刺激信号 时可以通过免疫活化DNA分子诱导B细胞增殖，而所述B细胞增殖通常需要来自辅助T细 胞的共刺激信号。
[0034] 在另一方面，免疫抑制应当理解为减低免疫系统的活化或效力。通常故意诱导免 疫抑制以防止例如移植器官的排斥，以治疗骨髓移植后的移植物抗宿主病，或用于治疗自 身免疫病，例如类风湿关节炎或克罗恩氏病（Crohn'sdisease)。
[0035] 在这个背景下，免疫调节还可以指对免疫反应本质或特性的影响，其通过影响仍 在发育或成熟的免疫反应或通过调节已经建立的免疫反应的特性。
[0036] 本公开使用的术语"疫苗接种"指的是施用抗原性材料（疫苗）以产生对疾病的 免疫。疫苗可以预防或改善许多病原体例如病毒、真菌、原生动物寄生虫、细菌感染的效果， 以及预防或改善变应性疾病和哮喘以及肿瘤的效果。疫苗通常含有用于加强免疫应答的一 或多种佐剂，例如，免疫活化核酸。通常认为疫苗接种是最有效且经济的预防传染病和其它 疾病的方法。
[0037] 所施用的材料可以，例如是病原体（细菌或病毒）活的但弱化的形式，所述病原体 的死亡的或灭活的形式、纯化的材料如蛋白质、编码抗原的核酸、或细胞例如肿瘤细胞或树 突细胞。特别是，最近已经开发了DNA疫苗接种。DNA疫苗接种通过将编码抗原的DNA插入 人或动物细胞（且表达，引起免疫系统识别）而生效。免疫系统中一些识别表达的蛋白的 细胞将发动对这些蛋白和表达这些蛋白的细胞的攻击。DNA疫苗的一个优势是其非常易于 生产和储存。此外，相对于常规疫苗，DNA疫苗具有多种优势，包括诱导更宽范围的免疫应 答类型的能力。
[0038] 疫苗接种可以用作预防性方法，在疫苗接种的健康个体暴露于抗原后产生针对所 述抗原的免疫力。或者，治疗性疫苗接种通过将经疫苗接种的患病个体的免疫系统导向抗 原，可以导致所述免疫系统应答的加强。预防性和治疗性疫苗接种均可以应用于人类以及 动物。
[0039] 术语"癌症"包括被治疗或预防的癌性疾病或肿瘤，其选自包括但不限于乳腺癌、 黑色素瘤、皮肤肿瘤、淋巴瘤、白血病、胃肠肿瘤，包括结肠癌（coloncarcinomas)、胃癌、胰 腺癌、结肠癌（coloncancer)、小肠癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、前列腺癌、肾细胞癌和/或肝 转移的组。
[0040] 本公开的自身免疫病包括类风湿关节炎、克罗恩氏病、全身性红斑狼疮（SLE)、自 体免疫甲状腺炎、自身免疫性甲状腺炎、多发性硬化、格雷夫斯病、重症肌无力、乳糜泻和阿 迪森氏病。
[0041] 在使用单链末端环中具有未甲基化CG序列的免疫活化哑铃状DNA构建体的实验 中，得出免疫活化和效应物途径的特定细胞类型的频率升高与使用DNA构建体的成功治疗 相关。
[0042] 在脊椎动物中，所谓的"toll样受体（TLR) "是其天生免疫系统的部分。TLRs是特 异性免疫受体的家族，当它们感测到高度保守的病原体相关的分子模式时会引起保护性免 疫反应，分子模式例如为蛋白质、脂质结构、碳水化合物结构和某些核酸。对几种TLRs的合 成的激动剂，包括TLR-3、TLR-4、TLR-7、TLR-8和TLR-9已经被发展用于癌症的治疗，通常 用于肿瘤存在时活化免疫系统。TLR-9识别包含未甲基化CG的DNA序列的存在，其通常在 细菌中被发现，但是实际上不在人类染色体组的DNA。因此包含未甲基化CG的DNA序列已 经被设计为人造TLR-9激动剂。这样的包括未甲基化CG的DNA构建体的效应取决于它们 与TLR-9的相互作用，并且DNA-蛋白质的相互作用取决于DNA和蛋白质两者的构象。实验 数据表明哑铃状DNA分子出人意料的适用于诱导免疫应答。
[0043] 为了识别预测是否癌症患者会对TLR-9激动剂的施加有反应的工具，使用了在单 链末端环中具有未甲基化CG基序的哑铃状DNA构建体。
