利用绿木霉物种与根际活性的哈茨木霉物种的组合来控制植物疾病与增强植物生长的制作方法
【专利摘要】利用绿木霉物种与根际活性的哈茨木霉物种的组合来控制植物疾病和增强植物生长。
【专利说明】利用绿木霉物种与根际活性的哈茨木霉物种的组合来控制 植物疾病与增强植物生长
[0001] 本申请是国际申请日为2009年7月15日的国际申请PCT/US2009/050706进入中 国、申请号为200980136388. 5的题为"利用绿木霉物种与根际活性的哈茨木霉物种的组合 来控制植物疾病与增强植物生长"的发明专利申请的分案申请。本申请要求2008年7月17 日提交的美国临时专利申请系列No. 61/081，的7的利益，该申请全文引入本文作为参考。
【技术领域】
[0002] 本发明涉及利用根际活性的（rhizosphere competent)哈茨木霉（ZricAoofe/ma 物种与绿木霉rire/75·)物种的组合来控制植物疾病与增强植物 生长。
【背景技术】
[0003] 疫霉属物种spp)为来自腐霉科(/ydiaceae)(已知与多种植物 疾病有关)的致病剂。栎树猝死，大豆根腐病，苹果冠和颈腐病，影响美洲栗、杜鹃、非洲堇或 草莓的根腐病正是由这组病原体引起的疾病的实例。一般，由疫霉属引起的植物疾病相当 难于控制，并常常导致植物死亡。对于全世界的种植者而言，所述病原体是分布广泛的并且 会产生经济问题。例如，蔓延疫霉h/ksiaas)为马铃薯的传染物，其导致 了 1845年至1849年间的爱尔兰大饥荒。目前，在北美洲，种植者仍然要面对这种致病剂的 破坏。诸如站木（rootstock)选择以及位点修饰（site modification)之类的控制疫霉属物 种的许多常规的管理技术大部分已经不可靠了。
[0004] 在美国的整个东北部，由至少4种疫霉属物种（Jeffers等人， 2:533-538 (1982))引起的冠和颈腐病是苹果的普遍的且严重的经济问题。在纽约州，这种 疾病看来是树木过早衰落和死亡的最普通的生物原因，并且在宾夕法尼亚州，许多种植者 已经放弃了园艺理想的MM 106砧木，这是因为冠腐病的发生率高以及其可觉察的威胁。由 大豆疫霉?so^/s^Kaufmann和Gerdemann(也被称为大雄疫霉 )专化型以)引起的大豆的茎和根腐病也是分布广泛且严重的问题。由 于对于控制由疫霉属造成的冠腐病而言，没有单一的方法被证明是可靠的，所以建议种植 者采用综合的或加性的疾病管理策略，该策略采用了位点选择、位点修饰、砧木选择以及化 学处理(在合适时）的组合。
[0005] 与腐霉科的其他属一样，腐霉属(/>Ai歷）通常表征为它们产生多核菌丝(无隔 的菌丝)。这些通常被称为水霉。在田间和温室中，腐霉属猝倒是非常普遍的问题，在所述 田间和温室中，所述生物杀死新出现的幼苗。这种疾病复征通常涉及其他病原体，例如疫 霉属和丝核菌属(欣办octoflia)。腐霉属萎蔫病是由较老植物的游动孢子感染所引起的， 从而导致了响应于建群/再感染压力或环境胁迫而成为坏死营养的活体营养感染，由此导 致由于根功能发挥受阻而引起的较轻的或严重的萎蔫。参见Jarvis, W.R., "Managing Diseases in Greenhouse Crops, " APS Press, St· Paul, Minn· (1992); Bagnall, R.， ^Control of Pythium Wilt and Root Rot of Hydroponically Grown Lettuce by Means of Chemical Treatment of the Nutrient Solution， " M. Sc Thesis, University of Pretoria, Pretoria, South Africa (2007); Plaats-Niterink AJ van der, ^Monograph of the Genus Pythium，" i/? 21:1 - 242 (1981); Levesque 等人·， "Molecular Phylogeny and Taxonomy of the Genus Pythium, Mycological Research 108:1363-1383 (2004); Jarvis，W.R·，"Managing Diseases in Greenhouse Crops，" APS Press, St. Paul, Minn. (1992) ; Owen-Going, T. N. , ^Etiology and Epidemiology of Pythium Root Rot in Bell Pepper {Capsicum annuum L.) in Commercial-Scale and Small-Scale