专利名称：结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条及试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及结核分枝杆菌耐药的诊断试剂，尤其涉及一种结核分枝 杆菌耐药突变基因检测膜条及试剂盒。
背景技术：
结核病是严重危害人类健康的慢性传染病。近10余年来，由于艾
滋病的流行，移民和流动人口的增加，以及不少国家和地区对结核病控
制的忽视等因素，造成多种耐药MTB的增多，全球结核病形势急剧恶化， 无论发达国家或发展中国家，结核病病人数每年都在增加。1993年，世 界卫生组织(WHO)宣布"全球结核病处于紧急状态"，把结核病列为重 点控制的传染病之一，1998年，WH0再次指出"遏制结核病行动刻不容 緩"。
目前，全球已有20亿人感染结核杆菌，活动性肺结核病人达2000 万，每年新发病人达800-1000万，新发成年结核病人中艾滋病感染者 占12%,新发病例中多耐药病人占3. 2%。每年有300万人死于结核病。
我国是结核病高负担国家之一，结核病病人数居世界第二位，仅次 于印度。据2000年全国结核病流行病学抽样调查显示，我国结核病疫 情有高耐药率的特点肺结核病人MTB初始耐药率为16. 8°/ ，继发耐药 率为46. 5%，在全国200万菌阳肺结核病人中，有耐药病人55. 5万，即 全国有四分之一以上菌阳病人为耐药病人。
近年来，由于抗生素类药物的滥用和不合理的治疗方案导致结核病 多重耐药林的出现和传播，给临床上治疗结核病带来极大的困扰。利福 平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素是临床上最常见的一线抗结核药物，这 四种药物的耐药性检测对指导临床上选择有效的抗结核药物，保证治疗 效果及减少耐药菌林的扩散有极其重要的意义。研究表明当rpoB基因核心区域-利福平耐药决定区(RRDR)发生突变时，利福平不能有效的 与RNA聚合酶(3亚基结合，使得细菌对利福平产生耐受性；而异烟肼耐 药的发生主要由katG或inhA基因突变引起，乙胺丁醇耐药主要由编码 糖基转移酶(催化阿拉伯糖聚合到阿拉伯-半乳聚糖)的embB基因突变 引起，链霉素耐药主要由编码核糖体蛋白S12 (rpsL)基因突变引起。 目前结核菌的常规药敏检测主要采用药敏培养法，不仅操作复杂耗时长 (需3至4周)，且培养困难，容易产生假阴性，容易造成误判和延误 病人的最佳治疗时间。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种可一次检测出结核分 枝杆菌对四种抗结核药物的耐受性，且检测时间短，结果准确可信的 结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条。
一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条，包括一基底，和固定于 所述基底上的特异性寡核苷酸探针，所述特异性寡核苷酸探针包括
1) 用于检测利福平耐药突变基因rpoB的特异性寡核苷酸探针，其 石成基序列如SEQ ID NO: 1 - 6所示；
2) 用于检测异烟肼耐药突变基因KatG的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 7所示；
3) 用于检测异烟肼耐药突变基因inhA的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 8所示;
4) 用于检测链霉素耐药突变基因rpsL的特异性寡核苷S吏探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 9-10所示；
5) 用于检测乙胺丁醇耐药突变基因embB的特异性寡核苷酸探针， 其碱基序列如SEQ ID NO: 11-13所示；
6) rpoB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 14-18所示;
7) KatG突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 19所示;8) inhA突变基因所对应的正常对照特异性寡核普酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 20所示；
9) rpsL突变基因所对应的正常对照特异性寡核苦酸4冢针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 21-22所示；
10 ) embB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苦酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 23所示；
上述所有特异性寡核苦酸探针序列可由其碱基互补序列替换。 所述基底为尼龙膜。
本发明的第二个目的在于提供一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测 试剂盒，所述试剂盒包括
1) 用于检测利福平耐药突变基因rpoB的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 1 - 6所示;
2) 用于检测异烟肼耐药突变基因KatG的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 7所示;
3) 用于检测异烟肼耐药突变基因inhA的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 8所示；
