检测酮康唑样品有关物质的方法、制备酮康唑制剂的方法
【专利摘要】本发明提出了一种检测酮康唑样品中有关物质的方法，制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂的方法以及含酮康唑的制剂。其中，检测酮康唑样品中有关物质的方法包括：利用高效液相色谱法对所述酮康唑样品中的有关物质进行检测，并采用盐酸洛哌丁胺作为参照物，所述流动相A为0.34w/v％的硫酸氢四丁基铵溶液，所述流动相B为乙腈。采用该检测方法，能够有效地检测出酮康唑样品中有关物质。
【专利说明】
检测酮康唑样品有关物质的方法、制备酮康唑制剂的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及医药领域。具体地，本发明涉及对酮康唑样品中有关物质进行检测的 方法、制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂的方法、以及利用该方法制备的复方酮 康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂。
【背景技术】
[0002] 复方酮康唑软膏，适用于体癣、手足癣和股癣的治疗。复方酮康唑发用洗剂，适应 症为多种真菌引起的感染，如头皮糠疹、脂溢性皮炎和花斑癣的治疗。这两种药物的主要成 分都是酮康唑和丙酸氯倍他索，只是丙酸氯倍他索的含量略有不同。
[0003] 酮康唑，作为一种咪唑类抗真菌成分，对全身性慢性各种真菌病或浅表性真菌感 染具有良好的治疗效果。酮康唑这种主要原料的质量，将明显影响复方酮康唑软膏或复方 酮康唑发用洗剂的制备效率以及良品率。
[0004] 然而，目前对于酮康唑样品中有关物质进行检测的方法仍有待改进。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。
[0006] 本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
[0007] 本发明的发明人在研究过程中发现，《中国药典》2015年二部"酮康唑"质量标准规 定的高效液相色谱法存在下列缺点至少之一:检测效果非常差、酮康唑峰与参照物盐酸洛 哌丁胺峰的分离度不符合药典规定、该方法对于多种色谱柱均无法实现检测标准，从而影 响了复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂的制备效率，生产成本较高。发明人经过深入 研究发现，高效液相色谱法在采用梯度洗脱模式下，调整流动相组成会显著影响酮康唑样 品中有关物质的检测效果。
[0008] 有鉴于此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效检测出酮康唑样品中有关物 质的方法。
[0009] 在本发明的第一方面，本发明提出一种对酮康唑样品中有关物质进行检测的方 法。根据本发明的实施例，该方法包括:利用高效液相色谱法对所述酮康唑样品中的有关物 质进行检测，其中，在所述高效液相色谱法中采用盐酸洛哌丁胺作为系统适用性试验的参 照物，并且采用下列条件进行梯度洗脱：
[0011] 其中，所述流动相A为0.34W/V%的硫酸氢四丁基铵溶液，所述流动相B为乙腈。
[0012] 发明人意外地发现，采用根据本发明实施例的检测方法，通过调整梯度洗脱过程 中流动相的组成，能够明显地改善色谱检测精准度以及酮康唑峰与参照物峰之间的分离效 果，有效地检测出酮康唑样品中有关物质，从而进一步提高将酮康唑原料用于制备复方酮 康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂的效率。
[0013] 本领域技术人员可以理解的是，有关物质主要是指在生产酮康唑样品的过程中带 入的起始原料、中间体、聚合体或副产物，以及贮藏过程中的降解产物等。而任何影响药物 纯度的物质统称为杂质，药品中的杂质按其理化性质一般分为有机杂质、无机杂质及残留 溶剂。有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的，由于这类杂 质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又称之为有关物质。在本发明的 实施例中，酮康唑样品中的相关物质组成比较复杂，且相关物质与酮康唑的在化学结构上 类似，所以酮康唑样品的高效液相色谱图中各个峰较难被有效地分离开。
[0014] 另外，根据本发明上述实施例的检测酮康唑样品中有关物质的方法，还可以具有 如下附加的技术特征：
[0015] 根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行所述梯度洗脱：
