具有蛋白激酶抑制活性的物质、其制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，涉及一类新化合物，具体涉及一类苯甲酰胺衍生物（通式 I )、以及该化合物的制备方法及其在制备治疗蛋白激酶调节异常所引发的部分疾病药物 中的应用。
【背景技术】
[0002] 蛋白激酶是催化蛋白磷酸化的一类酶，特别是催化蛋白中特定的酪氨酸、丝氨酸 和苏氨酸残基上的磷酸化。蛋白激酶在调节许多细胞生理过程中都起到关键作用，包括代 谢、细胞增殖、细胞分化、细胞存活、免疫应答和血管生成。
[0003] 蛋白激酶通常分为两类，即蛋白酪氨酸激酶（PTKs)和丝氨酸-苏氨酸激酶 (STKs)。其中蛋白酪氨酸激酶又可分为两类，即非跨膜酪氨酸激酶和跨膜生酪氨酸激酶受 体。目前至少确定蛋白酪氨酸激酶的19种不同的亚族，如表皮生长因子受体（EGFR)、血 管内皮生长因子受体（VEGFR)、血小板衍生生长因子（PDGFR)和纤维母细胞生长因子受体 (FGFR) 〇
[0004]目前研究表明，许多疾病都与有蛋白激酶调节所引发的异常的细胞反应有关。 这些疾病包括炎症、自身免疫疾病、癌症、神经系统疾病和神经退化性疾病、心血管疾 病、代谢病、过敏、哮喘和与激素相关疾病（Tan, S-L，2006, J. Immunol, 176:2872-2879 ; A. et al. 2006, J. Immunol. 177 : 1886-1893 ；Salek-Ardakani, S. et al. 2005, J. Immunol. 175:7635-7641 ;Kim, J. et al. 2004, J. Clin. Invest.，114:823-827)。因此，人们 一直致力于寻找能够有效地治疗这些疾病的蛋白激酶抑制剂。
[0005] 国际专利申请W02010139180A1公开了一种蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化 酶抑制剂的萘酰胺衍生物的结构及合成方法，该合成方法中：1)第一步6-羟基萘酸与 4, 7-二氯喹啉的成醚反应催化剂使用的碳酸铯，价格昂贵，且毒性较大，对环境的污染大； 2)反应条件苛刻，产率较低。因此，此制备方法得到的化合物不适于工业化生产。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，提供一种抗癌活性明显的具有 蛋白激酶抑制活性的物质一一苯甲酰胺衍生物，以发掘治疗蛋白激酶调节异常所引发的部 分疾病的候选药物。
[0007] 本发明第一方面在于提供一种具有蛋白激酶抑制活性的物质，为苯甲酰胺衍生 物，所述苯甲酰胺衍生物为N-(2,4_二甲基苯基）-4-[(7_氯-4-喹啉）氨基]苯甲酰胺， 结构式如式I所示：
[0008]
σ
[0009] 该物质为结构式如式I所示化合物的几何异构体及其药学上可接受的盐。
[0010] 本发明第二方面在于提供一种药物组合物，其含有上述的化合物、其几何异构体、 其药学上可接受的盐、其水合物或溶剂化合物以及可药用载体或赋形剂的药物组合物。
[0011] 本发明第三方面在于提供一种制备上述化合物的方法，反应方程式如下：
[0015] 步骤⑴的具体操作为：将化合物II和化合物III溶于异丙醇中，搅拌回流5小时 后，析出淡黄色沉淀，待反应液冷却至室温后，减压蒸干，残留固体用二氯甲烷洗涤3次，收 集滤饼，干燥得淡黄色固体粉末IV。
[0016] 步骤（2)的具体操作为：将化合物IV溶于干燥的二氯甲烷中，搅拌，冰浴下向反 应体系中缓慢滴加氯化亚砜，滴加完毕后回流4小时，减压蒸馏除去氯化亚砜，得到化合物 V。
[0017] 步骤（3)的具体操作为：将化合物V溶于干燥的二氯甲烷中，加入化合物VI，搅拌， 冰浴下滴加含有三乙胺的干燥二氯甲烷溶液，45°C下反应6-8小时，TLC检测，反应完全后， 抽滤除去大部分盐，减压蒸馏，固体物质用乙酸乙酯/蒸馏水萃取洗涤3次，合并有机相，无 水硫酸钠干燥，减压蒸馏得粗品，硅胶柱层析分离（洗脱剂为二氯甲烷：甲醇=200 :1)，得 目标产物I。
[0018] 所述异丙醇、氯化亚砜、三乙胺、乙酸乙酯、无水硫酸钠、甲醇选用分析纯的，二氯 甲烧选用分析纯且干燥无水的，室温为25 °C，冰浴为0-4°C。
[0019] 本发明第四方面在于提供上述化合物或上述药物组合物在制备蛋白激酶抑制剂 药物和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂药物中的应用。
[0020] 抑制蛋白激酶和/或组蛋白去乙酰化酶的用途为治疗蛋白激酶调节异常所引发 的疾病，所述蛋白激酶调节异常所引发的疾病包括但不限于心血管疾病、代谢病、过敏、癌 症及与激素相关的疾病。
[0021] 本发明的化合物能够有效抑制蛋白激酶活性的作用，因而具有潜在的治疗蛋白激 酶调节异常所引发的部分疾病活性，可作为蛋白激酶调节异常所引发的部分疾病的治疗药 物。
[0022] 本发明的第一个方面涉及具有蛋白激酶抑制活性的化合物，以及该化合物的制备 方法；其次涉及其在制备治疗蛋白激酶调节异常所引发的部分疾病的药物中的应用。
[0023] 本发明的化合物抗癌活性明显，制备方法成本低、产率较高、反应过程简单易控 制，适用于工业化生产。本发明的化合物可用于作为治疗心血管疾病、代谢病、过敏、癌症及 与激素相关疾病的药物，特别是具有明显的抗肿瘤活性，包括人食管癌ECA-109细胞、人肺 癌细胞A549细胞、人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌细胞SMMC-7721细胞。
