%，浓硫酸:40~50%，浓硝酸:10~20%，各组分之和为百分之百，于80~90°C恒温反应3~5h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，即得预处理碳纳米管和石墨粉混合物； (2)碳纳米管和石墨粉负载纳米铂的制备:在反应器中，按如下质量百分比加入预处理碳纳米管和石墨粉混合物:25~35%，丙酮:58~70%，超声分散10 min，加入氯铂酸:1~5%，搅拌溶解，再加入柠檬酸:3~6%，搅拌均匀，调节pH=7.5-8.5，将温度升至120°C恒温反应20~24h，冷却至室温，过滤，用去离子水洗涤为中性，在恒温干燥箱中干燥，研磨至粉末，SP得负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物； (3)碳糊电极的制备:将甲基转移酶:1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐:负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物按质量比为1:4~10:80~90混合均匀，在玛瑙研钵中研磨均匀，即得甲基转移酶/1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐/负载纳米铂碳纳米管和石墨粉混合物碳糊；然后将其碳糊装入连有铜线的内经为Φ4_的玻璃管内，压实，用金相砂纸打磨，抛光，去离子水洗涤，即得碳糊电极； (4)纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备:取质量百分浓度为0.5%的壳聚糖乙酸溶液15 μ L滴涂在步骤(3)制备的碳糊电极的表面，于室温干燥，再将电极浸泡在质量百分浓度为0.2%的戊二醛溶液中1~2 h，取出后，再于其表面滴涂15 μ L 15mg/mL的甲基转移酶的溶液，于5~8°C干燥，即得纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极。2.根据权利要求1所述的一种纳米铀掺杂/酶修饰碳糊电极的制备方法，特征在于，步骤(4)所述的甲基转移酶为E.C.2.1.1.3型甲基转移酶。3.根据权利要求1所述的一种纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备方法所制备的纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极传感器，特征在于，所制备的电极传感器用于样品中SAM的测定。
【专利摘要】本发明公开了/一种纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极的制备方法及应用，其特征是：在碳糊电极中掺杂纳米铂离子，以1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐作为胶粘剂，将碳纳米管与石墨粉混合制备的碳糊电极，然后将甲基转移酶修饰碳糊电极上，即得纳米铂掺杂/酶修饰碳糊电极。比普通的碳糊电极导电性能提高1~2倍，电化学窗口宽、制备方法简单、成本低、表面易更新、残余电流小等优点；用该电极快速检测样品中SAM，该方法灵敏度高、选择性好、响应时间短、干扰少，优于其它检测方法，是一种简单快速、方便易行的SAM测定方法，本申请制备的固定甲基转移酶电极传感器成本低、制备工艺简单，特异性好，具有实现自动化现场测定的潜力。
【IPC分类】G01N27/30, G01N27/26
【公开号】CN105044171
【申请号】CN201510389581
【发明人】李慧芝, 许崇娟, 杨春霞
【申请人】济南大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月6日