[0017] 由此，可以明显地改善酮康唑峰与参照物峰之间的分离效果，更有效地检测出酮 康唑样品中有关物质，从而进一步提高将酮康唑原料用于制备复方酮康唑软膏或复方酮康 唑发用洗剂的效率。
[0018] 根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行所述梯度洗脱：
[0020] 由此，可以明显地改善酮康唑峰与参照物峰之间的分离效果，更有效地检测出酮 康唑样品中有关物质，从而进一步提高将酮康唑原料用于制备复方酮康唑软膏或复方酮康 唑发用洗剂的效率。
[0021] 根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行所述梯度洗脱：
[0023]由此，可以明显地改善酮康唑峰与参照物峰之间的分离效果，更有效地检测出酮 康唑样品中有关物质，从而进一步提高将酮康唑原料用于制备复方酮康唑软膏或复方酮康 唑发用洗剂的效率。
[0024]根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中，采用下列条件进行所述梯度洗脱：
[0026]由此，可以明显地改善酮康唑峰与参照物峰之间的分离效果，更有效地检测出酮 康唑样品中有关物质，从而进一步提高将酮康唑原料用于制备复方酮康唑软膏或复方酮康 唑发用洗剂的效率。
[0027]根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法采用下列条件:色谱柱:采用C18色谱 柱，优选依利特Hypersil BDS C18 4.6mm* 1 50mm 5微米、Agiient Eclipse XDB-C18 5微米 4 · 6mm* 150mm和依利特Sinopak Cl8 5微米4 · 6mm* 150mm的至少之一;柱温:30摄氏度;流速： 1. OmL/min;检测波长:220nm;或进样量：10微升。由此，可以明显地改善酮康唑峰与参照物 峰之间的分离效果，更有效地检测出酮康唑样品中有关物质的含量，从而进一步提高将酮 康唑原料用于制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂的效率。
[0028]在本发明的第二方面，本发明提出了一种对酮康唑样品含量进行检测的方法，其 特征在于，包括：
[0029]采用型号为日立Chromaster的高效液相色谱仪对酮康挫样品进行检测，选择盐酸 洛哌丁胺作为系统适用性试验的参照物，其中，
[0030] 色谱条件:色谱柱型号为依利特Hypersil BDS C18 4.6mm*150mm 5微米，柱温为 30摄氏度，流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，进样量为10微升，流动相包含0.34W/V%硫 酸氢四丁基铵溶液的流动相A和乙腈的流动相B，并且采用下列条件进行梯度洗脱：
LUU&」 在所还粒测中，称取酮埭唑样品，加甲脬浴觯开柿粹制成母lmL中谷10mg的浴淞， 作为供试品溶液;称取酮康唑样品，用甲醇定量稀释制成每lmL中含0.05mg的溶液，作为对 照溶液;称取酮康唑对照品与盐酸洛哌丁胺各5mg，置于同一个100mL的量瓶中，用甲醇溶解 并稀释，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0033]发明人意外的发现，采用本发明实施例的检测方法，可以明显地改善酮康唑峰与 参照物峰之间的分离效果，更有效地检测出酮康唑样品中有关物质，从而进一步提高将酮 康唑原料用于制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂的效率。
[0034] 本领域技术人员能够理解的是，系统适应性试验，是根据药典标准要求先进行的 必要性试验，只有系统适用性试验符合标准的规定，才能进行下一步对样品检测，只为保证 各个杂质峰能够有效地被分离和检测出。在本发明的实施例中，需要对溶有已知浓度的酮 康唑对照品和盐酸洛哌丁胺的系统适用性溶液进行检测，获得的高效液相色谱图中酮康唑 峰的保留时间为6分钟、且酮康唑对照品峰和盐酸洛哌丁胺峰的分离度大于15,则满足《中 国药典》检测标准，然后再对含有一定浓度酮康唑样品的供试品溶液和对照溶液进行检测， 即可获得酮康唑样品中有关物质的浓度。
[0035] 在本发明的第三方面，本发明提出了一种制备制剂的方法，所述制剂含有酮康唑。 根据本发明的实施例，该方法包括：（a)按照前面所述的方法，对候选酮康唑原料进行检测； (b)基于步骤(a)中所得到的结果，从所述候选原料中选择合格原料；以及(c)利用所述合格 原料制备所述制剂。如前所述，发明人意外的发现，采用本发明实施例的检测方法，能够有 效提高制备复方酮康唑制剂的效率，提高复方酮康唑制剂的生产良品率，或者降低复方酮 康唑制剂的生产成本。本领域技术人员能够理解的是，前面针对检测酮康唑样品中有关物 质含量的方法所描述的特征和优点，仍适用于该制备复方酮康唑制剂的方法，在此不再赘 述。
