专利名称：一种化合物及其制备方法和在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有抗真菌作用的化合物，本发明还涉及该化合物的制备方法和在制药中的应用。
背景技术：
狼毒是毒属植物瑞香科瑞香狼毒(Stellera chamaejasm eL.)或大戟科狼毒大戟(Euphorbia fischeriana Stued.)、月腺大戟(Euphorbia ebracteolata Hayata.)的根，有逐水祛痰、散结杀虫之功效，为常用中药。近年的研究发现，狼毒提取物对肿瘤细胞有较强的抑制活性，此外还有抗菌、抗病毒和杀虫作用，是一个理想的天然药物开发品种。在狼毒大戟(Euphorbia fischeriana Stued.)植物中有一些内生真菌，但目前对这些狼毒植物内生真菌及其抗茵有效成分未见相关报导。
发明内容
本发明的目的是针对上述问题提供一种化合物，该化合物抗真菌效果较好，可采用狼毒大戟植物内生真菌发酵制备获得。
本发明另一个目的是提供该化合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供该化合物在制药中的应用。
本发明的目的是通过下列技术措施实现的一种化合物，为2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯(2，3-Diamino-6-hydroxy-benzoic acid 2-ethyl-hexyl ester)。
该化合物为白色片状结晶，溶于丙酮、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂，也溶于水。其分子式C15H24N2O3，分子量M＝280。其结构式如式(I)所示。
用于制备所述化合物的菌株，其分类命名为黑曲霉HX839251(Aspergillus nigerHX839251)，已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCCNOM206095。保藏日期为2006年9月18日。
所述的化合物的制备方法，该制备方法包括下列步骤a.发酵菌株采用保藏编号为CCTCC NOM206095的菌株b.菌株培养将发酵菌株接种在固体培养基上，25～30℃培养4～8天，收集菌株的孢子；将菌株的孢子接入种子培养基，150～300rpm，25～30℃，培养1～3天，得种子液；将种子液按发酵培养基体积1～20％的接科量接种于发酵培养基，150～300rpm，25～30℃发酵培养5～8天，收集发酵液c.发酵产物提取发酵液中加入乙醇或乙酸乙酯浸泡12～48h，离心或过滤除去菌体，将上清或滤液浓缩至适量体积，适量乙酸乙酯萃取1～3次，萃取液浓缩即得发酵提取物；或者发酵液离心或过滤将菌体分离，菌体加适量乙醇或乙酸乙酯浸泡12～48h，得浸泡液；上清或滤液加适量乙酸乙酯萃取1～3次，得萃取液；将浸泡液离心或过滤除去菌体，与萃取液合并，真空浓缩即得发酵提取物；d.目标产物纯化发酵提取物上柱层析，用氯仿与甲醇混合溶液进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液结晶纯化，即得。
所述的制备方法，其中步骤b中的培养基为培养基各组分在培养基中按重量体积比(g/ml)计，碳源0.5～20％，氮源0.5～10％，无机盐0-1％，其中固体培养基需加入1.5-4％的琼脂，其余为水。更好地，培养基各组分在培养基中按重量体积比(g/ml)计，碳源2～8％，氮源0.5～6％，无机盐0-1％，其中固体培养基需加入1.5-4％的琼脂，其余为水。
所述的制备方法，其中所述的碳源选自淀粉水解糖、糖蜜、葡萄糖、蔗糖、淀粉类、土豆汁、麦芽汁、豆汁、土豆浸出粉、燕麦中的一种或几种；所述的氮源选自黄豆饼粉、玉米浆、蛋白胨、鱼胨、蚕蛹水解液、尿素、硫酸铵、酵母浸出物、黄豆粉、棉子粉、氨水、硝酸盐中的一种或几种；所述的无机盐选自氯化钠、氯化镁、氯化锰、氯化钾、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸锰中的一种或多种。
所述的制备方法，其步骤d中柱层析采用硅胶G柱；结晶纯化采用甲醇或丙酮重结晶。
所述的制备方法，其步骤d中氯仿与甲醇混合溶液中氯仿与甲醇的体积比为80-95％∶20-5％。
一种药物组合物，该药物组合物由治疗有效量的所述化合物(2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯)与辅料组成。
所述的化合物在制备抗真菌药物中的应用。
