本发明涉及一种龙脷叶的组培培养基及其快速繁殖方法，属于植物快速繁殖技术领域。
背景技术：
龙脷叶，又名龙利叶、牛耳叶、龙舌叶、龙味叶是主产于广西、广东等地，属大戟科，其主要成分包括醇、糖苷和酚类物质等是传统的南药和壮药，可清肺止咳、化痰平喘、治肺热咳嗽、支气管哮喘、急性支气管炎、上呼吸道炎、失音、肺结核、咽喉痛。常绿小灌木，枝多，少扭曲，单叶互生、稍肉质、倒披针状、深绿色或淡蓝绿色，紫红色花，簇生或聚伞花序，也是优良室内观叶药用植物。
龙俐叶以叶入药，质量参差不齐，还没有规模化种植。龙俐叶由于生长缓慢，主要依赖分株繁殖，效率低下，很难满足市场需求。规模化规范种植是发展的趋势，但是受到种苗的数量的严重，目前很难形成规模，生产上急需解决的大量种苗问题。但是还没有龙脷叶相关组织培养的报道，也没有进行龙脷叶工厂化生产。组织培养技术能够在短期内大量提供龙脷叶的种苗，保障期周年供应市场。
技术实现要素：
为了克服现有技术的不足，本发明的一个目的在于提供一种龙脷叶的组培快速繁殖方法，它能够提高繁殖系数，缩短繁殖周期，并解决季节性限制问题，有效解决龙脷叶严重供应不足的问题，也为种植者提供良好的经济效益。同时建立了龙脷叶的组织培养体系，为今后开展细胞生物学研究，以及开展分子育种提供了技术支撑。
本发明的另一个目的是提供一种龙脷叶的组培培养基。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种龙脷叶的组培培养基，其特征在于，包括不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基；
不定芽诱导培养基：在改良ms培养基的基础上添加6-ba、ad以及iaa；其中，6-ba的浓度为0.05-2mg/l，ad的浓度为0.1-0.5mg/l，iaa的浓度为0.05-0.2mg/l；
继代增殖培养基：在改良ms培养基的基础上添加6-ba、ad以及iaa，其中，6-ba的浓度为0.5-2mg/l，ad的浓度为0.1-2mg/l，iaa的浓度为0.05-0.5mg/l；
无菌生根培养基：在改良ms培养基的基础上添加iba和iaa，其中，iba的浓度为0.1-0.5mg/l，iaa的浓度为0.5-5mg/l；
改良ms培养基：用ca(no3)2·4h2o代替ms培养基中的cacl2·2h2o和nh4no3，再添加核黄素，其余组分均无变化；其中，ca(no3)2·4h2o的浓度为168mg/l，核黄素的浓度为20mg/l。
进一步地，不定芽诱导培养基中，6-ba的浓度为0.5mg/l，ad的浓度为0.2mg/l，iaa的浓度为0.2mg/l。
进一步地，继代增殖培养基中，6-ba的浓度为1.5mg/l，ad的浓度为2mg/l,iaa的浓度为0.05mg/l。
进一步地，无菌生根培养基中，iba的浓度为0.2mg/l，iaa的浓度为0.5mg/l。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
一种龙脷叶的组培快速繁殖方法，其特征在于，包括：
外植体选择步骤：选取生长健康的龙脷叶幼嫩的枝条作为外植体；
外植体消毒步骤：将外植体进行消毒处理，得到消毒外植体；
不定芽诱导步骤：将消毒外植体切割成0.3-0.5cm长的单芽茎段，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养15-30天，得到龙脷叶不定芽；
继代增殖步骤：将龙脷叶不定芽接种于继代增殖培养基中，进行继代培养20-25天，得到龙脷叶无菌苗；
无菌生根步骤：将龙脷叶无菌苗进行切繁，并保持每株均有一个不定芽，接种于无菌生根培养基中，进行生根培养15-20天，得到龙脷叶幼苗；
炼苗与移栽步骤：将龙脷叶幼苗进行炼苗与移栽；
其中，不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基分别为本发明目的之一所述的不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基。
进一步地，外植体消毒步骤的具体过程为：用中性洗涤剂洗涤洗枝条，以去除枝条表面的污垢，然后去除多余的叶片，用干净纸巾吸干表面水分，立即转入浓度为0.1-0.3％的升汞溶液中消毒8-12min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次3-5min，得到消毒外植体。
进一步地，不定芽诱导步骤中，诱导培养条件如下：温度为26±2℃，湿度为58％，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。
进一步地，继代增殖步骤中，继代增殖培养条件如下：温度为26±3℃，湿度为50-65％，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。