[0036] 另外，根据本发明上述实施例制备含有酮康唑制剂的方法，还可以具有如下附加 的技术特征：
[0037] 根据本发明的实施例，所述制剂为选自复方酮康唑软膏和复方酮康唑发用洗剂的 至少之一。由此，能够有效提高制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂的效率，
[0038]需要说明的是，本领域技术人员能够根据需要，选择杂质含量较低的酮康唑原料 进行制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂。根据本方面的一个实施例，供试品溶液 (根据本发明的实施例，稀释至每lmL溶液含有10mg酮康唑样品的甲醇溶液作为供试品溶 液)的色谱图上出现了杂质峰，优选采用满足以下标准的酮康唑样品作为合格原料:面积比 换算成重量比之后，各杂质峰面积之和不大于对照溶液(根据本发明的实施例，在实施检测 的过程中，稀释至每lmL溶液含有0.05mg酮康唑样品的甲醇溶液作为对照溶液)的主峰面积 的0.5重量％。
[0039] 需要说明的是，本领域技术人员能够根据需要，更优选酮康唑含量更高的酮康唑 原料进行制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用洗剂。由此，能够更有效提高制备复方酮 康唑制剂的效率，进一步提高复方酮康唑制剂的生产良品率，或者进一步降低复方酮康唑 制剂的生产成本。
[0040] 在本发明的第四方面，本发明提出一种含有酮康唑成分的制剂，根据本发明的实 施例，所述制剂是通过前面所述的制备含有酮康唑制剂的方法制备的。如前所述，采用本发 明实施例的制备方法，能够有效提高制备复方酮康唑制剂的效率，提高复方酮康唑制剂的 生产良品率，或者降低复方酮康唑制剂的生产成本。从而该含有酮康唑的制剂具有生产效 率高、良品率高或者成本降低等优点。本领域技术人员能够理解的是，前面针对检测酮康唑 样品中有关物质含量的检测方法以及制备复方酮康唑制剂的方法所描述的特征和优点，仍 适用于该方法制备的含酮康唑成分的制剂，在此不再赘述。
[0041] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0042] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得 明显和容易理解，其中：
[0043] 图1是根据本发明的一个实施例的色谱图；
[0044] 图2是根据本发明的另一个实施例的色谱图；
[0045] 图3是根据本发明的另一个实施例的色谱图；
[0046] 图4是根据本发明的另一个实施例的色谱图；
[0047] 图5是根据本发明的另一个实施例的色谱图；
[0048] 图6是根据本发明的一个对比例的色谱图；
[0049] 图7是根据本发明的另一个对比例的色谱图。
【具体实施方式】
[0050]下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附 图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0051 ] 一般方法
[0052]除非明确说明，在下列实施例中采用下述仪器和检测条件进行色谱分析：
[0053] 高效液相色谱仪型号：日立Chromaster;
[0054] 色谱条件:色谱柱型号为依利特Hypersil BDS C18 4.6mm*150mm 5微米，柱温为 30摄氏度，流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，进样量为10微升，流动相含有0.34W/V%硫 酸氢四丁基铵溶液(流动相A)和乙腈(流动相B)的混合物(体积比在后面实施例和对比例中 具体限定）；
[0055] 试剂:酮康唑对照品（购自中国食品药品检定研究院），盐酸洛哌丁胺对照品（购自 上海化成工业发展有限公司），乙腈(购自德国默克），甲醇(购自天津科密欧化学试剂有限 公司），硫酸氢四丁基铵(购自常州市新华活性材料研究所）；
[0056] 配置供试品溶液:取酮康唑样品，加甲醇溶解并稀释制成每lmL中含10mg的溶液； [0057] 配置对照溶液:取酮康唑样品，用甲醇定量稀释制成每lmL中含0.05mg的溶液； [0058] 配置系统适用性溶液:取酮康唑对照品与盐酸洛哌丁胺各5mg，置于同一个100mL 的量瓶中，用甲醇溶解并稀释，摇匀。
[0059] 实施例1
[0060]在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，取系统适用性溶液10微 升，注入高效液相色谱仪，对系统适用性溶液进行检测。区别在于，在该实施例中采用的流 动相比例按照下列条件进行梯度洗脱：