本发明有益效果本发明所述的化合物是具有抗真菌作用，经过对多种皮肤致病真菌的试验表明，不但对白假丝酵母(Candida albicans)有很好的抗菌活性外，对其他常见皮肤致病真菌也有较好的抗菌效果，其抗菌谱及效果比目前常用的几种外用药膏(克霉唑溶液、金达克宁酮康唑乳膏、咪康唑乳膏、美特克肤立康乳膏)要好，可用于制备抗真菌药物。
本发明制备方法成本低，获得的目标化合物纯度较高，HPLC测定纯度≥98％，通过元素分析、红外光谱、质谱和核磁C谱和H谱，确定所得晶体化合物为2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯(2，3-Diamino-6-hydroxy-benzoic acid 2-ethyl-hexyl ester)，其分子式为C15H24N2O3，分子量M＝280。
一、本发明化合物的鉴定1.高效液相色谱(HPLC)检测氨基分析柱(phenomenex NH2柱，4.6mm×250mm，5μm)；流动相∶乙睛∶甲醇∶0.05％乙酸铵溶液＝15∶5∶80(体积比)，流速1ml/min，柱温为室温，检测波长λ207，进样量20μl。可见最大吸收峰，结果见图1。
2.紫外扫描结果见图2。
3.红外扫描适量晶体样品KBr压片，红外光谱仪测定，扫描范围400cm-1～4000cm-1。红外扫描结果见图3。
4、质谱EI-MS(70eV)m/z(％)279[M-1]+(10)，167[M-C8H17]+(35)，149[M-C8H17-H2O]+(100)，113[C8H17]+(9)，104(5)，83(5)，71(17)，57(18)。图谱见图4。
5、核磁C谱和H谱氢谱和碳谱数据见表1及图5-11表1本发明化合物1H and13C NMR测定数据(500MHz，in CD3OD)
注BrukerAM-400型超导核磁共振仪，TMS为内标。
二、本发明化合物的抗菌作用1).皮肤致病真菌YM2005白假丝酵母Candida albicans；YM3092星形石膏样毛癣菌(须疱毛癣菌)Trichophyton gypseum asteroides；YM3080石膏样小孢子菌Microsporum gypseum；YM3096疣状毛癣菌Trichophyton verrucosum。
以上皮肤致病真菌均由中国云南省微生物研究所提供。
2).供试样品配制本发明化合物，外观性状白色结晶体，试验用浓度5mg/ml，用无菌蒸馏水溶解。
阳性对照药克霉畔软膏(国药准字H44023465)，含量15mg/ml；广州何济公制药有限公司生产。金达克宁酮康唑乳膏(国药准字H20043171)含量20mg/g；西安杨森制药有限公司生产。咪康唑乳膏(国药准字H31022627)含量20mg/g；上海通用药业股份有限公司生产。美特克肤立康乳膏(云卫消准字(2001)第53-0063号)，20mg/g，(中国昆明艾丽丝化工用品开发公司生产)。试验用浓度均为5mg/ml(按主要成分含量计算配制)，用无菌蒸馏水溶解。
3).实验方法按照国家新药筛选方法，抗真菌药物除采用纸片法或稀释法测定药效、测量抑菌圈范围外，还要仔细观察被测物质是否阻止分生孢子萌发，抑制菌丝生长扩散，或造成菌丝畸形等。将致病真菌制成菌悬液，加到沙氏琼脂平皿(致病菌培养的培养基葡萄糖4％，蛋白胨1％，琼脂1.5％，pH 5.6，高压灭菌或过滤除菌后备用)中涂布均匀，化合物加到含指示菌的平皿中，37℃培养24-96小时，观察并分别测量抑菌圈直径(mm)，结果见表1。
4).结果表1.本发明化合物抗皮肤致病真菌的结果
注表中以逗号隔开各数据为最小和最大抑菌圈直径(mm)范围。“-”表示没有抗菌作用；“*”表示抗菌作用不明显。
结果显示，本发明化合物的抗菌谱及效果比4个阳性对照药要好。特别是对白色念珠菌(也称白假丝酵母)Candida albicans的抑制生长作用，本发明化合物明显强于克霉唑软膏、金达克宁酮康唑乳膏、咪康唑乳膏及美特克肤立康乳膏药物。
三、保藏编号为CCTCC NOM206095的发酵菌株的分类鉴定1.1培养特征将保臧编号为CCTCC NOM206095的菌株(以下称CCTCC NOM206095菌株)用PDA斜面培养基活化5天，接种PDA液体培养基(500ml三角瓶中装有100ml PDA液体培养基)摇瓶发酵。发酵培养特征培养第1天，菌种有零星的白色菌丝点；培养第2天，有细小的白色菌球；培养第3天，发酵液菌球增多，菌丝球呈乳白色色；培养第4天，菌丝球密集，发酵液清亮淡黄色，培养第5-7天，发酵液菌丝球密集增大，浅黄色，瓶壁边缘有黑色粉状孢子(如图12所示)。
1.2CCTCC NOM206095菌株的显微形态特征。
CCTCC NOM206095菌株分生孢子梗和分生孢子显微形态特征与黑曲霉Aspergillus niger相似，见图13和图14。
