并用，能够测定受试者的糖/脂肪酸燃烧比。根据该方法，能够代替呼吸商且比呼吸商更灵敏地测定受试者将糖类和脂肪酸中的哪一个用作能量来源。此外，根据通过本发明的方法得到的“糖/脂肪酸燃烧比”也能够高精度地评价受试者的胰岛素抵抗性。
【附图说明】
[0063][图1]表示向禁食过的Zucker系大鼠经口施予(po)(—?一)或静脉注射(iv)(一 ■一)1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(% )的推移。纵轴表示呼出气中的Λ 13C (%ο )，横轴表示施予1-13C-棕榈酸钠后的各测定时间(t分钟)(实验例I)。
[0064][图2]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉注射U-13C-葡萄糖溶液后测得的呼出气中的A13C(%。)的推移。(A)表示Lean大鼠(禁食:一?一，非禁食:一 ?一)的结果，(B)表示Fatty大鼠(禁食:一 ■一，非禁食:一 □一)的结果。纵轴表示呼出气中的Λ 13C(% )，横轴表示施予U-13C-葡萄糖溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。
[0065][图3]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉注射1-13C-乙酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。(A)表示Lean大鼠(禁食:一?一，非禁食:一 ?一)的结果，(B)表示Fatty大鼠(禁食:一 ■一，非禁食:一 □一)的结果。纵轴表示呼出气中的Λ 13C(% )，横轴表示施予1-13C-乙酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。
[0066][图4]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉注射1-13C-辛酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。(A)表示Lean大鼠(禁食:一?一，非禁食:一 ?一)的结果，(B)表示Fatty大鼠(禁食:一 ■一，非禁食:一 □一)的结果。纵轴表示呼出气中的Λ 13C(%ο )，横轴表示施予1-13C-辛酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。
[0067][图5]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉注射1-13C-月桂酸溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。(A)表示Lean大鼠(禁食:一?一，非禁食:一 ?一)的结果，(B)表示Fatty大鼠(禁食:一 ■一，非禁食:一 □一)的结果。纵轴表示呼出气中的Λ 13C(%ο )，横轴表示施予1-13C-月桂酸溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。
[0068][图6]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。(A)表示Lean大鼠(禁食:一?一，非禁食:一 ?一)的结果，(B)表示Fatty大鼠(禁食:一 ■一，非禁食:一 □一)的结果。纵轴表示呼出气中的Λ 13C(%ο )，横轴表示施予1-13C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2)。
[0069][图7]表示向禁食或非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean及Fatty)静脉注射1-13C-油酸溶液后测得的呼出气中的Λ 13C (%ο)的推移。(A)表示Lean大鼠(禁食:一 ?一，非禁食:一 ?一)的结果，(B)表不Fatty大鼠(禁食:一 ■一，非禁食:一 □一)的结果。纵轴表示呼出气中的Λ 13C(%。)，横轴表示施予1-13C-油酸溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例2) ο
[0070][图8]表示向LETO及OLETF系大鼠(禁食组、非禁食组)的各组静脉施予1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。(A)表示LETO系大鼠(禁食:一?一，非禁食:一?一)的结果，(B)表示OLETF系大鼠(禁食:一 ■一，非禁食:一 □一)的结果。纵轴表不呼出气中的Λ 13C(%ο)，横轴表不施予1-13C-棕榈酸钠溶液后的呼出气米集时间(t分钟)(实验例3)。
[0071][图9](A)表不向禁食状态的ZDF系大鼠(Lean: — ?一，Fatty: — ■—)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。⑶表示向非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean: — ?一，Fatty: 一 □一)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的A13C(%。)的推移。(A)及⑶中，纵轴表不呼出气中的Λ 13C(%。)，横轴表不施予1-13C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例3)。