[0044] 总计46位患有转移性结直肠癌的患者被选择进行研究，他们先前已经采用标准 一线联合治疗方法（使用或没有使用人体单克隆抗体抑制血管内皮细胞生长因子A)治疗 了 4. 5-6个月。在约1-6星期的无治疗间隔后，对患者进行了随机选择，这样32个患者接 受了每剂量60mg的DNA构建体MGN1703,并且14个患者接受了安慰剂，每个患者每周两次 皮下注射。
[0045] 在12星期的治疗后，所有的患者对肿瘤发展进行了检查。基于肿瘤发展的存在 或缺少，患者被分为两组，称为"PFS组"。肿瘤没有发展的患者被称为未发展患者且标记为 "PFS1"，同时肿瘤发展了的患者标记为"PFS0"。显然，肿瘤没有发展（PFS1)显示了对治疗 有反应的可能性，同时肿瘤生长（PFS2)显示了缺少反应。对每个患者继续治疗直到发现肿 瘤的发展。
[0046] 表1总结了结果。显然几乎所有的没有发展的患者都接受了DNA构建体。
[0047] 表1 :患者的名称
[0048]
[0049] 在MGN1703或安慰剂的第一次施用之前（位于基线），收集患者的血液样品。下面 的免疫变量的分布，例如整个PBMC群体的部分以及活化的和未活化的子群体的关系被确 定。调查了 12星期后的各PFS组名称的相关性和基线处的所有免疫变量。确定了下列免 疫变量：单核细胞、活化的单核细胞1、活化的单核细胞2、B细胞、活化的B细胞，T细胞，活 化的T细胞，天然杀伤（NK)细胞、活化的NK细胞、NKT细胞、活化的NKT细胞、浆细胞样树 突细胞（pDCs)、活化的pDCs、骨髓状树突细胞（mDCs)、和活化的mDCs。表2总结了细胞类 型、⑶s和确定的频率。
[0050] 表2 :细胞类型、⑶s和确定的频率的关系
[0051]
[0052] 为了评估是否免疫变量中的一个可以用作正确的生物标记物，所谓的Cox回归被 用于计算每个免疫变量。Cox回归允许不考虑任何冒险函数的情况下估计参数的效果。从 这样的计算中得到的冒险率可以为低于1，并且涉及显著的P值低于〇.〇5。另一方面，观察 到的效果不涉及施加的TLR-9激动剂。那些标准仅施加到活化的NKT细胞，具有冒险率为 大约0. 933和p值为0. 0309。
[0053] 出人意料的，活化的NKT细胞的百分比可以被用于预测verum组的治疗成功结果。 活化的NKT细胞的百分比和PFS组状况之间的关系采用先进的、已建立的统计学分析在 verum组中进行研究。
[0054] 受试者工作特性（R0C)曲线、或单纯的R0C曲线，显示了二进制分类系统的性能， 同时它的辨别阈值是变化的。R0C曲线通过绘制在不同阈值设置下从阳性中得出的真阳性 的分数对从阴性中得出的假阳性而得到。真阳性也称为灵敏度，并且假阳性为1减去特异 度或真阴性率。
[0055] 几十年来R0C分析被用于药物、放射学、生物测定学、和其他领域，并且正越来越 多地用于机器学习和数据挖掘的研究。在生物标记物中，它可以用于研究是否潜在的生物 标记物可以具有临床效力，也就是说它可以用于预测目的。成功的诊断实验或生物标记物 将得到曲线，其弯曲在对角线上方，同时不成功的实验将反射对角线，或落到对角线下面。 因此，R0C曲线提供了诊断实验是否成功的信息。
[0056] verum患者的活化的NKT细胞的R0C曲线被建立（图1)。曲线下面的区域被确定 为0.71，其为生物标记物的可靠度的清楚的指示。约登指数，其可以用于确定实验读数的最 佳界限值，显示了最佳界限为3. 08%活化的NKT细胞。图2显示了活化的NKT细胞对灵敏 度和特异度。
[0057] 所有的患者现在根据他们的活化NKT细胞的水平被分类成组。细胞水平高于界限 3. 08%活化的NKT细胞的患者被称为生物标记物阳性，同时低于界限水平的患者被称为生 物标记物阴性。
[0058] 图3a显示了verum和安慰剂的生物标记物阳性患者的Kaplan-Meier图（实线： 用MGN1703治疗的患者；虚线：用安慰剂治疗的患者）。显然生物标记物阳性组的存活可能 性出人意料地与TLR-9激动剂的施用有关。
[0059] 图3b显示了verum和安慰剂的生物标记物阴性患者的Kaplan-M