1.3分子生物学特征CCTCC NOM206095菌株的18SrDNA系列由1750个碱基(bp)组成，MolecularWeight(kDa)ssDNA542.12，dsDNA序列见SEQ ID No.1。
基于18SrDNA序列分析，在系统发育中CCTCC NOM206095菌株与黑曲霉(Aspergillu niger)应在同一分支上，同源性为98.55％。
CCTCC NOM206095菌株属于(兼性)好氧小型(丝状)真菌。在自然情况下，静止培养可以生长(如斜面菌种培养)，在有氧的情况，生长更好，比如摇瓶或发酵(搅拌式、鼓泡式、提升式等)，根据培养需要，通气量可以达到1∶1.5(v/v)。
图1是本发明化合物的HPLC图。
图2是本发明化合物的紫外扫描图。
图3是本发明化合物的红外扫描图。
图4是本发明化合物的质谱(ESI-MS)图谱。
图5是本发明化合物的核磁共振1H(1H-NMR)图谱。
图6是本发明化合物的核磁共振13C(13C-NMR)图谱。
图7是本发明化合物的核磁共振13C二维谱图谱。
图8是本发明化合物的核磁共振13C二维谱图谱。
图9是本发明化合物的核磁共振13C二维谱图谱。
图10是本发明化合物的核磁共振二维谱(1H-1HCOSY)图谱。
图11是本发明化合物的核磁共振二维谱(1H-1HCOSY)图谱。
图12是YM38124培养特征照片。
图13是YM38124菌株分生孢子光学显微镜照片。
图14是YM38124菌株分生孢子梗光学显微镜照片。
菌株保藏情况保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC NOM206095，分类命名为黑曲霉HX839251(Aspergillus niger HX839251)，保藏日期为2006年9月18日。
具体实施例方式
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述，但不限制本发明。
本发明所述的20％的土豆汁是指取200g土豆，用1000ml水，煮烂过滤，取其滤液，定容至1000ml。
实施例11、菌株发酵菌株采用保藏编号为CCTCC NOM206095的菌株。
2、培养基斜面培养基20％土豆汁，加入葡萄糖20g，硝酸铵10g，琼脂15g，氯化钠0.1g，自然pH值；种子培养基20％土豆汁，加入葡萄糖25g，硝酸铵12g，氯化钠0.1g，自然pH值；发酵培养基乙酰基淀粉20g，葡萄糖20g，玉米浆15g(固形物含量为40％)，氯化钠0.1g，加适量自来水溶解，采用10％NaOH溶液调节pH至6.8-7.0，加自来水定容至1000ml；培养基均采用121℃灭菌30min。
3、培养方法斜面培养将-70℃低温冻存的保藏编号为CCTCC NOM206095的菌种无菌水溶解稀释划线接种在斜面培养基上，26℃培养7天，用浓度为30％的无菌甘油洗下孢子，-70℃保存备用。
种子液制备将-70℃低温冻存的菌株孢子接种于种子培养基(500ml三角瓶中装有100ml种子培养基)，220rpm，26℃，培养2天，得种子液。
发酵培养50L发酵罐中装入25L发酵培养基，将占发酵培养基体积10％的种子液接种于发酵培养基，220rpm，26℃，培养6～7天，发酵过程中采用植物油进行消泡，采用收集发酵液。
4、提取及纯化发酵液中加入乙醇浸泡48h，离心除去菌体，将上清液浓缩至适量体积，按1∶1体积加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液适当浓缩即得发酵提取物。发酵提取物上硅胶G柱层析，氯仿∶甲醇＝8∶2(v/v)洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至干，有针状晶体析出，用丙酮-水系统多次结晶，所得晶体即为目的产物2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯。HPLC测定纯度≥98％。
实施例21、菌株发酵菌株采用保藏编号为CCTCC NOM206095的菌株；2、培养基斜面培养基葡萄糖120g，硫酸铵20g，琼脂15g，加自来水至1000ml，自然pH值；种于培养基葡萄糖130g，硫酸铵20g，加自来水至1000ml，自然pH值；发酵培养基蔗糖100g，固形物含量为40％的玉米浆5g，蛋白胨5g，加自来水，采用10％NaOH溶液调节pH至6.8-7.0，定容至1000ml；培养基均采用121℃灭菌30min。
3、培养方法斜面培养将-70℃低温冻存的保藏编号为CCTCC NOM206095的菌种无菌水溶解稀释划线接种在斜面培养基上，28℃培养5天，用浓度为30％的无菌甘油洗下孢子，-70℃保存备用。