[0062] 该实施例检测得到的色谱图如图1所示。由图1可看出，酮康唑峰的保留时间为 5.760分钟，盐酸洛哌丁胺峰的保留时间为8.930分钟，两者的分离度为19.852，基本满足酮 康唑峰的保留时间为6分钟、两峰分离度大于15的《中国药典》检测标准。
[0063] 实施例2
[0064] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，取系统适用性溶液10微 升，注入高效液相色谱仪，对系统适用性溶液进行检测。区别在于，在该实施例中采用的流 动相比例按照下列条件进行梯度洗脱：
[0067] 该实施例检测得到的色谱图如图2所示。由图2可看出，酮康唑峰的保留时间为 6.057分钟，盐酸洛哌丁胺峰的保留时间为9.123分钟，两者的分离度为19.513，完全满足酮 康唑峰的保留时间为6分钟、两峰分离度大于15的《中国药典》检测标准。
[0068] 实施例3
[0069] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，取系统适用性溶液10微 升，注入高效液相色谱仪，对系统适用性溶液进行检测。区别在于，在该实施例中采用的流 动相比例按照下列条件进行梯度洗脱：
[0071]该实施例检测得到的色谱图如图3所示。由图3可看出，酮康唑峰的保留时间为 6.337分钟，盐酸洛哌丁胺峰的保留时间为9.317分钟，两者的分离度为18.885，基本满足酮 康唑峰的保留时间为6分钟、两峰分离度大于15的《中国药典》检测标准。
[0072] 实施例4
[0073] 在该实施例中，按照与实施例2基本相同的方法，对酮康唑样品溶液进行检测。
[0074] 该实施例的对照溶液的色谱图如图4所示，供试品溶液的色谱图如图5所示。
[0075] 从对照溶液的图4可获得，保留时间为5.961分钟的酮康唑峰面积为1350608。药典 规定，各个杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积(换算的含量为0.5重量％)。
[0076] 从供试品溶液的图5可看出，酮康唑有关物质即各个杂质峰之间能有效地被分离 并检测出，测定结果中各个杂质峰面积之和为979986,小于对照溶液的酮康唑峰面积 1350608,符合药典标准的规定。
[0077] 实施例5
[0078] 在该实施例中，按照与实施例4基本相同的方法，对酮康唑样品溶液进行检测。区 别在于，采用下列色谱柱：
[0079] Agiient Eclipse XDB-C18 5微米4.6mm*150mm;
[0080] 依利特Sinopak C18 5微米4.6mm*150mm。
[0081] 该实施例通采用其他两种色谱柱进行检测，同样能够有效地检测出酮康唑样品中 的有关物质，改善检测效果以及杂质峰的分离效果。
[0082] 对比例1
[0083]在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，取系统适用性溶液10微 升，注入高效液相色谱仪，对系统适用性溶液进行检测。区别在于，在该实施例中采用的流 动相比例按照下列条件进行梯度洗脱，即与《中国药典》中所列方法一致：
[0085] 该实施例检测得到的色谱图如图6所示。由图6可看出，峰型杂乱，且无法判定哪个 峰属于酮康唑或盐酸洛哌丁胺，完全无法满足酮康唑峰的保留时间为6分钟、两峰分离度大 于15的《中国药典》检测标准。
[0086] 对比例2
[0087] 在该实施例中，按照与对比例1基本相同的方法，对系统适用性溶液进行检测。区 别在于，在该流动相条件中采用下列色谱柱：
[0088] Agiient Eclipse XDB-C18 5微米4.6mm*150mm;
[0089] 依利特Sinopak C18 5微米4.6mm*150mm;
[0090] 依利特Hypersil BDS Cl8 5微米4.6mm* 150mm。
[0091] 结果显示，色谱图中各个杂质峰的分离结果也均不符合《中国药典》的分离度要 求。
[0092] 对比例3
[0093] 在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，取系统适用性溶液10微 升，注入高效液相色谱仪，对系统适用性溶液进行检测。区别在于，在该实施例中采用的流 动相比例按照下列条件进行梯度洗脱：
[0095] 该实施例检测得到的色谱图如图7所示。由图7可看出，酮康唑峰的保留时间为 3.763分钟，盐酸洛哌丁胺峰的保留时间为7.393分钟，虽然两者的分离度为20.413,但不能 满足酮康唑峰的保留时间为6分钟、两峰分离度大于15的《中国药典》检测标准。
[0096] 总结
[0097] 综合实施例1~5和对比例1~3可得出，本发明所提出的检测酮康唑样品含量的方 法，可明显地改善酮康唑峰与参照物峰之间的分离效果，更有效地检测出酮康唑样品中有 关物质的含量，从而进一步提高将酮康唑原料用于制备复方酮康唑软膏或复方酮康唑发用 洗剂的效率。另外，根据实施例5可看出，本发明的方法能够适用于多种常见的色谱柱。
