专利名称：抗人类b淋巴细胞限制分化抗原的嵌合及放射标记抗体的制作方法
此案是申请日为1993年11月12日、中国申请号为93121424.6、发明名称为“抗人类B淋巴细胞限制分化抗原的嵌合及放射标记抗体”的发明申请的分案申请。
所列的整个本文件准备讨论的参考文献，仅为本文描述本文件申请日以前的情报所用，本文不构成承认(或者表示，或者暗示)这些参考文献为“先有技术”，或这些发明人无权由于先发明的优势或根据较早递交申请的优先权把这些描述的日期说得早于实际日期。
本发明针对使用抗B细胞表面抗原Bp35(CD20)的嵌合及放射标记抗体治疗B细胞淋巴瘤。
脊椎动物(例如灵长目，包括人、猿、猴等)的免疫系统由许多器官和细胞类型组成。这些器官及细胞类型进化出以下功能准确和特异性地识别侵入脊椎动物宿主的外来微生物(抗原)；特异性地与这些外来微生物结合；并且清除/破坏这些外来微生物。在其它一些类型中，淋巴细胞对于免疫系统来说是关键性的。淋巴细胞在胸腺，脾脏及骨髓(成年的)中产生，并相当于人(成年人)循环系统中存在的总白血细胞的30％。有二种主要的淋巴细胞的亚群体T细胞和B细胞。T细胞在细胞介导免疫中起作用，而B细胞在抗体产生(体液免疫)中起作用。然而T细胞和B细胞被认为在典型免疫反应中是相互依赖的，当T细胞受体结合于抗原片段(该片段结合于抗原呈递细胞表面上的主要组织相容性复合物(MHC)糖蛋白上)上时T细胞被激活；此种激活作用引起生物学介体(白细胞介素)释放，该介体实质上能刺激B细胞分化并产生抗该抗原的抗体(免疫球蛋白)。
在宿主中每种B细胞在其表面表达不同的抗体，因此，一种B细胞将表达对一种抗原特异性的抗体，而另一种B细胞将表达对不同的抗原特异性的抗体。由此，B细胞是十分多样性的，此种多样性对免疫系统来说是至关重要的。在人体中，每种B细胞可产生巨大数量的抗体分子(即约107至108)。当外来抗原被中和时，一般停止这种抗体产生(或者大大降低)。然而偶然地特定B细胞的繁殖也会继续不断进行；这种繁殖可产生称为“B细胞瘤”的癌。
T细胞和B细胞二者均含表面蛋白，这些表面蛋白可被用作分化及鉴定的“标记”。一种这样的人B细胞标记是人B淋巴细胞限制分化抗原Bp35，称为“CD20”，“CD20”在B细胞发育前期的早期表达，并保持直至浆细胞分化。特别是该CD20分子可以调节激活过程中的步骤(该步骤为细胞周期启动及分化所要求的)，并且通常在肿瘤B细胞中高水平表达。由定义可知CD20即存在于“正常”B细胞上，也存在于“恶性”B细胞上(即这些B细胞不停地繁殖可导致B细胞淋巴瘤)。因此，CD20表面抗原有可能作为对B细胞淋巴瘤“定靶”的候选物。
实质上，这样的定靶过程可归纳如下将对CD20 B细胞表面抗原特异性的抗体(例如)注射入患者体内，这些抗-CD20抗体便特异性结合到(明显地)正常及恶性B细胞二者的CD20细胞表面抗原上；结合于CD20表面抗原的抗-CD20抗体可引起肿瘤B细胞破坏并消耗掉。此外能破坏肿瘤的化学试剂或放射性标记也可与该抗-CD20抗体相连，以便该试剂能特异地输送到(例如)中瘤B细胞处。不管采用什么方法，基本目的是破坏肿瘤，具体方法可由所使用的具体抗-CD20抗体来决定，因此定靶CD20抗原的可使用的方法是十分不同的。