种子液制备将-70℃低温冻存的菌株孢子接种于种子培养基(500ml三角瓶中装有100ml种子培养基)，200rpm，27℃，培养2天，得种子液。
发酵培养发酵培养基装入摇瓶，将占发酵培养基体积10％的种子液接种于发酵培养基，28℃，250rpm，培养6天，采用收集发酵液。
4、提取及纯化发酵液中加入等体积的95％乙醇或无水乙醇，200rpm振荡浸泡24h，过滤除去菌体，滤液浓缩至适量体积，按1∶1体积加入乙酸乙酯萃取3次，萃取液适当浓缩即得发酵提取物。发酵提取物上硅胶G柱，氯仿∶甲醇＝95∶5(v/v)洗脱，收集混合物组分，再上硅胶G柱，氯仿∶甲醇＝80∶20(v/v)洗脱，收集洗脱液，结晶，用甲醇重结晶3次，所得晶体即为目的产物2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯，HPLC测定纯度≥98％。
实施例31、菌株发酵菌株采用保藏编号为CCTCC NOM206095的菌株；2、培养基斜面培养基糖蜜40g，豆饼80g，琼脂15g，硫酸亚铁0.05g，加蒸馏水至1000ml，自然pH值；种子培养基糖蜜40g，豆饼80g，硫酸亚铁0.05g，加蒸馏水至1000ml，自然pH值；发酵培养基糖蜜60g，鱼胨5g，豆饼20g，硫酸亚铁0.05g，加蒸馏水至1000ml，自然pH值；培养基均采用121℃灭菌30min。
3、培养方法斜面培养将-70℃低温冻存的保藏编号为CCTCC NOM206095菌种无菌水溶解稀释划线接种在斜面培养基上，28℃培养5天，用浓度为30％的无菌甘油洗下孢子，-70℃保存备用。
种子液制备将-70℃低温冻存的菌株孢子接种于种子培养基(500ml三角瓶中装有100ml种子培养基)，200rpm，27℃，培养2天，得种子液。
发酵培养发酵培养基装入摇瓶，将占发酵培养基体积10％的种子液接种于发酵培养基，28℃，250rpm，培养6天，采用收集发酵液。
4、提取及纯化发酵液过滤将菌体分离，菌体加适量乙酸乙酯浸泡12～48h，得浸泡液；滤液加适量乙酸乙酯萃取1～3次，得萃取液；将浸泡液过滤除去菌体，与萃取液合并，真空浓缩即得发酵提取物；发酵提取物上硅胶G柱，氯仿∶甲醇＝95∶5(v/v)洗脱，收集混合物组分，再上硅胶G柱，氯仿∶甲醇＝80∶20(v/v)洗脱，收集洗脱液，结晶，用甲醇重结晶3次，得目标产物2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯，HPLC测定纯度≥98％。
实施例41、菌株发酵菌株采用保藏编号为CCTCC NOM206095菌株；2、培养基斜面培养基蔗糖200g，豆饼50g，琼脂15g，氯化镁0.01g，氯化钙0.01g，磷酸二氢钾0.05g，加自来水至1000ml，自然pH值；种子培养基蔗糖200g，豆饼50g，氯化镁0.01g，氯化钙0.01g，磷酸二氢钾0.05g，加自来水至1000ml，自然pH值；发酵培养基土豆浸出粉50g，蔗糖30g，葡萄糖20g，蛋白胨40g，氯化镁0.01g，氯化钙0.01g，磷酸二氢钾0.05g，加自来水，采用10％NaOH溶液调节pH至6.8-7.0，定容至1000ml；培养基均采用121℃灭菌30min。
3、培养方法斜面培养将-70℃低温冻存的保藏编号为CCTCC NOM206095菌种无菌水溶解稀释划线接种在斜面培养基上，30℃培养4天，用浓度为30％的无菌甘油洗下孢子，-70℃保存备用。
种子液制备将-70℃低温冻存的菌株孢子接种于种子培养基(500ml三角瓶中装有100ml种子培养基)，250rpm，28℃，培养1天，得种子液。
发酵培养发酵培养基装入摇瓶，将占发酵培养基体积20％的种子液接种于发酵培养基，30℃，280rpm，培养4天，采用收集发酵液。
4、提取及纯化
发酵液离心分离菌体，菌体加适量乙酸乙酯浸泡24h，得浸泡液；上清加入适量的乙酸乙酯(体积比1∶1)萃取2次，得萃取液；将浸泡液离心除去菌体，合并浸泡液和萃取液，真空浓缩至适当体积，上硅胶G柱，氯仿∶甲醇＝95∶5(v/v)洗脱，收集混合物组分，再上硅胶G柱，氯仿∶甲醇＝8∶2(v/v)洗脱，收集洗脱液，结晶，用丙酮重结晶3次，得目标化合物2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯，HPLC测定纯度≥98％。
实施例5乳膏剂称取油相十八醇20g，白凡士林22g，液体石蜡15g，容器加热到75-85℃融化，为油相；另取按实施例1制备的本发明化合物0.26g，用85℃左右热水200ml溶解，加入月桂醇硫酸钠2g，尼泊金乙酯0.2g，甘油1g，恒温80℃搅匀，为含药水相；将含药水相以细流状加入油相中，边加边搅拌至乳膏状，即得。
