一种同时测定舒肝健胃丸中五种活性成分的方法
【专利摘要】一种同时测定舒肝健胃丸中五种活性成分的方法，包括以下步骤：（1）对照品溶液制备：分别制得浓度为241 μg·mL?1- 的芍药苷、1420 μg·mL?1的橙皮苷、208 μg·mL?1的柚皮苷、438 μg·mL?1的和厚朴酚和458 μg·mL?1的厚朴酚；将上述各溶液置于5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，得混合对照品溶液；（2）供试品溶液制备；（3）色谱条件：采用TC?C18色谱柱；乙腈（A）?水（B）作为流动相，梯度洗脱：0?15 min，22%?22%的乙腈；15?25 min，22%?72%的乙腈；25?35 min，72%?72%的乙腈；35?40 min，72%?90%的乙腈；40?50 min，90%?90%的乙腈；50?55 min，90%?22%的乙腈；检测波长：0?10min，230nm；10?20 min，280nm；20?55 min，294 nm；流速1.0 mL·min?1；检测器：VWD检测器；柱温：25℃；进样量：10 μL；（4）测定。方法简单、准确、重现性和稳定性好，可为全面评价和控制舒肝健胃丸质量。
【专利说明】
一种同时测定舒肝健胃丸中五种活性成分的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及中成药检测技术领域，具体涉及一种中成药舒肝健胃丸的检测方法。
【背景技术】
[0002] 舒肝健胃丸具有疏肝开郁、导滞和中、和胃止痛功效，特别是用于肝胃不和引起的 胃脘胀痛、胸胁满闷、呕吐吞酸和腹胀便秘。
[0003] 舒肝健胃丸配方及制备方法：厚朴（姜制）300g、香附（醋制）400g、白芍（麸炒） 500g、柴胡(醋制）300g、青皮(醋炒)200g、香橼300g、陈皮500g、檀香300g、豆蔻300g、枳壳 300g、鸡内金（炒）500g、槟榔500g、延胡索（醋炒）300g、五灵脂（醋制）300g、牵牛子（炒） 300g，按要求称取以上十五味药，粉碎成细粉，过筛，混匀，用水泛丸，干燥;每500g干丸用 90g滑石粉、9g桃胶包衣，打光，即得。该品种收载于卫生部药品标准中药成方制剂第五册 182页。原有的质量控制方法很难对产品进行有效的质量控制。因此，必需建立一种快速、准 确、全面分离、检测舒肝健胃丸中多种活性成分的方法，以便更好地对该产品进行质量监 控。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种同时测定舒肝健胃丸中芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚 朴酚、厚朴酚五种活性成分的方法，解决现有舒肝健胃丸质量控制难，不能够全面准确控制 药品质量的难题。
[0005] 为实现上述目的，本发明所述技术方案是这样实现的，该方法具体包括以下步骤：
[0006] (1)对照品溶液的制备
[0007] 精密称取芍药苷1.25mg、橙皮苷7.45mg、柚皮苷1.10mg、和厚朴酚2.21mg、厚朴酚 标准品2.32mg，分别溶解于5mL容量瓶中用甲醇定容至刻度线位置处，超声处理lOmin后定 容至刻度线位置处，甲醇补足；制得浓度分别241yg ? mL-\l420yg ? mL-\208yg ? mL-\438y g ? ml/1和458yg ? ml/1的单个对照品溶液;再分别精密吸取五种单个对照品溶液，放置于 5mL的容量瓶中，用甲醇定容，即制得已知各浓度的混合对照品溶液；
[0008] (2)供试品溶液的制备
[0009] 取舒肝健胃丸若干，剥去糖衣并用玻璃研钵研细，精密称取0.2000g，置于5mL容量 瓶中加入5mL甲醇，超声溶解30min，高速离心20min，取上层清液作为供试品溶液，供测试使 用；
[0010] ⑶色谱条件
[0011] 采用TC-C18色谱柱(4?6mmX250mm，5Ml);乙腈⑷-水(B)作为流动相，梯度洗脱:0-l5min，22%-22%乙腈(体积百分比） ；15-25min，22%-72%乙腈(体积百分比）；25-35min， 72%-72%乙腈（体积百分比）；35-401^11，72%-90%乙腈（体积百分比）；40-50111111，90%-90% 乙腈（体积百分比）；50-55min，90%_22% 乙腈；检测波长：0-10min，230nm; 10_20min， 280nm; 20-55min，294nm;流速 1. OmL ? min-1;检测器:VWD检测器;柱温：25 °C ;进样量：10yL;
[0012] (4)测定：分别精密吸取制备好的对照品溶液和供试品溶液各10yl，注入液相色 谱，测定，记录60min的色谱图，即得。
【附图说明】
[0013] 图1为本发明芍药苷的高效液相色谱图。
[0014] 图2为本发明橙皮苷的高效液相色谱图。
[0015] 图3为本发明柚皮苷的高效液相色谱图。
[0016] 图4本发明和厚朴酚的高效液相色谱图。
[0017] 图5为本发明厚朴酚的高效液相色谱图。
