一种间充质干细胞冻存液及注射液的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种间充质干细胞冻存液，它包含如下体积百分比的成分：勃脉力A液25～75%、18AA5%复方氨基酸注射液10～35%、20%人血白蛋白1～50%、DMSO5～20%。本发明还提供了一种间充质干细胞注射液及其制备方法。本发明间充质干细胞冻存液可克服现有细胞冻存液的缺陷，既能长时间维持间充质干细胞的活率，又能直接临床输注，具有良好的应用前景和经济效益。
【专利说明】一种间充质干细胞冻存液及注射液
[0001]本申请是专利申请号:201210321533.0， 申请人::四川新生命干细胞科技股份有限公司，申请日:2012年9月3日的分案申请。
【技术领域】
[0002]本发明涉及一种间充质干细胞冻存液及注射液。
【背景技术】
[0003]干细胞(stem cells, SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。
[0004]间充质干细胞【mesenchymal stem cells, MSC】是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。
[0005]由MSCs制备的干细胞注射液在临床上可以用于预防和治疗异体造血干细胞移植后产生的移植物抗宿主病(GVHD)，以及治疗自生免疫性疾病，I型糖尿病、如红斑狼疮、风湿性关节炎和硬皮病等。然而，与普通生物制品和药品不同，间充质干细胞注射液的活性物质是细胞，细胞在离体环境中，活性会迅速下降，传统方法用含人血白蛋白的氯化钠注射对MSCs进行保存，在8~24小时以内，细胞活性即大幅下降，无法长期保证细胞活性，给MSCs注射液大量、全国大范围临床应用于提出了严峻的挑战。
[0006]大量研究发现，用含有胎牛血清或者细胞培养基的保存液可以解决细胞活性下降快的问题，能够长时间维持细胞活率。但是，细胞接触胎牛血清时会内吞胎牛血清，进而引起细胞某些蛋白表达特性的变化，细胞回输人体后可能引起过敏反应，不能直接用于临床输注；细胞培养基因其成分与人体环境相差较远，未被批准临床使用，也不能直接临床输注，通常被科研机构用来体外培养及冻存细胞。
[0007]申请号:201010246409.3， 发明名称:一种直接静脉应用的间充质干细胞冻存液的专利申请，公开了一种间充质干细胞冻存液的制备方法，包括如下步骤:1)将人AB血置于无菌离心管中，在1000rpm-1200rpm条件下离心15分钟；2)吸取上清液，转移入新的离心管中，在4000g条件下离心20分钟，上清即为冻存用人AB血浆；3)将二甲基亚砜、上述冻存用人AB血浆、勃脉力A注射液按体积比1: 3: 6混合均匀，即为间充质干细胞冻存液。由该专利申请文件的实施例表1可以看出，该发明的冻存液I和II冻存1、2、3个月后复苏，检测细胞活率，冻存液I的细胞活率依次为96%、92.6%和89%，其细胞活率降低率为3.5%/月，冻存液II细胞活率依次为97.4%,95%和为94.7%，其细胞活率降低率为1.35%/月，该申请公开的冻存液虽然可以直接静脉输注，但是细胞活率维持时间短。并且，该细胞冻存液中含有人AB血浆，血浆中含有大量未知成分，用于异体输注存在安全隐患，同时，血浆来源也很少，成本高，难以大规模应用。
[0008]综上，现有技术中的细胞的冻存液难以兼顾长时间维持细胞活率与临床直接输注。
【发明内容】
[0009]为了解决上述问题，本发明提供了一种新的间充质干细胞冻存液。
[0010]本发明间充质干细胞冻存液，它包含如下体积百分比的成分:
[0011]
【权利要求】
1.一种间充质干细胞冻存液，其特征在于:它包含如下体积百分比的成分:
2.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于:它包含如下体积百分比的成分:
3.根据权利要求2所述的冻存液，其特征在于:它包含如下体积百分比的成分:
4.根据权利要求3所述的冻存液，其特征在于:它由如下体积百分比的成分组成:
5.一种间充质干细胞注射液，其特征在于:它包含权利要求1~4任意一项所述的间充质干细胞冻存液和间充质干细胞，间充质干细胞的浓度为IX IO5~IX IO8个/ml。
6.一种制备权利要求5所述间充质干细胞注射液的方法，其特征在于:它包括如下步骤: (I)按照权利要求1~4任意一项所述比例取勃脉力A液、18AA5%复方氨基酸注射液、20%人血白蛋白和DMSO ； (2 )将步骤(1)勃脉力A液、18AA5%复方氨基酸注射液和20%人血白蛋白混匀，加入间充质干细胞至细胞浓度为I X IO5~I X IO8个/ml，得细胞悬液； (3)将步骤(1) DMSO加入步骤(2)所得的细胞悬液，即可。
【文档编号】A01N1/02GK103583511SQ201310568189
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2012年9月3日 优先权日:2012年9月3日
【发明者】任莹莹, 田甜, 冯学蓉 申请人:四川新生命干细胞科技股份有限公司