实施例6凝胶剂取Carbopol-940(丙烯酸聚合物)3g分散于70g50℃水中，放置溶胀后，用三乙醇胺调PH6.5-7.5，得凝胶；另取约85℃水10g将0.01g原料(实施例2制备的本发明化合物)溶解，与尼泊金乙酯0.8g，丙二醇15g，氮酮3g共同加入凝胶中，混合搅拌均匀即得。
序列表<110>杭州夏洋生物工程有限公司<120>一种化合物及其制备方法和在制药中的应用<160>1<210>1<211>1750<212>DNA<213>天然序列，来自于黑曲霉(Aspergillu niger)<400>1ctggttgatt ctgccagtag tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag 60tataagcact ttatactgtg aaactgcgaa tggctcatta aatcagttat cgtttatttg 120atagtacctt actacatgga tacctgtggt aattctagag ctaatacatg ctgaaaacct 180cgacttcgga aggggtgtat ttattagata aaaaaccaat gcccttcggg gctccttggt 240gaatcataat aacttaacga atcgcatggc cttgcgccgg cgatggttca ttcaaatttc 300tgccctatca actttcgatg gtaggatagt ggcctaccat ggtggcaacg ggtaacgggg 360aattagggtt cgattccgga gagggagcct gagaaacggc taccacatcc aaggaaggca 420gcaggcgcgc aaattaccca atcccgacac ggggaggtag tgacaataaa tactgatacg 480gggctctttt gggtctcgta attggaatga gtacaatcta aatcccttaa cgaggatcaa 540ttggagggca agtctggtgc cagcagccgc ggtaattcca gctccaatag cgtatattaa 600agttgttgca gttaaaaagc tcgtagttga accttgggtc tggctggccg gtccgcctca 660ccgcgagtac tggtccggct ggacctttcc ttctggggaa tctcatggcc ttcactggct 720gtggggggaa ccaggacttt tactgtgaaa aattagagtg ttcaaagcag gcctttgctc 780gaatacatta gcatgcatat agatacgacg tgcggttcta ttttgttggt ttctaggacg 840cgtatgatat aggatagtcg ggggcgtcag tattcagctg tcagaggtga aattctagat 900ttgctgaaga ctaactactg cgaaagcatt cgccaaggat gttttcatta atcagggaac 960gaaagttagg ggatcgaaga cgatcagata ccgtcgtagt cttaaccata aactatgccg 1020actagggatc ggacggtgtt tctattatga cccgttcggc accttacgag aaatcaaagt 1080ttttgggttc tggggggagt atggtcgcaa ggctgaaact taaagaaatt gacggaaggg 1140caccaccagg cgtggagcct gcggcttaat ttgactcaac acggggaaac tcaccaggtc 1200cagacaaaat aaggattgac agattgagag ctctttcttg atcttttgga tggtggtgca 1260tggccgttct tagttggtgg agtgatttgt ctgcttaatt gcgataacga acgagacctc 1320ggcccttaaa tagcccggtc cgcatttgcg ggccgctggc ttcttagggg gactatcggc 1380tcaagccgat ggaagtgcgc ggcaataaca ggtctgtgat gcccttagat gttctgggcc 1440gcacgcgcgc tacactgaca gggccagcga gtacatcacc ttggccgaga ggtctgggta 1500atcttgttaa accctgtcgt gctggggata gagcattgca attattgctc ttcaacgagg 1560aatgcctagt aggcacgagt catcagctcg tgccgattac gtccctgccc tttgtacaca 1620ccgcccgtcg ctactaccga ttgaatggct cggtgaggcc ttcggactgg ctcaggaggg 1680ttggcaacga ccccccagag ccggaaagtt ggtcaaaccc ggtcatttag aggaagtaaa 1740agtcgtaaca1750