【具体实施方式】
[0024] 多年来，人们一直致力于寻找具有蛋白激酶抑制活性并能治疗与蛋白激酶 活性异常相关疾病的小分子化合物。文献报道过的化合物有环状化合物（美国专 利US7, 151，096)、双环状化合物（美国专利US7, 189, 721)、三环状化合物（美国专利 US7, 132, 533)、（2-羟基吲哚基-3-亚甲基）乙酸衍生物（美国专利US7, 179, 910)、吡唑 基胺基取代的喹唑啉化合物（美国专利US7, 098, 330)等，其中有几个蛋白激酶抑制剂已被 FDA批准用于癌症治疗，如Glivec、Sutent和Sorafenib。临床结果表明，与传统的化疗相 比，这些药物优势明显。由此激发人们基于这些药物的机理改进治疗方法，优化化合物分子 骨架，发现具有生物利用度高、抗癌活性明显和毒性低的新化合物。
[0025] 本发明研究合成出具有蛋白激酶抑制活性的物质一一一种苯甲酰胺衍生物，该苯 甲酰胺衍生物为N-(2, 4-二甲基苯基）-4-[(7-氯-4-喹啉）氨基]苯甲酰胺，其分子式为 C24HmCIN3O,其结构式如下式I :
[0026]
[0027] 上式结构的化合物可作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂，用于治疗 蛋白激酶调节异常所引发的疾病。
[0028] 本发明涉及的苯甲酰胺衍生物的制备方法如下：
[0029] 以下室温是指25°C，冰浴是指0_4°C。
[0030] 步骤（1)、将化合物II (4, 7-二氯喹啉）（5-20mmol)和化合物III (对氨基苯甲酸） (5-20mmol)溶于异丙醇中（20-50mL)，搅拌回流（75-95°C)，5-7小时后，析出淡黄色沉淀， 待反应液冷却至室温后，减压蒸干，残留固体用二氯甲烷洗涤3次，收集滤饼，干燥得淡黄 色固体粉末IV (4-(7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸）。
[0031] 反应方程式如下：
[003Γ?
[0033] 步骤（2)、将步骤（1)得到的化合物IV溶于干燥的二氯甲烷中，搅拌，冰浴下向反 应体系中缓慢滴加氯化亚砜（25-100mmol)，滴加完毕后回流3-5小时，减压蒸馏除去氯化 亚砜，得到化合物V (4-(7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯）。
[0034] 反应方程式如下：
[0035]
[0036] 步骤（3)、将步骤⑵得到的化合物V(10-40mmol)及化合物VI (2, 4-二甲基苯 胺）（5-20mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液（10-40mL)中，搅拌，冰浴下滴加含有三乙胺 (10-40mmol)的二氯甲烷溶液（10-40mL)，40-50°C下反应6-8小时，TLC检测，反应完全后， 抽滤除去大部分盐，减压蒸馏得到固体物质，再用乙酸乙酯/蒸馏水萃取洗涤3次，合并 有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得粗品，硅胶柱层析分离（洗脱剂为二氯甲烷：甲醇= 200 :1)，得目标产物I。
[0037] 反应方程式如下：
[0038]
[0039] 为保证反应的产率及产物的纯度，异丙醇、氯化亚砜、三乙胺、乙酸乙酯、无水硫酸 钠、甲醇最好都选用分析纯的，二氯甲烷最好选用分析纯且干燥无水的。
[0040] 以下结合具体实施例，更具体地说明本发明的内容，并对本发明作进一步阐述，但 这些实施例绝非对本发明有任何限制。本领域技术人员在本说明书的启示下对本发明实施 例中所作的任何变动都将属于本发明权利要求书的范围内。
[0041] 实施例1 :
[0042] 在IOOmL干燥的圆底烧瓶中加入4, 7-二氯喹啉（0. 985g, 5mmol)、对氨基苯甲酸 (0. 685g，5mmol)和异丙醇20mL，搅拌使其充分溶解。缓慢升温至85°C，搅拌回流5h后，反 应液析出淡黄色沉淀，TLC检测反应已平衡，结束反应。待反应液冷却至室温后，减压蒸干， 残留固体用IOmL二氯甲烷洗涤3次，收集滤饼，干燥得淡黄色固体粉末4- (7-氯喹啉-4-氨 基）苯甲酸1.40g，收率95%。
[0043] 在IOOmL干燥的圆底烧瓶中加入含有4-(7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸（1.491g， 5mmol)的二氯甲烷溶液10mL，搅拌，于0°C冰浴下向反应体系中缓慢滴加氯化亚砜 (2. 974g，25mmol)，滴加完毕后回流（80°C ) 4小时，减压蒸馏除去氯化亚砜，得到4- (7-氯喹 啉-4-氨基）苯甲酰氯1.43以，收率91%。
[0044] 在IOOmL干燥的圆底烧瓶中加入含有4-(7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯（I. 581g， 51111]1〇1)及2,4-二甲基苯胺（0.6058,51111]1〇1)的干燥二氯甲烧溶液101]1]^，搅拌，于0<€冰浴 下向反应体系中缓慢滴加含有三乙胺（1.010g，10mm〇l)的二氯甲