例如已有多种定靶CD20表面抗原的尝试被报道过。鼠(小鼠)单克隆抗体1F5(一种抗-CD20抗体)已报道过以连续静脉输注到B细胞淋巴瘤患者的方式给药。据报道要耗尽循环的肿瘤细胞，要求极高的1F5水平(＞2g)，而其结果据说是“暂时的”(Press等人“Monoclonal Antibody 1F5(Anti-CD20)Serotherapy of Human B-Cell Lymphomas”Blood 69/2584-591(1987))。该方法的潜在问题是非人单克隆抗体(例如鼠单克隆抗体)一般缺乏人效应物功能，即它们不能介导补体依赖性溶解或通过抗体依赖性细胞毒性或Fc-受体介导的吞噬作用来溶解人靶细胞。而且非人单克隆抗体可由人宿主识别为外来蛋白，因此，反复注射此类外来抗体可产生导致有害过敏反应的免疫反应诱导作用。有关基于鼠的单克隆抗体，通常称为人抗-鼠抗体反应，或“HAMA”反应。此外，这些外来抗体可能受到宿主免疫系统的攻击，其结果使得它们在到达靶位之前被中和掉。
淋巴细胞和淋巴瘤对放射疗法的固有敏感性有如下几个原因放射性标记抗体的离子化射线的局部发射，可以杀死带或不带与结合抗原的抗体靠得很近的靶抗原(例如CD20)的细胞；穿透的射线可以消除在巨大的或不良的血管化肿瘤中有限地接近抗体的问题；而且所需的抗体总数可减少。放射性核素发射放射性粒子，该粒子可损害细胞DNA到细胞修复机制不能使细胞继续存活的程度；因此，假如靶细胞是肿瘤，放射性标记物可有利地杀死肿瘤细胞。根据定义，放射性标记抗体包括使用放射性物质，患者(即可能的骨髓移植)以及保健医生(即在带有放射性的条件下工作时需高度警惕)可能都需要采取预防措施。
因此，一种改进鼠单克隆抗体使之在治疗B细胞紊乱中有效的方法是将放射性标记或毒素连接到抗体上，以使标记或毒素位于肿瘤部位。例如，上面提到的IF5抗体已以碘-131(131I)做标记，并据报道在两个患者中进行过生物学分布评价，见Eary，J.F.等人“Imaging and Treatment of B-CellLymphoma”J.Nuc.Med.31/81257-1268(1990)；也参见Press，O.W.等人，“Treatment of Refractory Non-Hodgkin′s Lymphoma With Radiolabled MB-1(Anti-CD37)Antibody”J.Clin.Onc.7/81027-1038(1989)(表明一个经131I标记过的IF5治疗的患者达到部分反应)；Goldenberg，D.M.等人，“Targeting，Dosimetry and Radioimmuno therapy of B-Cell Lymphomas WithIodine-131-Labeled LL2 Monoclonal antibody”J.Clin.Onc.9/4548-564(1991)(接受多次注射的8个病人中的三个据报道产生了HAMA反应)；Appelbaum，F.R.“Radiolabled Monoclonal Antibodies in the Treatment ofNon-Hodgkin′s Lymphoma”Hem./Onc.Clinics of N.A.5/51013-1025(1991)(文献综述)，Press，O.W.等人“Radiolabled-Antibody Therapy of B-CellLymphoma With Autologous Bone Marrow Support”New England Journal ofMedicine 329/171219-12223(1993)(碘-131标记抗-CD20抗体IF5和B1)；以及Kaminski，M.G.等人，“Radioimmuno-therapy of B-Cell Lymphoma With[131I]Anti-B1(Anti-CD20)Antibody”NEJM 329/7(1993)(碘-131标记抗-CD20抗体B1；本文下面称之为“Kaminski”)。