[0072][图10](A)表示向禁食状态的LETO大鼠(一?—)及OLETF大鼠(一■—)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。⑶表示向禁食状态的LETO大鼠(一 ?一)及OLETF大鼠(一 □一)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的A13C(%。)的推移。(A)及(B)中，纵轴表不呼出气中的Λ 13C(%。)，横轴表不施予1-13C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例3)。
[0073][图11](A)表不向非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean: — ? —，Fatty: — □—)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。⑶表示向禁食状态的ZDF系大鼠(Lean: — ?一，Fatty: 一 ■一)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的A13C(%。)的推移。(A)及⑶中，纵轴表不呼出气中的Λ 13C(%。)，横轴表不施予1-13C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例4)。
[0074][图12](A)表示向非禁食状态的LETO大鼠(一?—)及OLETF大鼠(一□—)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的Λ 13C(%。)的推移。⑶表示向禁食状态的LETO大鼠(一?一)及OLETF大鼠(一 ■一)静脉注射1-13C-棕榈酸钠溶液后测得的呼出气中的A13C(%。)的推移。(A)及⑶中，纵轴表不呼出气中的Λ 13C(%。)，横轴表不施予1-13C-棕榈酸钠溶液后的呼出气采集时间(t分钟)(实验例4)。
[0075][图13]表示针对处于禁食状态及处于非禁食状态的ZDF系大鼠(Lean: — ?一，Fatty: -□-)进行测定而得到的呼吸商(RQ)的平均值土SD(实验例4)。
[0076][图14]表示针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)、分别以禁食状态下的值和非禁食状态下的值来比较实验例2中通过(a)U-13C葡萄糖溶液施予(禁食状态、非禁食状态)得到的Λ 13C (%。) AUC (120分钟)与通过(f) 1-13C棕榈酸钠溶液施予(禁食状态、非禁食状态)得到的Λ 13C (%。) AUC (60分钟)的比率(AUC[U-13C-葡萄糖]/AUC[1-13C-棕榈酸钠])的结果O
[0077][图15]表示针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)、分别以禁食状态下的值和非禁食状态下的值来比较血糖值的倒数(禁食状态、非禁食状态)与实验例2中通过(f) 1-13C棕榈酸钠溶液施予(禁食状态、非禁食状态)得到的Λ 13C (%。)的AUC (60分钟)的比率([I/血糖值]/AUC[1-13C-棕榈酸钠])的结果。
[0078][图16]表示针对ZDF系大鼠(Lean及Fatty)、分别以禁食状态下的值和非禁食状态下的值来比较血糖值的倒数(禁食状态、非禁食状态)与实验例2中通过(f) 1-13C-棕榈酸钠溶液施予(禁食状态、非禁食状态)得到的Λ 13C(%ο)的Cmax的比率([I/血糖值]/Cmax [1-13C-棕榈酸钠])的结果。
[0079][图17]自左侧起依次表示向对照组(非禁食时的血糖值:108mg/dL)、轻度糖尿病组(非禁食时的血糖值:166mg/dL)及重度糖尿病组(非禁食时的血糖值:281mg/dL)静脉内施予3-13C-葡萄糖与1-13C-棕榈酸钠的混合溶液、从利用呼气试验测得的13CO2浓度算出的Λ 13C(%。)的推移。
【具体实施方式】
[0080](I)对与标i己C-呼气试验相关的术语及分析方法的说明
[0081]本发明的胰岛素抵抗性及糖/脂肪酸燃烧比的测定方法以采用13C-呼气试验等标记C-呼气试验为基础。因此，在说明本发明之前，对与标记C-呼气试验相关的术语及其分析方法进行说明。
[0082]需要说明的是，此处，作为本发明中使用的“同位素C”的一个例子，示例13C进行说明。
[0083](I) 1-Cjj (%>)
[0084]表示同位素的存在比例时，采用将同一元素中组成比例最高的元素作为分母的同位素比(R)。因此，碳13 (13C)的R值用以碳12 (12C)作为分母的下式表示。
[0085]R = 13CZ12C......(式 I)
[0086]由于R是非常小的数值，因此难以直接进行测定。为了更准确地进行定量而使用质谱仪时，常与标准物质进行比较，测定结果用下式定义的δ值表示。
[0087]δ 13C = ([Rsam/Rstd1- D X 1000 ……(式 2)
[0088]δ 13C: δ 13C 值(%0 )
[0089]Rsam:样品气中的13C存在比例
[0090]Rstd:标准气中的13C存在比例
[0091]需要说明的是，使用来自石灰石的二氧化碳(I3DB)作为标准气时，Rstd为Rpdb =0.0112372ο
[0092](2) A_-Cjj (%n)
[0093]如下式所示，“ Δ 13C值(％。) ”是指将施予试剂前的δ 13C值(S卩，天然存在的13C的δ值)作为背景(back ground)从施予试剂后的δ 13C值中减去而得到的值(Δ 13C)。
[0094]Δ 13C (%。)= ( δ 13C) t— ( δ 13C) 0......(式 3)
[0095]Δ 13C (%。): δ 13C 值变化量(％。)
[0096]( δ 13C) t:施予试剂后t小时处的δ 13C值(％。)
[0097]( δ 13C)。:施予试剂前O小时处的δ 13C值(％。)
[0098](3)呼出气中的11C 浓度(% -C:atom% )
