一种独角石斛的组织培养方法与流程

文档序号:11867040阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种独角石斛的组织培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)取独角石斛的果荚进行消毒和预处理,先用体积分数为2%的洗洁精水溶液浸泡5min后,用流水冲洗15-30min,然后将独角石斛的果荚灼烧2次,每次灼烧5-10s后,得到外植体;

(2)将所述外植体切开,取出种子后接种到第一培养基中,在第一培养基中培养20-30天,得到无菌试管苗;

(3)将所述无菌试管苗置于第二培养基中,在第二培养基中培养50~70天,得到试管苗丛生芽;

(4)将所述试管苗丛生芽置于壮苗培养基中,在壮苗培养基中培养20-40天,得到试管苗;

(5)将所述试管苗置于生根培养基中,在生根培养基中培养30-50天,得到组培苗;

(6)炼苗:将所述组培苗和培养所述组培苗的培养瓶一起移出培养室,打开培养瓶瓶盖,向培养瓶中加入30mL的自来水后,自然光照3-5d;

(7)炼苗结束后,从培养瓶中取出所述组培苗,将所述组培苗的根部洗净后移栽至基质中。

2.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,步骤(1)中将独角石斛的果荚灼烧2次的具体方法为:在无菌超净台内将独角石斛的果荚用无菌镊夹住,在整个果荚表面沾染体积分数为75%的酒精,然后灼烧,将酒精烧尽后再重复灼烧1次。

3.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,步骤(2)中所述的第一培养基中包括:MS、3.0mg/L的6-苄基氨嘌呤、2.0mg/L的萘乙酸和3g/L的活性炭。

4.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,步骤(3)中所述的第二培养基中包括:MS、0.5-2.0mg/L的甲巯达嗪、0.5-1.5mg/L的萘乙酸和0.2-0.5mg/L的激动素。

5.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,步骤(4)中所述的壮苗培养基中包括:MS、1.0-4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和1.0-4.0mg/L的萘乙酸。

6.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,步骤(5)中所述的生根培养基中包括:1/2MS和20g/L的土豆泥,所述的土豆泥为将土豆搅碎后得到。

7.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,所述的第一培养基、所述的第二培养基、所述的壮苗培养基以及所述的生根培养基中还含有5g/L的琼脂和30g/L蔗糖,且所述第一培养基、所述第二培养基、所述壮苗培养基以及所述生根培养基的初始pH值均为5.8。

8.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,步骤(2)-(5)中的培养均为控制光照培养条件为:培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10h/d。

9.根据权利要求1所述的独角石斛的组织培养方法,其特征在于,步骤(7)中所述的基质中树皮、腐殖质土与水苔的体积比为1:1:1。

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