也已将毒素(即羟柔毛霉素或丝裂霉素C之类的化疗剂)连接于抗体，参见例如PCT公开申请WO 92/07466(1992年5月14日公开)。
“嵌合”抗体，即含有来自两种或多种不同物种(例如鼠和人)的各部分的抗体，已被开发为另一种连接抗体。例如Liu，A.Y.等人“Production of aMouse-Human Chimeric Monoclonal Antibody to CD20 With PotentFc-Dependent Biologic Activity”J.Immun.139/103521-3526(1987)，介绍了一种抗CD20抗原的鼠-人嵌合抗体。也参见PCT公开申请WO 88/04936。然而在这篇参考文献中没有资料提供有关使用这类嵌合抗体治疗B细胞紊乱的能力、效力或实用性的内容。应注意，体外的功能性检测(例如补体依赖性溶胞(CDC)；抗体依赖性细胞毒(ADCC)等)不可能当然地预料嵌合抗体破坏或消耗表达特异抗原的靶细胞的体内能力。参见例如Robinson，R.D.等人“Chimeric mouse-human anti-carcinoma antibodies that mediate differentanti-tumor cell biological activities.”Hum.Antibod.Hybridomas284-93(1991)(检测不出ADCC活性的嵌合鼠-人抗体)。因此只有通过体内实验才可真正评价嵌合抗体的可能的治疗效力。
本技术领域所需的，可成为重大进展的工作是定靶CD20抗原以治疗灵长类包括(但不限于)人的B细胞淋巴瘤的治疗方法。
本文所公开的是为治疗B细胞紊乱，特别是B细胞淋巴瘤所设计的治疗方法。这些方法是基于施用免疫学活性的嵌合抗-CD20抗体用以消耗掉外周血B细胞，包括与淋巴瘤相关的B细胞；施用放射性标记抗-CD20抗体，用以定靶与局部和外周B细胞相关的肿瘤；以及用合作治疗策略，施用嵌合抗-CD20抗体和放射性标记抗-CD20抗体。
本发明包括第一项，治疗B细胞淋巴瘤的方法，包括给人施用治疗有效量的至少一种免疫活性嵌合抗-CD20抗体。
第二项，根据第一项的方法，其中施用于所说人的所说抗体量是所说人的每公斤体重约0.001至约30mg抗体之间(mg/kg)。
第三项，根据第一项的方法，其中所说抗体衍生自TCAE8中含抗-CD20的转染瘤，该TCAE8中的抗-CD20贮存于美国典型培养物中心，是ATCC贮存号69119的微生物的一部分。
第四项，根据第一项的方法，进一步还包括施用第二种治疗学上有效量的至少一种免疫活性嵌合抗-CD20抗体。
第五项，根据第四项的方法，其中所说的抗体附加给药于所说人，是在所说抗体对所说人的所说第一次给药之后的约7天内进行。
第六项，治疗B细胞淋巴瘤的方法，包括下述步骤
1)在第一次给药期间，第一次给人治疗有效量的免疫活性嵌合抗-CD20抗体；2)在第二次随后给药期间，给与第二次治疗有效量的所说抗体；3)在第三次随后给药期间，给与第三次治疗有效量的所说抗体。
第七项，根据第六项的方法，其中所说的第1、第2和第3次所说抗体治疗有效量为约0.001mg/kg至约30mg/kg之间。
第八项，根据第六项的方法，其中所说第二次给药期是在所说第一次给药期的约7天内。
第九项，根据第六项的方法，其中所说第三次给药期是在所说第一次给药期的约14天内。
第十项，根据第六项的方法，其中所说的抗体衍生自TCAE8中含抗-CD20的转染瘤(ATCC贮存号69119)。
第十一项，免疫活性嵌合抗-CD20，它从含有TCAE8中的抗-CD20(ATCC保藏号69119)的转染瘤产生。