4) 用于检测链霉素耐药突变基因rpsL的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 9-10所示；
5 )用于检测乙胺丁醇耐药突变基因embB的特异性寡核苷酸探针， 其碱基序列如SEQ ID NO: 11-13所示;
6) rpoB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苦酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 14 - 18所示;
7) KatG突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 19所示;
8) inhA突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 20所示;
9) rpsL突变基因所对应的正常对照特异性寡核香酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 21-22所示;
10) embB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基
7序列如SEQ ID NO: 23所示;
上述所有序列可由其碱基互补序列替换；
11) 特异性扩增rpoB基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 24 -25所示；
12) 特异性扩增KatG基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 26 -27所示;
13) 特异性扩增inhA基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 28 -29所示；
14) 特异性扩增rpsL基因的引物，其石咸基序列如SEQ ID NO: 30 —31所示；
15) 特异性扩增embB基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 32 -33所示。
所述寡核苦酸探针固定于基底上。 所述寡核苷酸探针固定于尼龙膜上。
本发明根据结核分枝杆菌五种不同耐药基因rpoB、katG、 inhA、embB 和rpsL的突变位点来设计特异的扩增引物，根据不同的耐药基因的相 应突变位点设计相应的探针，利用杂交进行耐药性检测。
本发明所述结核分枝杆菌耐药突变基因^f企测试剂盒采用PCR结合反 向DNA杂交芯片检测技术，可同时检测rpoB、 katG、 inhA、 embB、 rpsL 五种基因上多种常见的耐药突变类型，适用于结核杆菌对利福平、异烟 肼、乙胺丁醇和链霉素等抗结核药物的耐药性诊断，具有检测快速、准 确及通量大等优点。为有效地进行结核分枝菌快速药敏检测，耐药结核 病的治疗、控制提供重要的技术手段。
图1痰样A^r测结果图。 图2痰样B4企测结果图。 图3痰样C检测结果图。附图标号说明
Nl-N5、 D516V、 D516G、 H526Y、 H526D、 S531L、 S531W:是利福平 耐药相关基因rpoB检测探针，其中N代表该位点为野生型；
Nl探针覆盖的位点有511和513及附近区域位点，即若正常位点中 只有N1位点不显色，则表明有511、 513或附近区域位点发生了突变；
N2探针覆盖的位点有516及附近区域位点，即若正常位点中只有 N2位点不显色，则表明有516或附近区域位点发生了突变；
N3探针覆盖的位点有522、 523及附近区域位点，即若正常位点中 只有N3位点不显色，则表明有522、 523或附近区域位点发生了突变；
N4 ^:针覆盖的位点有526、 529及附近区域位点，即若正常位点中 只有N4位点不显色，则表明有526、 529或附近区域位点发生了突变；
N5探针覆盖的位点有531、 533及附近区域位点，即若正常位点中 只有N4位点不显色，则表明有531、 533或附近区域位点发生了突变；
D516V代表rpoB基因上第516个氨基酸的变化，天冬氨酸突变成缬 氨酸；
D516G代表rpoB基因上第516个氨基酸的变化，天冬氨酸突变成甘 氨酸；
H526Y代表rpoB基因上第526个氨基酸的变化，组氨酸突变成酪氨
酸；
H526D代表rpoB基因上第526个氨基酸的变化，组氨酸突变成天冬 氨酸；
S531L代表rpoB基因上第531个氨基酸的变化，丝氨酸突变成亮氨
酸；
S531W代表rpoB基因上第531个氨基酸的变化，丝氨酸突变成色氨
酸；
315N和315M:是异烟肼耐药相关基因katG的检测探针，其中N代 表该位点为野生型；
315M为S315T或S315N;
S315T代表katG基因上第315个氨基酸的变化，丝氨酸突变成苏氨酸；
S315N代表katG基因上第315个氨基酸的变化，丝氨酸突变成天冬 氨酸；
-15N和-15M:是异烟肼耐药相关基因inhA的检测探针，其中N代 表该位点为野生型，M代表该位点为突变型；
43N、 88N代表链霉素耐药相关基因rpsL的43和88密码子位点为 野生型；
43M、 8脂代表链霉素耐药相关基因rpsL的相应位点发生突变； 306N代表乙胺丁醇耐药相关基因embB的306位点为野生型； 306M1、 306M2、 306M3代表乙胺丁醇embB基因位点发生不同类型的 突变。
具体实施例方式
实施例1
一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条，包括一尼龙膜，和固定 于所述尼龙膜上的特异性寡核苦酸探针，所述特异性寡核苷酸探针包 括'.