Hydroponic Systems，" M. Sc. thesis, University of Guelph, Guelph, Ontario (2002); Owen-Going 等人，"Relationships of ZyiAii/切 Isolates and Sweet Pepper Plants in Single-Plant Hydroponic Units，，' Canadian Journal of Plant Pathology 25:155-167 (2003) ; Owen-Going, T. N. , ^Quantitative Investigations of Phenolic Compounds Associated With Root Rot of Hydroponic Pepper {Capsicum annuum L. Caused by Pythi um aphani derma turn, (Edson) Fitzp. Ph. D. Thesis, University of Guelph, Guelph， Ontario (2005)〇
[0006] 许多腐霉属物种与其近亲疫霉属物种一起均为农业中具有经济重要性的植物病 原体。在腐霉属物种的宿主范围方面，其倾向于是非常多面的，并且是非特异性的。腐霉属 物种感染大范围的宿主，而疫霉属物种通常更具有宿主特异性。鉴于该原因，腐霉属物种在 由它们在农作物中所引起的根腐病方面更具有破坏性，这是因为仅仅进行轮作通常不能根 除病原体(对田间进行休耕也不行，这是因为腐霉属物种也是优良的腐养者，并且将在腐败 的植物质上存活长的时间)。
[0007] 镰孢属为广泛地分布于土壤中并与植物相关联的丝状真菌大属。大部 分的物种是无害的腐生物，并且为土壤微生物群落相对丰富的成员。一些物种在谷类农作 物中产生真菌毒素，这些真菌毒素如果进入食物链则可影响人和动物的健康。由这些镰孢 霉物种产生的主要毒素为串珠镰孢菌素（fumonisins)和单端孢菌毒素。所述属包含许多 具有经济重要性的植物致病物种。参见Priest和Campbell, "Brewing Microbiology," 3rd edition·，ISBN 0-306-47288-0; Walsh 等人，"Spectrum of Mycoses，" //?: (Baron S 等人，eds·)，4th ed·，Univ of Texas Medical Branch.(通过 NCBI Bookshelf) ISBN 0-9631172-卜1 (1996); Howard，DH， "Pathogenic Fungi in Humans and Animals，" 2nd ed·，Marcel Dekker.(通过Google Books) ISBN 0-8247-0683-8 (2003) ; Van der Walta等人，"Fusarium Populations in the Household Food Gardens of a Peri-Urban Community, -- South African Journal of Science 103 (2007); World Health Organization (1999-09-01), ^Toxic Effects of Mycotoxins in Humans^ (2007); Drug Policy Alliance, ^Repeating Mistakes of the Past: Another Mycoherbicide Research Bill, w (2006); Yellow rain: Thai bees^ Faeces Found· Tfetore PMID 6709055 (1984); Imamura 等人，· 〃Fusarium and Candida Albicans Biofilms on Soft Contact Lenses: Model Development, Influence of Lens Type, and Susceptibility to Lens Care Antimicrob. Agents Chemother. 52(1):171 - 182 (2008)。
[0008]如果在大麦生长季节晚期下雨的话，禾谷镰孢咖）通常感染 大麦。其对麦芽制造和酿造工业以及饲料用大麦具有经济上的影响。大麦中的镰孢属污染 可以导致赤霉病（head blight)并且在极端的污染中，大麦可以显得粉红。已经对这种小 麦和玉米病原体的基因组进行了测序。禾谷镰孢还可以导致根腐病以及苗绵腐病。在 1991 年和1996年之间，在美国，估计大麦和小麦农作物的总损失为30亿美元。