第十二项，分泌抗-CD20抗体的杂交瘤，所说杂交瘤是美国典型培养物保藏中心保藏号为HB11388的微生物。
第十三项，从第十二项的杂交瘤分泌的单克隆抗体。
第十四项，根据第十二项的放射性标记抗体。
第十五项，根据第十四项的放射性标记抗体，其中的放射性标记物选自钇[90]，铟[111]及碘[131]所组成的一组之中。
第十六项，治疗B细胞淋巴瘤的方法，包括给人施用治疗有效量的第十四项的抗体。
第十七项，根据第十六项的方法，其中所说抗体的放射性标记物是钇[90]。
第十八项，治疗B细胞淋巴瘤的方法，包括下述步骤1)在第一次给药期，给人施用免疫活性嵌合抗-CD20抗体；及2)在第二次给药期，给人施用放射性标记抗-CD20抗体。
第十九项，根据第十八项的方法，其中嵌合抗-CD20，衍生自TCAE8中的抗-CD20的转染瘤，该抗-CD20贮存于美国典型培养物收藏中心，是ATCC贮存号69119的微生物的一部分。
第二十项，根据第八项的方法，其中所说放射性标记抗体含由杂交瘤分泌的单克隆抗体，该杂交瘤是美国典型培养物收藏中心贮存号为HB11388的微生物的等同物。
对附图的简要说明
图1是适用于生产免疫活性嵌合抗-CD20抗体(TCAE8)的串联嵌合抗体表达载体的图示。
图2A至2F是图1载体的核酸序列；图3A至3F是图1载体的核酸序列，该序列进一步含鼠轻链和重链可变区(TCAE8中的抗-CD20)；图4是来自鼠抗-CD20单克隆抗体2B8的鼠可变区轻链的核酸及氨基酸序列(包括CDR和构架区)；图5是来自鼠抗-CD20单克隆抗体2B8的鼠可变区重链的核酸及氨基酸序列(包括CDR和构架区)；图6是证明萤光标记人C1q与嵌合抗-CD20抗体结合的流式细胞计数结果，包括作为对照的标记C1q，标记C1q与鼠抗-CD20单克隆抗体2B8，以及标记C1q与人IgG1，k；图7表示嵌合抗-CD20抗体和鼠抗-CD20单克隆抗体2B8相比较的补体相关的溶胞结果；图8表示嵌合抗-CD20抗体和2B8相比对体内人效应细胞的抗体介导的细胞毒性结果；图9A，9B和9C给出分别输注免疫活性嵌合抗-CD20抗体0.4mg/kg(A)，1.6mg/kg(B)，及6.4mg/kg(C)之后，非人灵长类外周血B淋巴细胞消耗的结果；图10给出输注0.01mg/kg免疫活性嵌合抗-CD20抗体后，非人灵长类外周血B淋巴细胞消耗的特别结果；图11给出在使用B细胞成淋巴肿瘤的小鼠体异物记录模式中Y2B8产生的杀肿瘤结果；图12给出在使用B细胞成淋巴肿瘤的小鼠体异物记录模式中，C2B2产生的杀肿瘤结果；图13给出在使用B细胞成淋巴肿瘤的鼠体异物记录模式中，Y2B8和C2B8相结合所产生的杀肿瘤结果；
图14A和14B给出得自C2B8的I/II期临床分析的结果，表明患者B细胞群体随时间的消耗，证明病患部分缓解(14A)及病患轻度缓解(14B)。
一般来说，抗体由两轻链和两重链分子组成，这些链形成一个普通的Y型，轻链和重链共同构成Y的两臂，重链构成Y的下部。轻链和重链被分成结构和功能同源区。轻链(VL)和重链(VH)二者的可变区决定了识别能力和特异性。轻链(CL)和重链(CH)的不变区赋于其重要的生物学性质，例如抗体链结合，分泌，经胎盘的流动性、Fc受体结合、补体结合等等。导致免疫球蛋白基因在产抗体细胞中表达的一系列活动是十分复杂的。可变区域基因序列位于不同种系基因片段(称之为“VH”“D”和“JH”或“VL”和“JL”。这些基因片段由DNA重排被连接形成在重链和轻链分别表达的完全V区域。该经重排连接的V片段(VL-JL和VH-D-JH)然后编码完全可变区或者分别编码轻链和重链的抗原结合区域。