权利要求
1.一种化合物，为2，3-二氨基-6-羟基-苯甲酸-2-乙基-己酯。
2.用于制备权利要求1所述化合物的菌株，其分类命名为黑曲霉HX839251(Aspergillus niger HX839251)，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNOM 206095。
3.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于该制备方法包括下列步骤a.发酵菌株采用保藏编号为CCTCC NOM 206095的菌株；b.菌株培养将发酵菌株接种在固体培养基上，25～30℃培养4～8天，收集菌株的孢子；将菌株的孢子接入种子培养基，150～300rpm，25～30℃，培养1～3天，得种子液；将种子液按发酵培养基体积1～20％的接种量接种于发酵培养基，150～300rpm，25～30℃发酵培养5～8天，收集发酵液；c.发酵产物提取发酵液中加入乙醇或乙酸乙酯浸泡12～48h，离心或过滤除去菌体，将上清或滤液浓缩至适量体积，适量乙酸乙酯萃取1～3次，萃取液浓缩即得发酵提取物；或者发酵液离心或过滤将菌体分离，菌体加适量乙醇或乙酸乙酯浸泡12～48h，得浸泡液；上清或滤液加适量乙酸乙酯萃取1～3次，得萃取液；将浸泡液离心或过滤除去菌体，与萃取液合并，真空浓缩即得发酵提取物；d.目标产物纯化发酵提取物上柱层析，用氯仿与甲醇混合溶液进行洗脱，收集洗脱液；洗脱液结晶纯化，即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤b中的培养基为培养基各组分在培养基中按重量体积比(g/ml)计，碳源0.5～20％，氮源0.5～10％，无机盐0-1％，其中固体培养基需加入1.5-4％的琼脂，其余为水。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征为培养基各组分在培养基中按重量体积比(g/ml)计，碳源2～8％，氮源0.5～6％，无机盐0-1％，其中固体培养基需加入1.5-4％的琼脂，其余为水。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征是所述的碳源选自淀粉水解糖、糖蜜、葡萄糖、蔗糖、淀粉类、土豆汁、麦芽汁、豆汁、土豆浸出粉、燕麦中的一种或几种；所述的氮源选自黄豆饼粉、玉米浆、蛋白胨、鱼胨、蚕蛹水解液、尿素、硫酸铵、酵母浸出物、黄豆粉、棉子粉、氨水、硝酸盐中的一种或几种；所述的无机盐选自氯化钠、氯化镁、氯化锰、氯化钾、氯化钙、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、硫酸锰中的一种或多种。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤d中柱层析采用硅胶G柱；结晶纯化采用甲醇或丙酮重结晶。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤d中氯仿与甲醇混合溶液中氯仿与甲醇的体积比为80-95％∶20-5％。
9.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物由治疗有效量的权利要求1所述化合物与辅料组成。
10.权利要求1所述的化合物在制备抗真菌药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种化合物及其制备方法和在制药中的应用。该化合物是2，3－二氨基－6－羟基－苯甲酸－2－乙基－己酯。该化合物可由保藏编号为CCTCC NOM 206095的菌株发酵制备得到，该化合物具有较好的抗真菌作用，可用于制备抗真菌药物。本发明制备方法成本低，获得的目标化合物纯度较高。
文档编号C12P13/00GK1951907SQ20061009678
公开日2007年4月25日 申请日期2006年10月16日 优先权日2006年10月16日
发明者夏国兴, 陈有为, 张宇楷, 王欣, 陈晓霞, 朱健, 李邦良 申请人:杭州夏洋生物工程有限公司