[0018] 图6为本发明混合对照品溶液的高效液相色谱图。
[0019] 图7为本发明样品的高效液相色谱图。
[0020] 其中:A、芍药苷;B、橙皮苷;C、柚皮苷;D、和厚朴酚;E、厚朴酚。
[0021 ]本发明的优点和积极效果：
[0022] (1)本发明所述方法简单、准确、重现性和稳定性好，可为全面评价和控制舒肝健 胃丸质量提供理论基础和科学依据。
[0023] (2)本发明方法采用高效液相色谱法，利用梯度洗脱方式，实现了同时测定舒肝健 胃丸中芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚5种有效成分的含量，色谱峰峰形好，分离 度较高，检测灵敏度高，可全面、更有效地控制舒肝健胃丸的质量。
【具体实施方式】
[0024]以下结合附图和【具体实施方式】对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人 员更了解本发明，但并不以此限制本发明。
[0025]仪器与试药
[0026]仪器:安捷伦1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技中国有限公司）;GWA-UN4超纯 水器(北京普析通用仪器有限责任公司）;FA1104N万分之一分析天平(上海精密科学仪器有 限公司天平仪器厂制造）；SK5200H超声波清洗器(200W59HZ上海科导仪器有限公司）。
[0027] 试药:芍药苷对照品（批号：110736-201438;含量为96.4% ;来源：中国食品药品检 定研究院）；橙皮苷对照品（批号：110721 -201316;含量为95.3 % ;来源：中国食品药品检定 研究院）；柚皮苷对照品（批号：1110722-201312;含量为94.7 % ;来源：中国食品药品检定研 究院）；和厚朴酚对照品（批号：110730-201313;含量为99.1 % ;来源：中国食品药品检定研 究院）；厚朴酚对照品（批号：110729-201513;含量为98.8 % ;来源：中国食品药品检定研究 院）；舒肝健胃丸（山西旺龙神农药业有限公司；批号= 20131002,按照卫生部药品标准中药 成方制剂中的处方工艺自制两批，批号为20151011、20151221);甲醇（色谱纯）；水(二次去 离子水）。
【具体实施方式】
[0028]
[0029] 实施例1
[0030] (1)对照品溶液的制备:精密称取芍药苷1.25mg、橙皮苷7.45mg、柚皮苷1.10mg、和 厚朴酚2.21mg、厚朴酚标准品2.32mg，分别溶解于5mL容量瓶中用甲醇定容至刻度线位置 处，超声处理lOmin后定容至刻度线位置处，甲醇补足;制得浓度分别241yg ? ? mL-\208yg ? mL-\438yg ? mL-1和458yg ? mL-1的单个对照品溶液;再分别精密吸取五种单个 对照品溶液，放置于5mL的容量瓶中，用甲醇定容，即制得已知各浓度的混合对照品溶液。 [0031 ] (2)供试品溶液的制备:取舒肝健胃丸若干，剥去糖衣并用玻璃研钵研细，精密称 取0.2000g，置于5mL容量瓶中加入5mL甲醇，超声溶解30min，高速离心20min，取上层清液作 为供试品溶液，供测试使用。
[0032] (3)色谱条件：采用TC-C18色谱柱（4.6111111\25〇111111，5圓） ；乙腈(4)-水(8)作为流动 相，梯度洗脱:0-15min，22%-22 %乙腈(体积百分比）；15-25min，22 %-72 %乙腈(体积百分 比）；25-351^11，72%-72%乙腈(体积百分比）；35-40111111，72%-90%乙腈(体积百分比） ；40-50min，90%-90 %乙腈（体积百分比）；50-55min，90%-22%乙腈(体积百分比）；检测波长： 0-10min，230nm; 10-20min，280nm; 20-55min，294nm;流速 1 ? OmL ? min-1;检测器:VWD检测器； 柱温：25°C;进样量：10yL。
[0033] (4)测定:分别精密吸取上述制备好的对照品溶液和供试品溶液各10yl，注入液相 色谱，测定，记录60min的色谱图，即得。
[0034] 在此色谱条件下芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的出峰时间及具体出 峰情况见图1至图7。
[0035] 方法学考查
[0036] (1)线性关系:精密吸取制备好的五种单个对照品溶液，进样量分别为0.1、0.5、1、 2、2.5、5、7.5、8、9、10此，在步骤(3)所述的色谱条件下进行测定，以色谱峰面积为纵坐标， 浓度为横坐标，作线性关系曲线，峰面积对浓度作线性方程。得线性方程结果见表1。
[0037]表1线性关系方程
[0039] (2)精密度实验:精密吸取制备好的混合对照品溶液，在步骤(3)所述的色谱条件 下连续进样6次，测得芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的峰面积，计算得相对标准 偏差分别为1.71%、0.61%、0.32%、0.62%和0.71%(11 = 6)，结果表明仪器精密度良好，见 表2。