使用抗-CD20鼠单克隆抗体(IF5)进行的人B细胞淋巴瘤的血清免疫疗法已由Press等人介绍过(69Blood 584，1987，见上面)，但遗憾的是据载其治疗反应只是暂时的。此外，据报道有25％的经试验的患者显示出对血清疗法的人抗鼠抗体(HAMA)反应。Press等人指出，这些抗体与毒素或放射性同位素结合，比起未结合的抗体来说，可产生更持久的临床效果。
由于B细胞淋巴瘤的效果衰减效应，并确实需要对付该疾病的可行治疗方法，我们已着手研究带有一种特殊抗体2B8(作为各方法之间的共同纽带)的不同的方法。一个这样的方法有益地利用了哺乳动物体系容易和有效地恢复外周血B细胞的能力；使用该方法，我们试图实际上消除或消耗外周血和淋巴组织中的B细胞，以作为除去B细胞淋巴瘤的手段。我们利用特殊的免疫活性嵌合抗-CD20抗体达到了这一目的。在另一个方法中，我们探索以放射性标记定靶肿瘤细胞使之破坏。
本文所使用术语“抗-CD20抗体”是特异性识别35000道尔顿的细胞表面非糖基化磷酸蛋白的抗体，该蛋白一般叫作人B淋巴细胞限制分化抗原Bp35，通常称之为CD20。本文所用术语“嵌合”，当针对抗-CD20抗体使用时，包括最优选的利用重组脱氧核糖核酸技术得到，并含人(包括免疫学相关物种例如黑猩猩)和非人成份的抗体；嵌合抗体的不变区最优选地基本上等同于天然人抗体的不变区；该嵌合抗体的可变区最优选地来源于非人源，且具有所需的对CD20细胞表面抗原的致免疫性和特异性。非人来源可以是任何可用于产生抗人CD20细胞表面抗原的抗体的任何脊椎动物源，或含有人CD20细胞表面抗原的材料。此类非人来源包括(但不限于)啮齿动物(例如兔、大鼠、小鼠等等)和非人灵长类动物(例如Old World猴、猿等)。最优选的非人成分(可变区)来源于鼠类。当针对嵌合抗-CD20抗体时本文所用短语“免疫学活性”意指结合人C1q，介导人B淋巴样细胞系补体依赖性溶胞(CDC)，并且通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)溶解人靶细胞的嵌合抗体。本文中所用短语“间接标记”和“间接标记法”意指螯合剂共价连接到抗体上，并且至少有一个放射性核素插入该螯合剂中。优选的螯合剂和放射性核素列举在Srivagtava S.C.和Mease，S.C.的“Progress in Researchon Ligands，Nuclides and Techniques for Laleling Monoclonal Antibodies”Nucl.Med.Bio.18/6589-603(1991)(Srivagtava)一文中，该文引入本文作为参考。一种特别优选的螯合剂是1-异硫氰酸根合苯甲基-3-甲基二(1，2-亚乙基)三胺五乙酸(MX-DTPA)；间接标记所用特别优选的放射性核素包括铟[111]和钇[90]。本文中所用短语“直接标记”和“直接标记法”意指放射性核素共价直接连接到抗体上(一般借助氨基酸残基)。优选的放射性核素在Srivagtava中提供；一种特别优选的用于直接标记的放射性核素是碘[131]，借助酪氨酸残基共价连接。间接标记法特别优选。
本文所公开的治疗方法是基于灵长类动物免疫系统很快恢复或复原外周血B细胞的能力。此外，因为灵长类动物的基本免疫反应是由T细胞引起的，所以当免疫系统有外周血B细胞缺损时，不一定需要额外的预防措施(即隔离病人等)。由于灵长类动物免疫系统的以上这些及其它细微差别，我们的治疗B细胞紊乱的方法允许使用免疫活性嵌合抗-CD20抗体清除外周血B细胞。
根据定义，因为外周血B细胞紊乱可表明需要进入(access)血的治疗，所以免疫活性嵌合抗-CD20抗体和放射标记抗-CD20抗体的给药途径优选非肠道进行；本文使用的术语“非肠道”包括静脉、肌内、皮下、直肠、阴道或腹膜给药。这些给药方式中，最优选静脉给药。