[0098] 通过对比例1和2可看出，对于流动相比例按照下列条件进行梯度洗脱，即与《中国 药典》中所列方法一致：
[0100] 发明人尝试了多种色谱柱，均不符合《中国药典》的检测标准，因此可看出，在采用 梯度洗脱模式下，流动相组成是显著影响酮康唑样品含量检测效率的重要因素。
[0101] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不 必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任 一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技 术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结 合和组合。
[0102] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述 实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种对酮康唑样品中有关物质进行检测的方法，其特征在于，包括： 利用高效液相色谱法对所述酮康唑样品中的有关物质进行检测，其中，在所述高效液 相色谱法中，采用盐酸洛哌丁胺作为系统适用性试验的参照物，并且采用下列条件进行梯 度洗脱：其中，所述流动相A为0.34w/v %的硫酸氢四丁基铵溶液，所述流动相B为乙腈。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述高效液相色谱法中，采用下列条件 进行所述梯度洗脱：3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述高效液相色谱法中，采用下列条件 进行所述梯度洗脱：4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述高效液相色谱法中，采用下列条件 进行所述梯度洗脱：5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述高效液相色谱法中，采用下列条件 进行所述梯度洗脱：6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用下列条件： 色谱柱:采用C18色谱柱，优选依利特Hypersil BDS C18 4.6mm*150_ 5微米、Agiient Eclipse XDB-C18 5微米4.6mm*150mm和依利特Sinopak C18 5微米4.6mm*150mm的至少之 ， 柱温:30摄氏度； 流速：I .OmL/min; 检测波长：220nm;或 进样量:10微升。7. -种对酮康唑样品中有关物质进行检测的方法，其特征在于，包括： 采用型号为日立Chromaster的高效液相色谱仪对酮康唑样品进行检测，选择盐酸洛哌 丁胺作为系统适用性试验的参照物，其中， 色谱条件：色谱柱型号为依利特Hypersil BDS C18 4.6mm*150mm 5微米，柱温为30摄 氏度，流速为1.0 mL/min，检测波长为220nm，进样量为10微升，流动相包含0.34w/v %硫酸氢 四丁基铵溶液的流动相A和乙腈的流动相B，并且采用下列条件进行梯度洗脱：在所述检测中，称取酮康唑样品，加甲醇溶解并稀释制成每ImL中含IOmg的溶液，作为 供试品溶液； 在所述检测中，称取酮康唑样品，用甲醇定量稀释制成每ImL中含0.05mg的溶液，作为 对照溶液； 在所述检测中，称取酮康唑对照品与盐酸洛哌丁胺各5mg，置于同一个IOOmL的量瓶中， 用甲醇溶解并稀释，摇匀，作为系统适用性溶液。8. -种制备制剂的方法，所述制剂含有酮康唑，其特征在于，所述方法包括： (a) 按照权利要求1~7中任一项所述的方法，对候选酮康唑原料进行检测； (b) 基于步骤(a)中所得到的结果，从所述候选原料中选择合格原料；以及 (c) 利用所述合格原料制备所述制剂。9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述制剂为选自复方酮康唑软膏和复方酮 康唑发用洗剂的至少之一。10. -种制剂，所述制剂含有酮康唑，其特征在于，所述制剂是通过权利要求8和9任一 项所述的方法制备的。
【文档编号】G01N30/02GK106018614SQ201610472375
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】刘长国, 罗光明, 张甫, 李丽琴, 李瑾芳, 闫宏波
【申请人】湖北人福成田药业有限公司, 人福医药集团股份公司