[0099]呼出气中的13C浓度13C:atom% )用下式定义。
[0100]% 13C = [13C/ (13C+12C) ] X 100
[0101]为了将⑴中定义的相对值S13C值转换为总碳中的总碳中的13C含量(％ )(其为通常的浓度的概念)的形式，可以采用下述方法。
[0102]首先，将上式的右边的分母和分子除以12C，基于(式I)转换为R，则成为下式。
[0103]% 13C = [R/(R+1)] XlO0......(式 4)
[0104]将(式2)中求出的Rsam代入该R中进行整理，则成为下式，可以用δ 13C值表示13C浓度(％ 13C)。
[0105]% 13C = {[( δ 13C/1000)+1] XRpdbX 100}/{[[( δ 13C/1000)+1] X Rpdb]+1}…(式5)
[0106]% 13C:13C 浓度(atom% )
[0107]δ 13C: δ 13C 值(％0 )
[0108]Rpdb:PDB标准气中的13C存在比例=(λ 0112372
[0109]⑷11C浓度的夺化量(A % 1^C)
[0110]如下式所定义地那样，呼出气中的13C浓度13C)的变化量(△ % 13C)，可以通过将施予前O小时的13C浓度〔(％ 13O0)从施予t小时后的13C浓度〔(％ 13Ot)中减去而求出。
[0111]Δ % 13C = (% 13Ot- (% 13O0......(式 6)
[0112]Δ % 13C:13C 浓度变化量(atom% )
[0113](% 13C) t:施予试剂t小时后的13C浓度(atom% )
[0114](% 13C)。:施予试剂前O小时处的13C浓度(atom% )
[0115](5) A^c值(%0)与uC浓度变化暈(A %化)的关系
[0116]13C的天然存在比例(R)为约0.011，即使在施予标记试剂的情况下，呼出气中的增加量也仅为+0.001?0.002左右。因此，可以视为天然存在比例R — 0，用R表示％ 13C的(式4)可以用下式进行近似。
[0117]% 13C = [R/ (R+l) ] X 100 ^ RX 100
[0118]使用上述近似式，首先利用作为δ 13C的定义的(式2)求出Rsam，将其代入上式的R中进行整理，则可得到计算13C浓度的近似(式7)。
[0119]% 13C = [( δ 13C/1000)+1] XRpdbX10......(式 7)
[0120]将其代入(式6)，则如下式(式8)所示，可以由A13C算出Δ % 13C0
[0121]Δ % 13C = (% 13Ot- (% 13O0
[0122]= {[( δ 13Ot- ( δ 13C)。]/1000} XRpdbX10
[0123]= (A13C X Rpdb)/10 ……(式 8)
[0124]Δ % 13C:13C 浓度变化量(atom% )
[0125]Δ 13C: δ 13C 值变化量(%0 )
[0126]Rpdb:PDB标准气中的13C存在比例=0.0112372
[0127](II)用于测定胰岛素抵抗性的组■合物
[0128]本发明的用于测定胰岛素抵抗性的组合物以经至少一个同位素C标记的碳原子数为12?38的脂肪酸或其盐作为有效成分，所述脂肪酸或其盐在机体内被转化为标记的CO2气体而被排出至呼出气中。可在本发明中使用的标记C-脂肪酸或其盐具有下述特性:施予至受试者后，根据体内的脂质代谢能力而进行代谢，以含有标记C的二氧化碳(其反映了脂质代谢能力的大小)的形式排出至呼出气中。
[0129]作为可在本发明中使用的脂肪酸，如上所述可举出碳原子数为12?38的脂肪酸。这些脂肪酸中包括碳原子数为12?小于18的中链脂肪酸、碳原子数为18?小于24的长链脂肪酸、碳原子数为24?28的极长链脂肪酸、碳原子数为30?38的超长链脂肪酸。优选为碳原子数为12?28的中链、长链及极长链的脂肪酸，更优选为碳原子数为12?小于24的中链及长链脂肪酸。具体而言，可举出月桂酸(C12)、肉豆蔻酸(C14)、十五烷酸(C15)、棕榈酸(C16)、硬脂酸(C18)及花生酸等饱和脂肪酸；棕榈油酸(C16)、油酸(C18)、异油酸(C18)及神经酸(C24)等具有一个双键的不饱和脂肪酸；亚油酸(C18)、8，11-二十碳二烯酸(8，11-1cosadienoic acid)等具有两个双键的不饱和脂肪酸；亚麻酸(C18)、花生四稀酸(C20)等具有三个以上双键的不饱和脂肪酸。优选为饱和脂肪酸及具有一个双键的不饱和脂肪酸，其中优选为月桂酸(C12:0)、硬脂酸(C18:0)、棕榈酸(C16:0)及油酸(C18:l)，更优选为硬脂酸(C18)及棕榈酸(C16)。
[0130]作为可用于标记构成脂肪酸的碳原子的同位素，没有特别限定，具体可举出13C及14Co上述同位素无论为放射性及非放射性均可，但从安全性的观点考虑优选为非放射性同位素。作为上述同位素，可合适地举出13c。
[0131]同位素元素一标记脂肪酸是以下述方式标记而成的:经由脂质代谢途径(脂肪酸代谢途径)生成的CO2中的至少一部分被同位素标记。例如，作为如上所述的同位素元素一标记脂肪酸，可举出脂肪酸的I位的碳原子被同位素标记而形成的化合物，具体可举出1-13C标记脂肪酸。此外，也可以是脂肪酸的至少I位的碳原子被同位素标记而形成的的化合物，即，可以是除I位的碳原子以外、其他碳原子中的任意I个以上或全部碳原子被同位素标记而形成的化合物。用13c、14c等同位素标记脂肪酸等化合物的方法没有特别限定，可广泛采用通常所使用的方法(佐佐木，“5.1稳定同位素在临床诊断中的应用”:化学领域107 “稳定同位素在医.药学、生物学中的应用”，pp.149-163 (1975)，南江堂；梶原，RAD1ISOTOPES，41，45-48 (1992)等)。这些同位素标记化合物、尤其是实施例中示出的1-13C标记-月桂酸、1-13C标记-棕榈酸、1-13C标记-硬脂酸、1-13C标记