免疫活性嵌合抗-CD20抗体及放射标记抗-CD20抗体一般由标准技术提供，将其加入药用可接受的缓冲剂，例如无菌盐水、无菌缓冲水、丙二醇，或上述缓冲液的混合物中给药。制备非肠道给药药剂的方法见Pharmaceutical Carriers & Formulations，Martin Remington′s PharmaceuticalSciences，15th Ed.(Mack Pub.Co.，Easton，PA 1975)(引入本文作为参考)。
用于在任何给定患者中产生独特治疗效果的免疫学活性嵌合抗-CD20抗体的特定治疗有效量，可以由本领域普通技术人员熟知的标准技术来确定。
有效剂量(即治疗有效量)免疫活性嵌合抗-CD20抗体是约0.001-约30mg/kg体重，更优选约0.01-约25mg/kg体重，而最优选约0.4-约20.0mg/kg体重。其它剂量也可用；影响剂量的因素包括(但不限于)患病严重程度，以前用过的治疗方法，患者的总的健康状况，是否存在其它疾病等等。技术人员通过评估具体病人很容易确定落入上述范围内的适当剂量，假如需要，也可在该范围之外。
按这些剂量引入免疫活性嵌合抗-CD20抗体，可以以一次治疗完成，也可以以多次治疗完成。对于嵌合抗体来说，优选分多次治疗引入；优选方法由与该病相关的治疗方法来预测。虽然不希望受任何具体理论所束缚，但因为免疫活性嵌合抗-CD20抗体既具有免疫活性，又能与CD20结合，一旦开始引入该免疫活性嵌合抗-CD20抗体到个体中，则外周血B细胞消耗便开始了；我们观察到在治疗输注后24小时内几乎完全消耗掉。由此，该免疫活性嵌合抗-CD20抗体(或放射性标记抗-CD20抗体)随后引入(一次或多次)患者体内时，则可推定a)消除保留的外周血B细胞；b)开始从淋巴节消耗B细胞；c)开始从其它组织源，例如骨髓、肿瘤等等消耗B细胞。当反复引入免疫活性嵌合抗-CD20抗体时再次表明，出现一系列现象，每种现象我们都认为对有效治疗疾病是很重要的。第一现象可以看作原则上针对基本上消耗患者的外周血B细胞；随后的各现象可认为是原则上针对同时或者分步从系统中清除剩余的B细胞，清除淋巴节B细胞，或清除其它组织B细胞。
实际上，虽然单剂量也提供效益，并能有效利用于病患治疗/控制，但优选的治疗过程可分几步进步；最优选将免疫活性嵌合抗-CD20抗体以约0.4-约20mg/kg体重，每周给患者施用一次，持续2-10个星期(最优选持续4星期左右)。
对于放射性标记抗-CD20抗体的使用来说，优选抗体是非嵌合的，该优选是根据与鼠抗体相比，嵌合抗体的循环半衰期明显要长些来预测出的(即由于循环半衰期较长时，放射性核素在患者体内存在时间增长)。但是，如果相对于鼠抗体来说，与嵌合抗体相结合使用时，采用较低毫居里(mCi)剂量，则放射性标记抗体可以有益地施用。该情况使得在保持治疗效益的同时，骨髓毒性可降至能接受的水平。
不同的放射性核素都可用于本发明，相信本领域技术人员能很容易地决定哪种放射性核素在不同情况下是最为适合的。例如，碘[131]是已知用于定靶免疫治疗的放射性核素，但由于下述原因碘[131]的临床应用可能受到限制8天的物理半衰期；在血液中和肿瘤部位碘化抗体都发生脱卤素作用；以及发射特性(例如大量γ成分)，它可使肿瘤中的局部剂量积累处于次优化状况。