[0009]丝核菌属物种为最多样的植物病原体之一，其导致许多我们最重要的草本和木本 观赏植物的根、茎和叶的疾病。丝核菌属物种通常在土壤线（soil line)处攻击植物，从而 导致根的丧失以及茎的收缩，这导致顶部环割和死亡。这种病原体也可以攻击叶，并且在 植物紧密地生长在一起并保持湿润时尤其严重。整个砧木（stock)床或浅箱（flats)可以 在非常短的时间段内由于丝核菌属而丧失。所述病原体是土壤传播的，其是指所述病原体 在土壤或盆栽培养基中生活。其引起许多观赏性的农作物(例如长春花属（行/7^3)、凤仙花 属（/聊如 2·⑶S)、砧木和金鱼草）在出苗前或出苗后的猝倒（Chase, A. R.，"Rhizoctonia Diseases on Ornamentals, -- Western Connection, Turf and Ornamentals (1998) )〇
[0010] 结肠基串珠根霉加 sicoh) (Berk. & Br_ ) Ferraris 是一种 攻击33个科中超过100种植物物种的土壤习居菌。豆科(/?加茄科扮e) 以及葫户科的成员尤其受到结肠基串珠根霉的侵袭（Shew等人，Eds.， "Compendium of Tobacco Diseases，St· Paul，MN: APS Press，ρρ· 28-29 (1991))〇 俗名"黑色根腐病"是基于在宿主的根细胞中形成的黑色着色的厚壁孢子，并使得根尖形 成"变黑的"外观（Alexopoulos 等人，"Introductory Mycology，" 4th Ed.，ρρ. 869 (1996))。黑色根腐病真菌为丝孢纲(办/?如念珠霉目丛霉科 CZfe搬iicace從）的成员（Shew 等人，Eds.，"Compendium of Tobacco Diseases，"· St. Paul, MN: APS Press，pp. 28-29 (1991))。通常的症状为根腐烂以及枝条顶梢枯死。 可以在世界上所有的地区(尤其是在具有凉爽气候的地区）找到结肠基串珠根霉。黑色根 腐病可以侵袭多种木本和草本植物，包括烟草、冬青、秋海棠、天竺葵、一品红、以及三色堇 (Agrios，G.N.，"Plant Pathology，'' 4th ed.，p. 358 (1997); Alexopoulos 等人， "Introductory Mycology，" 4th Ed·，pp· 869 (1996); Daughtrey 等人，"Compendium of Flowering Potted Plants，" pp· 90 (1995) ; Lambe 等人，"Diseases of Woody Ornamental Plants and Their Control in Nurseries，" pp. 130 (1986) ; Shew 等人， Eds.，"Compendium of Tobacco Diseases，" pp. 28-29 (1991))。
[0011] 整齐小核菌是一种杂食性、土壤传播的真菌病原体，引起 多种农业和园艺农作物发生疾病。虽然还没有出版公布全世界范围内的宿主属的汇编，但 是单在美国就报道有超过270个宿主属。易感的农业宿主包括：甘薯(//?撕⑵如h以s)、 西银芦 QCucurbita pepo L.、、玉屬零 iZea mays、、普、MA、轰 iTriticwn vulgare W^X及蒸 花生dacAis力沙叹册)水仙属)、鸾尾属（Zris )、百合属（Zi/ii//--)、百曰草 属以及茼蒿属中包括受真菌侵袭的园艺农作物。参见Aycock， R., uStem Rot and Other Diseases Caused by Sclerotium rolfsii,yy N. C. Agr. Expt· St· Tech. Bui.，No. 174 (1966); Garren，Κ· H·，"The Stem Rot of Peanuts and its Control, ^ Virginia Agr. Exp. St a. Bull. 144 (1959) ; Paolo, M. A.