[0040] 表2精密度测试实验数据
[0043] (3)重现性实验:取批号相同的舒肝健胃丸6份，按照步骤(2)所述供试品溶液的制 备方法制备供试品溶液，并在步骤(3)所述的色谱条件下进行测定，根据峰面积计算芍药 苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚含量的相对标准偏差分别为〇. 59 %、0.79%、1.17 %、 2.00 %和1.30 %，见表3，表明方法重复性良好。
[0044] 表3重复性实验数据
[0046] (4)稳定性试验:取同一供试品溶液，在步骤(3)所述的色谱条件下分别测定0、4、 8、12、16、2处的色谱图，测定其稳定性。根据芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的峰 面积，计算得相对标准偏差分别为1.54%，1.43 %，1.19%，1.18%和1.88%，见表3，由实验 数据说明供试品溶液在24h内基本稳定。
[0047] 表4稳定性实验数据
[0050] (5)回收率试验:精密称取舒肝健胃丸6份分别置于容量瓶中，并根据五种活性成 分的含量，在每份样品中均加入相当的芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚对照品， 按照步骤(2)所述供试品溶液的制备方法以及步骤(3)所述的色谱条件进行测定。各组分的 回收率见表5。实验结果表明该方法回收率较好，准确率较高。
[0051 ]表5各种成分的加标回收率试验数据
[0054]样品含量测定:按照步骤(2)所述供试品溶液的制备方法以及步骤(3)所述色谱条 件测定三批供试品溶液，结果见表6。
[0055]表6样品含量测定结果
[0057]舒肝健胃丸中活性成分较多，而对于舒肝健胃丸中多个活性成分同时进行含量测 定的方法尚未可见。根据操作性简便，重现性好的特点，为提高测定效率和节省溶剂，本实 验采用高效液相色谱法进行测定。具有操作简便、精密度好、检测灵敏度高的特点，可全面、 更有效地控制该药的质量。
【主权项】
1. 一种同时测定舒肝健胃丸中五种活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 对照品洛液的制备 精密称取芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚朴酚、厚朴酚标准品，分别溶解于容量瓶中，用 甲醇定容至刻度线位置处，制得浓度分别241 Hg .mL' 1420 Hg .mL' 208 Hg .mL' 438 yg · ml/1和458 yg · ml/1的单个对照品溶液;再分别精密吸取五种单个对照品溶液，放 置于5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，即制得已知各浓度的混合对照品溶液； (2) 供试品溶液的制备 取舒肝健胃丸若干，剥去糖衣并用玻璃研钵研细，精密称取0.2000 g，置于5 mL容量瓶 中加入5 mL甲醇，超声溶解30 min，高速离心20 min，取上层清液作为供试品溶液，供测试 使用； (3) 色谱条件 采用1^-(：18色谱柱；乙腈-水作为流动相，梯度洗脱:0-15 min，体积比为22%-22%的乙 腈；15-25 min，体积比为22%-72%的乙腈;25-35 min，体积比为72%-72%的乙腈;35-40 min， 体积比为72%-90%的乙腈;40-50 min，体积比为90%-90%的乙腈;50-55 min，体积比为90%-22%的乙腈；检测波长：O-IOmin，230nm; 10-20 min，280nm ;20-55 min，294 nm;流速1.0 mL · min-1;检测器:VWD检测器;柱温:25°C ;进样量：10 yL; (4) 测定:分别精密吸取制备好的对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱，测 定，记录60min的色谱图，即得。2. 根据权利要求1所述的一种同时测定舒肝健胃丸中五种活性成分的方法，其特征在 于，步骤(1)对照品溶液的制备具体操作步骤为:精密称取芍药苷1.25mg、橙皮苷7.45mg、柚 皮苷I. IOmg、和厚朴酚2.21mg、厚朴酚标准品2.32mg，分别溶解于5 mL容量瓶中用甲醇定容 至刻度线位置处，超声处理10 min后定容至刻度线位置处，甲醇补足;制得浓度分别241 μ g · mL-\ 1420 yg · mL-\ 208 yg · mL-\ 438 yg · mL-1 和458 yg · mL-1 的单个对照品溶 液。
【文档编号】G01N30/02GK105929083SQ201610556056
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年7月15日
【发明人】孙艳涛, 赵磊, 乔静, 姜大雨, 王丽, 付瑶
【申请人】吉林师范大学