随着优良螯合剂的出现，将金属螯合基团连于蛋白上的可能性，提高了使用其它放射性核素(例如铟[111]和钇[90])的机会。钇[90]用于放射性免疫治疗有几个优点它的64小时的半衰期足以使得抗体沉积于肿瘤周围，并且不像碘[131]之类，钇[90]是高能量的纯β发射源，其衰变时无γ射线相随，在组织中，它的作用范围为100-1000细胞直径。而且，它的射线穿透量极小，使得门诊病人可以施用钇[90]标记抗体。再有，标记抗体的内化对于杀死细胞来说并不需要，而离子化射线的局部发射对于无靶抗原的相邻肿瘤细胞来说应是致命的。
钇[90]的一种非治疗性限制是因为它缺乏明显的γ射线，使得以此造影很困难，为避免这一问题，在以钇[90]标记抗-CD20治疗给药之前，将诊断“造影”放射性核素(例如铟[111])用来测定肿瘤的位置和相对尺寸。铟[111]用作特别优选的诊断放射性核素，因为在约1-约10mCi之间可安全给药无明显毒性；并且从其影像资料一般可预知随后的钇[90]标记抗体的分布。大部分造影研究采用5mCi铟[111]标记抗体，因为该剂量既安全又比起较低剂量来说提高了造影效果，在施用抗体之后3-6天出现最优影像。参见例如Murray，J.L.，26J.Nuc.Med.3328(1985)and Carraguillo，J.A.等人26J.Nuc.Med.67(1985)。
钇[90]标记抗-CD20的有效单治疗剂量(即治疗学上有效量)在约5-约75mCi之间，更优选约10-约40mCi之间。碘[131]标记抗-CD20抗体的有效单治疗非骨髓剥离剂量在约5-约70mCi之间，更优选约5-约40mCi之间。碘[131]标记抗-CD20抗体的有效单治疗剥离剂量(即可以要求自体骨髓移植)在约30-约600mCi之间，更优选约5-小于500mCi。在与嵌合抗-CD20抗体相结合时，由于比鼠抗体有较长的循环半衰期，碘[131]标记嵌合抗-CD20抗体的有效单治疗非骨髓剥离剂量在约5-约40mCi之间，更优选小于约30mCi。成像标准(例如对铟[111]标记物来说)一般小于约5mCi。
对于放射性标记抗-CD20抗体，其治疗可采用单次治疗法或多次治疗法。因为使用放射性核素成分，因此优选治疗之前，收集经受由放射性引起的潜在的致命骨髓毒性的病人的外周干细胞(PSC)或骨髓(BM)，使用标准技术收集BM和/或PSC，为能够再输注将其净化和冷冻。此外，最优选治疗之前对病人进行使用诊断标记抗体(例如用铟[111])的诊断剂量测量法研究，其目的在于保证在任何正常器官或组织中，治疗标记抗体(例如使用钇[90])将不致于变得不必要的“过浓”。
已介绍过嵌合鼠-人抗体，例如见Morrison，S.L.et al.，PNAS 116851-6854(1984年11月)；欧洲专利公开No.173494；Boulianne，G.L.et al.，Nature 312643(1984年12月)；Neuleiger，M.S.et al.，Nature 314268(1985年3月)；欧洲专利公开No.125023；Tan et al.，J.Immunol.1358564(1985年11月)；Sun，L.K.et al.，Hybridoma 5/1517(1986)；Sahagan et al.，J.Immunol.1371066-1074(1986)。总的参见Muron，Nature 312597(1984年12月)；Dickson，Genetic Engineering News 5/3(1985年3月)；Marx，Science 229455(1985年8月)；以及MorrisonScience 2291202-1209(1985年9月)。Robinsonet al.在PCT
发明者D·R·安德逊, N·汉纳, J·E·里安纳, R·A·纽曼, M·E·列夫, W·M·拉斯泰特 申请人:生物基因Idec公司