，"A Sclerotium Seed Rot and Seedling Stem Rot of Mango, ^ Philippine Journal of Science 52:237-261 (1933); Punja, Z. K., ^The Biology, Ecology, and Control of Sclerotium rolfsii, w Annual Review of Phytopathology 23:97-127 (1985); Takahashi, T. , u k Sclerotium Disease of Larkspur,^ Phytopathologyll \22>9-2A5 (1927); Townsend 等人，"The Development of Sclerotia of Certain Fungi, Bot. 21:153-166 (1954); Weber, G. F. , ^Blight of Carrots Caused by Sclerotium rolfsii, With Geographic Distribution and Host Range of the Fungus,，' Phytopathology 21:1129-1140 (1931); Zitter 等人，"Compendium of Cucurbit Diseases, w Amer. Phytopath. Soc., St. Paul, Minnesota (1966) 〇
[0012] 虽然，许多世纪以来一直认为整齐小核菌导致了严重的农作物损失，但是第一份 明确的真菌报告追溯到1892年Peter Henry Rolfs在佛罗里达州对与番茄枯萎病有关的 生物的发现。自从19世纪晚期Rolf的报告之后，超过2000个关于病原体的出版物支持了 其在全世界分布(特别分布于热带和亚热带地区）的证据。
[0013] 广泛的宿主范围、多育的生长以及产生菌核的能力促成了与所述病原体有关的 最大的经济损失。从全世界的观点以及从北卡罗来纳州局部观点看，与任何其他农业农 作物相比，落花生农作物都保持较高的损失。在1959年，美国农业部（United States Department of Agriculture)估计在落花生生长的南部地区与整齐小核菌有关的损失为 一千万至两千万美元，并且在北卡罗来纳州的沿海平原地区的田间，落花生的产量损耗为 1-60%。
[0014] 对于某些木霉属物种spp.)可能与对由疫霉属物种(例如，绿色 木霉（7： Wriofe))引起的几种疾病与由寄生疫霉引起的菠萝心腐病的生物控制有关存 在有相关的证据（Papazivas, 23:23-54 (1985))。当将混 合硬木树皮（composted hardwood bark) (CHB)并入到木本植物的根际中时该混合硬 木树皮对木本植物的疫霉属疾病提供控制（Hoitink等人，Ann. Rev. Phytopathol. 24:93-114(1986))(包括在田间条件下控制苹果的冠腐病（Ellis等人，朽 70:24-26 (1986)))的这一经过良好记录的能力，以及向容器盆栽混合物中添加 CHB导致 该生根培养基中哈茨木霉的群体水平100至100, 000倍增加的相关记录（Nelson等人， 设73:1457-1462 (1983))，都提供了更令人信服的相关的证据。
[0015] 植物病原体的生物控制(生物防治)在植物的疾病管理中日益成为必需的组分。过 度信赖于化学杀虫剂、不可持续的农业体系、低劣的位点选择以及资源的限制均为种植者 所面对的农业问题的实例。生物防治为农业中这些周期性/持续性的问题提供了备选的方 法。因此，很多重点被放在了农业中这种技术的应用上。
[0016] 已知许多真菌和其他微生物可控制多种植物病原体。这些生物防治剂是特别 诱人的，这是因为它们能够保护和定居对于传统农业处理而言特别难以接近的植物部分 (Harman 等人，7^Α/?οΖ 11:893-906 (1983))。木霉属物种（丝状真菌 属)已经显示出对土壤传播的植物病原体提供不同水平的生物控制。就生物防治而言，已知 木霉属的五种物种是最重要的。它们为钩状木霉（7： AamaiMZ?)、哈茨木霉（7： Aarzia/wa?)、 康宁氏木霉々o/Jigii)、多孢木霉（71. 以及绿色木霉（7 1. Kiriofe)。用于 生物防治的理想的且必需的特征起因于具体的菌株而非物种。例如，哈茨木霉菌株与处 理黄瓜有关。虽然在将木霉属作为生物防治剂的应用中已经有许多进步，但是直到1992 年才有报导这种真囷用于处理由土壤传播的疫霉属物种引起的疾病（Papavizas，ζ?/7/7. Rev. Phytopathol. 23:23-54 (1985))。三株变绿胶霉(031、 035和041)(现在称为绿木霉）菌株已经被用作控制由疫霉属物种引起的植物疾病(例如 根腐病、冠及颈腐病）的生物剂（Smith等人的美国专利No. 5, 165, 928) (Jeffers等人， 2:533-538 (1982))。但是，本发明限于处理由大豆疫霉引起的植物疾病。 此外，还有Lewis等人的在美国专利No. 5, 06S，105中所述菌株GL-21，其以SoilGard?出 售。