进一步地，无菌生根步骤中，生根培养条件如下：培养温度为26±3℃，湿度为50-65％，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。
进一步地，炼苗与移栽步骤的具体过程如下：待龙脷叶幼苗生长至根长0.3cm、苗高5cm后，室内炼苗培养5天，然后洗净根部培养基移入到遮光率75-80％的遮阳网的塑料大棚内，保持湿润。
本发明的有益效果在于：
本发明根据龙脷叶的生长特性，在ms培养基的基础上配置出适合龙脷叶组织培养的不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基。使用本发明的不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基能有效提高繁殖系数，降低生产成本；生产周期短，种植效益大大提高；能够有效解决龙脷叶严重供应不足的问题，也为种植者提供良好的经济效益。同时建立了龙脷叶的组织培养体系，为今后开展细胞生物学研究，以及开展分子育种提供了技术支撑。
附图说明
图1龙脷叶不定芽诱导的照片。
图2龙脷叶茎尖繁殖组培苗移栽的照片。
图3龙脷叶茎段繁殖组培苗移栽的照片。
具体实施例方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
一种龙脷叶的组培培养基，包括不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基；
不定芽诱导培养基：在改良ms培养基的基础上添加6-ba、ad以及iaa；其中，6-ba(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为0.05-2mg/l，ad(腺嘌呤)的浓度为0.1-0.5mg/l，iaa(生长素)的浓度为0.05-0.2mg/l；
继代增殖培养基：在改良ms培养基的基础上添加6-ba、ad以及iaa，其中，6-ba的浓度为0.5-2mg/l，ad的浓度为0.1-2mg/l，iaa的浓度为0.05-0.5mg/l；
无菌生根培养基：在改良ms培养基的基础上添加iba和iaa，其中，iba的浓度为0.1-0.5mg/l，iaa的浓度为0.5-5mg/l；
改良ms培养基：用ca(no3)2·4h2o代替ms培养基中的cacl2·2h2o和nh4no3，再添加核黄素，其余组分均无变化；其中，ca(no3)2·4h2o的浓度为168mg/l，核黄素的浓度为20mg/l。
改良ms培养基的组成成分如表1所示：
表1
作为进一步地实施方式，不定芽诱导培养基中，6-ba的浓度为0.5mg/l，ad的浓度为0.2mg/l，iaa的浓度为0.2mg/l。
作为进一步地实施方式，继代增殖培养基中，6-ba的浓度为1.5mg/l，ad的浓度为2mg/l,iaa的浓度为0.05mg/l。
作为进一步地实施方式，无菌生根培养基中，iba的浓度为0.2mg/l，iaa的浓度为0.5mg/l。
一种龙脷叶的组培快速繁殖方法，包括：
外植体选择步骤：选取生长健康的龙脷叶幼嫩的枝条作为外植体；
外植体消毒步骤：将外植体进行消毒处理，得到消毒外植体；
不定芽诱导步骤：将消毒外植体切割成0.3-0.5cm长的单芽茎段，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养15-30天，得到龙脷叶不定芽；
继代增殖步骤：将龙脷叶不定芽接种于继代增殖培养基中，进行继代培养20-25天，得到龙脷叶无菌苗；
无菌生根步骤：将龙脷叶无菌苗进行切繁，并保持每株均有一个不定芽，接种于无菌生根培养基中，进行生根培养15-20天，得到龙脷叶幼苗；
炼苗与移栽步骤：将龙脷叶幼苗进行炼苗与移栽；
其中，不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基分别为本发明目的之一所述的不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基。
作为进一步地实施方式，外植体消毒步骤的具体过程为：用中性洗涤剂洗涤洗枝条，以去除枝条表面的污垢，然后去除多余的叶片，用干净纸巾吸干表面水分，立即转入浓度为0.1-0.3％的升汞溶液中消毒8-12min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次3-5min，得到消毒外植体。
作为进一步地实施方式，不定芽诱导步骤中，诱导培养条件如下：温度为26±2℃，湿度为58％，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。
作为进一步地实施方式，继代增殖步骤中，继代增殖培养条件如下：温度为26±3℃，湿度为50-65％，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。
作为进一步地实施方式，无菌生根步骤中，生根培养条件如下：培养温度为26±3℃，湿度为50-65％，光照时间为14小时/天，光照强度为800-12001x。