[0017] 生物防治剂的组合已被用于控制疾病。例如，Lewis等人的"A Formulation of Trichoderma and Gliocladium to Reduce Damping-off Caused by Rhizoctonia solani and Saprophytic Growth of the Pathogen in Soiless Plant Disease 82:501-06 (1998)使用了变绿胶霉TRI-4以及钩状木霉GL-3、GL-21或GL-32的制剂来用于生物防治。 已知为 NUTRI-LIFE TRICH0SHIELD? 的基于滑石的制剂已经由 Nutri-Tech Solutions Pty Ltd公司作为植物根生长促进剂出售。这种制剂包含有利的真菌物种的混合物，包括哈茨木 霉、木质素木霉和变绿胶霉(现在为绿木霉）以及起生物平衡作 用的枯草芽孢杆菌 sMiiyisXPapavizas等人的"Effect of and Trichoderma on Damping-off and Blight of Snapbean Caused by Sclerotium rolfsii in the Greenhouse"38: 277-86 (1989)描述了在温室中对抗整齐小 核菌ro/feii)的285种变绿胶霉、钩状木霉、哈茨木霉和绿色木霉的野生 型菌株及突变体的使用。10株变绿胶霉菌株和4株哈茨木霉菌株抑制了食荚菜豆猝倒达 30- 5〇%，以及枯萎病达36_74%。与菌株的混合物相比，单一的菌株同样有效或者更有效。例 如，得自各菌株的每克土壤3xl0 5分生孢子的G1-3与Th-84的混合物比单独使用的G1-3或 Th_84低效，并且三倍的混合物是最低效的。这些结果向本领域的技术人员提示，哈茨木霉 与变绿胶霉应该单独使用来处理植物，而并非组合使用。在任何情况下，上述生物防治剂的 组合均未涉及使用根际活性的哈茨木霉物种。
[0018] 本发明涉及克服本领域中的这些或其他缺点。
[0019] 发明概述 本发明的一个方面涉及包含根际活性的哈茨木霉物种与绿木霉物种的生物防治组合 物。
[0020] 本发明的另一个方面涉及控制由疫霉属、腐霉属、镰孢属、丝核菌属、小核菌属 膽）和/或串珠根霉属的物种介导的植物疾病的方法。该方 法包括提供根际活性的哈茨木霉物种，以及提供绿木霉物种。在有效地处理由疫霉属、腐霉 属、镰孢属、丝核菌属、小核菌属和/或串珠根霉属的物种介导的植物疾病的条件下，将哈 茨木霉物种和绿木霉物种施加给植物。
[0021] 本发明的另一个方面涉及增强植物生长的方法。该方法涉及提供根际活性的哈茨 木霉物种，以及提供绿木霉物种。在有效地增强植物生长的条件下将根际活性的哈茨木霉 物种和绿木霉物种施加给植物。
[0022]由于在单独的或特定的生物防治剂中观察到多个缺点，因此更加需要能够处理多 种疫霉属物种的不同试剂。这将不仅增加靶向的植物的生产力，而且还潜在地降低必须使 用多种生物防治剂的购买成本。
[0023] 根际活性的哈茨木霉和绿木霉的组合预防植物患病，并且与任何单一的生物相比 都能更好的发挥作用；当将两者组合起来时，对疾病的保护具有增强的效果。此外，所述组 合发挥与化学杀真菌剂一样好的作用。具体地，使用所述组合进行处理的植物未显示出病 原体感染的症状，或者显示出较不严重的病原体感染的症状，并且与使用任何单独的生物 试剂进行处理的植物相比具有更高的根质量，生长更高，而且更好卖。生病的植物一般表现 出多种症状，通常与根生长缺乏有关，并且最终发生根死亡。
[0024] 种植者和消费者的兴趣在于减少化学杀虫剂在农业农作物中的使用，并寻找害虫 管理的备选材料。对环境和非靶生物产生低影响的有效的生物控制材料可以用作传统化学 杀虫剂的备选材料或者与传统化学杀虫剂一起规划使用。本发明提供了在农学农作物中多 种疾病的广谱控制，并提供了化学杀虫剂的安全备选材料。
[0025] 附图简述 图1为玉米根际中T22与G41群体比较的图。
[0026] 发明详述 本发明的一个方面涉及包含根际活性的哈茨木霉物种与绿木霉物种的生物防治组合 物。
[0027] 在本发明的一个实施方案中，生物防治组合物包含绿木霉物种G41(以前称为变绿 胶霉）（ATCC登记No. 20906)以及根际活性的哈茨木霉物种T22 (ATCC登记No. 20847)。 在Harman等人的美国专利No. 5, 260, 213中全面地讨论过T22,该文献全文引入本文作为 参考。在Smith等人的美国专利No. 5, 165, 928中全面地描述过G41，该文献全文引入本文 作为参考。
[0028] 根际是土壤的狭窄区域，其直接受到根分泌物影响并与土壤微生物有关。其充满 以脱落的植物细胞(也称为根际沉积（rhizod印osition))、以及根所释放的蛋白质和糖为 食的细菌。摄食细菌的原生动物以及线虫也集中在根的附近。因此，大部分植物所需的营 养物的循环以及疾病抑制的发生与根紧密相邻。根面是根的外表面，以及附着根上的土壤 颗粒和碎屑的外表面。"根际活性"是微生物定居在根际上的能力的量度。
[0029] 对于生物控制剂特异的，根际活性的生物具有在根发育时沿着根增殖的生理学和 遗传能力。这种能力与仅能够在沿着根的特定位点进行定居的生物截然不同（Harman, 7； M/ir. 15:835-843 (1992)，该文献全文引入本文作为参考)。木霉属物种为少数 真菌生物防治剂(其中已经证明具有根际活性）之一。事实上，木霉属的大部分菌株都不具 有根际活性（Bailey 等人，ρρ· 185-204 (1998)，该文 献全文引入本文作为参考)。哈茨木霉菌株T22的一个重要特征为根际活性（Sivan等人， uImproved Rhizosphere Competence in a Protoplast Fusion Progeny of Trichoderma harzianum/' J. Gen. Microbiol. 137:23-29 (1991)，该文献全文引入本文作为参考）。
[0030] 本发明可以包含载体。合适的载体包括水、水溶液、浆液、颗粒或粉末。
[0031] 适合包含于所述组合物中的其他添加剂为肥料、杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂或它 们的混合物。
[0032] 本发明的另一个方面涉及控制由疫霉属、腐霉属、镰孢属、丝核菌属、小核菌属和/ 或串珠根霉属的物种介导的植物疾病的方法。该方法包括提供根际活性的哈茨木霉物种， 以及提供绿木霉物种。在有效地处理由疫霉属、腐霉属、镰孢属、丝核菌属、小核菌属和/或 串珠根霉属的物种介导的植物疾病的条件下，将哈茨木霉物种和绿木霉物种施加给植物。 [0033]由疫霉属的物种介导的、可根据本发明进行治疗的植物疾病可以由仙人掌 疫霉(·Ρ1ιγ?:ορ--?Ιι〇Γα cactorum)、极隹疫霉iPhytophthora cinnamomi')、说裙生疫霉 (Phytophthora citricola\^裙褐腐病疫霉 QPhytophthora citrophthord)、廢、他疫 霉（Phytophthora cryptogea)、德累孰電後霉 iPhytophthora drecshsleri\ 隻延疫霉 iPhytophthora infestans~)、热 / 遵佩H霉 iPhytophthora nicotimae、感觀A起。 [0034]由腐霉属的物种介导的植物疾病可以由瓜果腐霉(/少技/娜膽)、畸 雌腐霉C/yiAiwz? irri^u/are)、和/或终极腐霉的感染引起。
[0035] 由丝核菌属的物种介导的植物疾病可以由煎属丝核菌>S(97a/7i)的 感染引起。
[0036]由串珠根霉属的物种介导的植物疾病可以由结肠基串珠根霉的感染引起。
[0037] 由镰孢属的物种引起的植物疾病可以由尖孢镰孢的物种 及其相关的亚种引起。
[0038]由小核菌属的物种引起的植物疾病可以由整齐小核菌介导。
[0039] 根据本发明处理的植物包括农学作栽（row)的或其他田间的农作物：荞麦、豆类 (大豆、食荚菜豆、干豆类)、玉米(玉米粒、种子、甜玉米、青贮饲料、爆米花、高油玉米)、棉花、 低芥酸菜子、豌豆(干豌豆、多汁豌豆)、落花生、红花、向日葵、苜蓿干草、饲料作物(苜蓿、三 叶草、野豌豆、以及车轴草)、浆果类和小水果(黑莓、蓝莓、红醋栗（ currants)、接骨木、鹅 莓、黑果、罗甘莓、山莓、草莓和葡萄)、鳞茎农作物(大蒜、韭葱、洋葱、青葱以及观赏植物鳞 茎)、柑橘属水果(柑橘属杂种、柚子、金橘、lines、橙以及柚)、瓜类蔬菜(黄瓜、甜瓜、葫芦、 西葫芦以及南瓜)、花、花坛植物、观赏植物、结果蔬菜(茄子、甜椒和辣椒、粘果酸浆以及番 茄)、药草、香料、薄荷、水培农作物(黄瓜、番茄、莴苣、药草和香料)、多叶疏菜和芸苔（cole) 作物(芝麻菜、芹菜、山萝卜、菊苣、茴香、莴苣（头和叶）、欧芹、菊苣、大黄、菠菜、瑞士甜菜、 花茎甘蓝、芽甘蓝、卷心菜、花椰菜、羽衣甘蓝、散叶甘蓝、苤蓝以及芥菜)、芦笋、豆类蔬菜和 田间农作物(食荚菜豆和干豆类、小扁豆、多汁豌豆和干豌豆以及落花生)、梨果类水果(梨 和根用农作物(甜菜、糖萝卜、红甜菜（red beet)、胡萝卜、块根序、菊宦、辣根、欧 洲萝卜、萝卜无菁甘蓝、婆罗门参以及芜菁)、落叶树(枫树和栎树)、松树、小粒谷类作物(黑 麦、小麦、高粱、栗、核果（杏、樱桃、油桃、桃、李以及梅干红（prunes))、坚果树(杏树、山毛 榉坚果、巴西坚果、灰胡桃、腰果、栗树、榛、山胡桃树、澳洲坚果、美洲山核桃树、阿月浑子树 以及胡桃)、块茎作物(马铃薯、甘薯、山药、洋蓟、木薯以及姜)、以及草坪草（turfgrass)(赛 马场、运动场、公园、高尔夫球场开球区域的确立和新准备、草地、平坦球道和障碍区、种子 的生产以及草皮的生产)。