作为进一步地实施方式，炼苗与移栽步骤的具体过程如下：待龙脷叶幼苗生长至根长0.3cm、苗高5cm后，室内炼苗培养5天，然后洗净根部培养基移入到遮光率75-80％的遮阳网的塑料大棚内，保持湿润。
以下时本发明具体的实施例，在下述实施例中所采用的原材料、设备等除特殊限定外均可以通过购买方式获得。
实施例1：
一种龙脷叶的组培培养基，包括不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基；
不定芽诱导培养基：在改良ms培养基的基础上添加6-ba、ad以及iaa；其中,6-ba的浓度为0.5mg/l，ad的浓度为0.2mg/l，iaa的浓度为0.2mg/l；
继代增殖培养基：在改良ms培养基的基础上添加6-ba、ad以及iaa，其中，6-ba的浓度为0.5mg/l，ad的浓度为0.2mg/l，iaa的浓度为0.2mg/l；
无菌生根培养基：在改良ms培养基的基础上添加iba和iaa，其中，iba的浓度为0.2mg/l，iaa的浓度为0.5mg/l。
改良ms培养基：用ca(no3)2·4h2o代替ms培养基中的cacl2·2h2o和nh4no3，再添加核黄素，其余组分均无变化；其中，ca(no3)2·4h2o的浓度为168mg/l，核黄素的浓度为20mg/l。
一种龙脷叶的组培快速繁殖方法，包括：
外植体选择步骤：选取生长健康的龙脷叶幼嫩的枝条作为外植体；
外植体消毒步骤：用中性洗涤剂洗涤洗枝条，以去除枝条表面的污垢，然后去除多余的叶片，用干净纸巾吸干表面水分，立即转入浓度为0.2％的升汞溶液中消毒10min，最后用无菌水洗涤4次，每次4min，得到消毒外植体；
不定芽诱导步骤：将消毒外植体切割成0.4cm长的单芽茎段，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养20天，得到龙脷叶不定芽；诱导培养条件如下：温度为26℃，湿度为58％，光照时间为14小时/天，光照强度为10001x；
继代增殖步骤：将龙脷叶不定芽接种于继代增殖培养基中，进行继代培养22天，得到龙脷叶无菌苗；继代增殖培养条件如下：温度为26℃，湿度为60％，光照时间为14小时/天，光照强度为1000x；
无菌生根步骤：将龙脷叶无菌苗进行切繁，并保持每株均有一个不定芽，接种于无菌生根培养基中，进行生根培养18天，得到龙脷叶幼苗；生根培养条件如下：培养温度为26℃，湿度为60％，光照时间为14小时/天，光照强度为10001x；
炼苗与移栽步骤：待龙脷叶幼苗生长至根长0.3cm、苗高5cm后，室内炼苗培养5天，然后洗净根部培养基移入到遮光率75％的遮阳网的塑料大棚内，保持湿润；成活率可达99％以上。
其中，不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基分别为上述不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基。
参照图1-3，本发明根据龙脷叶的生长特性，在ms培养基的基础上配置出适合龙脷叶组织培养的不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基。使用本发明的不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基能有效提高繁殖系数，降低生产成本；生产周期短，种植效益大大提高；能够有效解决龙脷叶严重供应不足的问题，也为种植者提供良好的经济效益。
实施例2
本实施例的特点是：不定芽诱导培养基中，6-ba的浓度为0.05mg/l，ad的浓度为0.1mg/l，iaa的浓度为0.05mg/l；
其它与实施例1相同。
实施例3
本实施例的特点是：不定芽诱导培养基中，6-ba的浓度为2mg/l，ad的浓度为0.5mg/l，iaa的浓度为0.2mg/l；
其它与实施例1相同。
实施例4
本实施例的特点是：不定芽诱导培养基中，6-ba的浓度为1mg/l，ad的浓度为0.3mg/l，iaa的浓度为0.1mg/l；
其它与实施例1相同。
表2不同激素和浓度对龙脷叶不定芽增殖的效果
实施例5
本实施例的特点是：继代增殖培养基中，6-ba的浓度为0.5mg/l，ad的浓度为0.1mg/l，iaa的浓度为0.05mg/l；
其它与实施例1相同。
实施例6
本实施例的特点是：继代增殖培养基中，6-ba的浓度为2mg/l，ad的浓度为2mg/l，iaa的浓度为0.5mg/l；
其它与实施例1相同。
实施例7
本实施例的特点是：无菌生根培养基中，iba的浓度为0.1mg/l，iaa的浓度为0.5mg/l；
其它与实施例1相同。
实施例8
本实施例的特点是：无菌生根培养基中，iba的浓度为0.5mg/l，iaa的浓度为5mg/l；
其它与实施例1相同。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。