[0040]为了控制靶病原体，植物必须被种植在生物防治剂的有效区域内。种子可以被种 植在与生物防治剂混合的土壤中。将生物防治剂引入到植物中的几种其他方法是同样有效 的。例如，所述生物防治剂可以被发酵、配制或包装。然后，可以通过干或湿的配制并应用 于种子将所述生物防治剂施加给植物的种子。或者，可以在犁沟中进行干或湿的配制而生 产生物防治剂，该生物防治剂可以被施加到植物将要生长的土壤中。所述生物防治剂甚至 可以以喷雾的形式施加，在种植的过程中直接施加到犁沟中或者在种植之后施加到土壤的 表面上。所述试剂还可以作为浸液施加到盆栽植物上，并可以被并入到生长培养基中。所 需的是通过某种方式将生物防治剂放置在与生长中的植物相邻的土壤环境中。"靶病原体" 是指威胁农作物植物的已知或未知的一种或多种病原体。
[0041] 本发明的另一个方面涉及增强植物生长的方法。该方法涉及提供根际活性的哈茨 木霉物种，以及提供绿木霉物种。在有效地增强植物生长的条件下将根际活性的哈茨木霉 物种和绿木霉物种施加给植物。
[0042] 参考所述控制疾病的方法，使用与上文所述基本相同的材料和程序来实施本发明 的这一方面。其涉及影响任何形式的植物生长增强或促进情况。这种情况可以早在植物生 长由种子开始的时候发生，或者在植物生命中较晚的时候发生。例如，根据本发明的植物生 长涵盖了产率更高、所产生的种子的数量增多、发芽种子的百分率增高、植物的尺寸增大、 生物量更多、果实更多且更大、果实着色更早、以及果实和植物成熟的更早。结果，本发明为 种植者提供了显著的经济益处。例如，早期萌发及早期成熟使得农作物可以在短生长季节 的地区生长，否则在该地区短生长季节妨碍这种农作物的生长。种子萌发的百分率升高使 得农作物的植物群丛得到改善，并且使种子的利用更有效。根据一块给定的土地，较高的产 率、增加的尺寸以及增强的生物量生产都使得所产生的税收更多。因此，明显的是本发明在 农业效率方面构成显著的进步。 实施例
[0043] 给出以下实施例是为了达到说明的目的，并无意于限制本文所述的发明。给出这 些实施例证明了当将根际活性的哈茨木霉菌株(在这种情况下为菌株T22)与绿木霉菌株 (在这种情况下为菌株G41)-起使用时所观察到的协同作用。这种协同作用表现为对植物 疾病（由多种病原体引起）的控制明显增强。最后，给出实施例以表明根际活性在相互作用 中的重要性，及其是怎样影响木霉属菌株之间的协同作用的。
[0044] 按照以下方法保持微生物菌株： _ T22 :被保持在实验室冰箱的硅胶上，并根据需要在PDA板上长出。板用于接种生长 培养基，并使其温育2个星期时间段。在温育后使用筛收获孢子，并用于配制可湿性粉末。 [0045] · G41 :被保持在实验室冰箱的硅胶上，并根据需要在PDA板上长出。板用于接种 无菌稻，并使其温育2个星期时间段。在温育后使用筛收获孢子，并用于配制可湿性粉末。 [0046] ? G21 :由商购可得的产品中分离，并根据需要在PDA板上长出。板用于接种无菌 稻，并使其温育2个星期时间段。在温育后使用筛收获孢子，并用于配制可湿性粉末。
[0047] · Π 2 :被保持在实验室冰箱的硅胶上，并根据需要在PDA板上长出。板用于接种 无菌稻，并使其温育2个星期时间段。在温育后使用筛收获孢子，并用于配制可湿性粉末。 [0048] ?植物病原体：在30°C保持在PDA琼脂板上。
[0049]将木霉属的孢子与可湿性载体配制，其每克包含至少107个菌落形成单位。使用 在水中浓度为4或8 oz/100gal的配制材料处理植物。
[0050] 实施例1-对被肉桂疫霉感染的黄杨木的处理 本实施例给出了根据本发明的组合物用于控制黄杨木植物上的肉桂疫霉的效力及协 同作用的说明。
[0051] 将黄杨木、及fflicro/?妙/Ja asiaiicww、var. 'Winter Gem' 经受表 1 所述的 土壤浸液处理。除了未接种的对照之外，各种植物都使用肉桂疫霉接种物进行处理以诱导 疾病。黄杨木植物得自地方苗圃，并将其放置在包含松树皮：泥炭（3:1，体积：体积）盆栽 培养基的直径为6英寸的盆中。将所述培养基用14 lb的17-7-12奥绿（Osmocote)肥料/ 立方码的混合物进行改良。
[0052] 在接种之前，使肉桂疫霉接种物在24-26°C下在无菌稻谷粒上生长14天。为了 处理具有病原体接种物的植物，在根团的周围以相等的距离打4个孔，并将4份已建群的 稻谷粒插入到各孔中。使用2. 5品脱的手持喷雾器，将各种测试材料以特定的比率施加 到土壤的表面上。在植物的根用肉桂疫霉接种之后的24小时，将化学标准的精甲霜灵 (Mefen 〇xam)(Subdue?)施加到土壤表面上。在使用肉桂疫霉接种根之前的72小时，将T22 和G41施加到土壤表面上。
[0053] 在使用肉桂疫霉接种后（DAI)的1天、DAI的22天以及DAI的54天对各植物进行 适销性估价。采用以下等级，由三名研究者估价各植物，并确定各植物的平均值： 1 :死亡的植物 2 :低劣的、滞销的(严重缺绿症且顶部生长差） 3 :中等的，适于销售的(轻微的缺绿症和/或发育障碍的；植物的生长介于2和4之间） 4 :适于销售的(很少的个别的叶子发生缺绿症，绿色的树叶；植物的生长介于3和5之 间） 5 :优异的健康状况，适于销售的(无缺绿症；顶部生长最适） 在DAI的1、22和54天，由植物的冠至最高点测量植物的高度。在DAI的22和54天 测定千燥根的重量以及新鲜茎干的重量。
[0054] 在DAI的22天，取出各处理中的植物亚群，并进行检查。由盆中取出植物，并将 根上的过多的土壤小心地刷去。将地上部分(茎干）与地下部分切开，并在烘箱中干燥。 记录千燥根的重量以及新鲜茎千的重量。在DAI的54天，结束试验；按照上文所述对剩 余的植物进行处理，以测定干燥根的重量和茎干的重量。将数据进行方差分析，并通过 Student-Newman-Keuls检验在Ρ=0· 05的条件下分离处理平均值。
[0055] 表 1
【权利要求】
1. 一种控制由疫霉属、腐霉属、镰孢属、丝核菌属、串珠根霉属和/或小核菌属的物种 介导的植物疾病的方法，包括： 提供在易感由疫霉属、腐霉属、镰孢属、丝核菌属、串珠根霉属和/或小核菌属的物种 介导的植物疾病的环境中的生长中的植物， 提供根际活性的哈茨木霉物种； 提供绿木霉物种；以及 在有效地处理由疫霉属、腐霉属、镰孢属、丝核菌属、小核菌属和/或串珠根霉属的物 种介导的植物疾病的条件下，将所述哈茨木霉物种和所述绿木霉物种施加给所述生长中的 植物。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物疾病是由疫霉属的物种介导的，其中所 述疫霉属的物种选自仙人掌疫霉、肉桂疫霉、柑桔生疫霉、柑桔褐腐病疫霉、隐地疫霉、德累 斯雷疫霉、蔓延疫霉和烟草疫霉。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物疾病是由腐霉属的物种介导的，其中所 述腐霉属的物种选自瓜果腐霉、畸雌腐霉和终极腐霉。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物疾病是由尖孢镰孢介导的。
5. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物疾病是由茄属丝核菌介导的。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物疾病是由结肠基串珠根霉介导的。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物疾病是由整齐小核菌介导的。
8. 根据权利要求1所述的方法，其中所述生长中的植物选自花、花坛植物、观赏植物、 结果蔬菜、水培农作物、多叶蔬菜和芸苔作物、梨果类水果、落叶树、葡萄、柑橘属、松树、核 果、坚果树、谷类作物以及草。
9. 根据权利要求1所述的方法，其中所述施加过程是通过撒播施用、在犁沟中进行液 体或干燥施加、盆栽植物的浸透、直接并入到土壤或温室种植混合物中、或施加粒状制剂来 进行的。
10. 根据权利要求1所述的方法，其中所述根际活性的哈茨木霉物种和所述绿木霉物 种是以生物防治组合物的形式提供的，并且所述施加是通过施加所述生物防治组合物来进 行的。
11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述生物防治组合物还包含载体。
12. 根据权利要求11所述的方法，其中所述载体选自水、水溶液、浆液、颗粒和粉末。
13. 根据权利要求10所述的方法，其中所述生物防治组合物还包含添加剂，该添加剂 选自肥料、杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂以及它们的混合物。
14. 根据权利要求1所述的方法，其中所述哈茨木霉物种为T22。
15. 根据权利要求1所述的方法，其中所述绿木霉物种为G41。
16. 根据权利要求1所述的方法，其中所述绿木霉物种为G21。
17. 根据权利要求1所述的方法，其中所述施加所述根际活性的哈茨木霉物种和所述 绿木霉物种比当将所述根际活性的哈茨木霉物种或所述绿木霉物种单独施加给生长中的 植物时在控制植物疾病方面更有效。
18. 根据权利要求1所述的方法，其中所述施加过程是通过施加颗粒来进行的。
【文档编号】A01P3/00GK104247718SQ201410269797
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2009年7月15日 优先权日:2008年7月17日
【发明者】W.R.小马丁, C.K.海斯 申请人:生物工厂公司