1) 用于检测利福平耐药突变基因rpoB的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 1 - 6所示；
2) 用于检测异烟肼耐药突变基因KatG的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 7所示;
3) 用于检测异烟肼耐药突变基因inhA的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 8所示；
4) 用于检测链霉素耐药突变基因rpsL的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 9-IO所示；
5) 用于检测乙胺丁醇耐药突变基因embB的特异性寡核苷酸探针， 其碱基序列如SEQ ID NO: 11-13所示;
6) rpoB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其名威基 序列如SEQ ID NO: 14 - 18所示；
107) KatG突变基因所对应的正常对照特异性寡核苦酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 19所示；
8) inhA突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 20所示；
9) rpsL突变基因所对应的正常对照特异性寡核苦酸〗冢针，其》成基 序列如SEQ ID NO: 21-22所示;
10) embB突变基因所对应的正常对照特异性寡核普酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 23所示；
探针固定方法将探针和1M NHS、 1M DEC混合处理，利用DNA点 样仪在芯片制作程序的控制下进行点样，点样完毕后将探针可通过与尼 龙膜表面经处理而含有的活性基团(氨基、巯基)形成共价键的方法固 定于尼龙膜上。
实施例2
一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测试剂盒，所述试剂盒包括固
定有特异性寡核苷酸探针尼龙膜和
特异性扩增rpoB基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 24-25
所示；
特异性扩增KatG基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 26-27 所示；
特异性扩增inhA基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 28-29 所示；
特异性扩增rpsL基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 30-31 所示；
特异性扩增embB基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 32-33 所示；
尼龙膜条上固定的特异性寡核苷酸探针包括 用于检测利福平耐药突变基因rpoB的特异性寡核苷酸探针，其碱 基序列如SEQ ID NO: 1 - 6所示;
用于检测异烟肼耐药突变基因KatG的特异性寡核苷酸探针，其碱
ii基序列如SEQ ID NO: 7所示；
用于检测异烟肼耐药突变基因inhA的特异性寡核香酸探针，其碱 基序列如SEQ ID NO: 8所示；
用于检测链霉素耐药突变基因rpsL的特异性寡核苷酸探针，其碱 基序列如SEQ ID NO: 9-10所示；
用于检测乙胺丁醇耐药突变基因embB的特异性寡核香酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 11-13所示；
rpoB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列 如SEQ ID NO: 14-18所示；
KatG突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列 如SEQ ID NO: 19所示；
inhA突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列 如SEQ ID NO: 20所示；
rpsL突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列 如SEQ ID NO: 21-22所示；
embB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苦酸探针，其碱基序列 如SEQ ID NO: 23所示。
实施例3
用实施例2所述检测试剂盒对临床样品进行检测，
1、 临床样本获取痰样 留取深咳痰标本3-5ml于消毒的玻璃容器中。
2、 样本处理
1) 收集病人痰样，加入等量的化痰试剂(4%的NaOH)，化痰处理 15~30分钟，直至痰液完全化开。
2) 转移1. 2mL痰样消化液到1. 5mL离心管中，13000rpm离心5分 钟，弃上清。
3) 加入lmL无菌lxPBS，混匀。13000rpm离心5分钟，弃上清， 重复一次。
4 )加入lmL 10mM Tris溶液，混合悬浮样品，13000rpm离心5分钟，弃上清。
5 )加入50|liL裂解液，打散沉淀块，于沸水浴中煮沸10分钟(注 意离心管盖可能会爆开，小心污染)，13000rpm离心5分钟，上清液即 可作为PCR模板。
3、 PCR扩增
耳又PCR反应管，在管壁上估夂好标记，于5000rpm离心2秒，而后分 别加入已提取的待测样品DNA 5|liL，按PCR常规标准加入反应緩沖液(含 MgCl2、 dNTP、引物、无菌双蒸水，反应总体系为25pL。按以下条件进 行扩增50°C 15min; 95°C 10min; 94。C45s, 58。C45s, 72。C45s， 35 cycles; 72°C 10min。
4、 芯片杂交显色
1)取15mL塑料离心管，标明编号，放入同样标有编号的膜条(应 在膜条的一角用铅笔标记)，加入A1液7mL及PCR产物，将盖拧上，但 不要过紧。将塑料管放入沸水中加热10分钟(确保杂交液液面完全位 于水浴液面之下)，取出拧紧盖子，放入杂交箱59。C杂交1.5小时。 2 )取50mL塑料管，加入40mLB液于杂交箱或水浴箱中进行预热至 59°C。
3)取出膜条，移至装有预热B液的50 mL管中，于59。C轻摇洗涤 15分钟(管40mL溶液，最多可同时洗涤4张膜)。
4 ) Al液配制1: 2000的POD溶液(单做两张膜只需4 ^LPOD母液， 配制成8mL使用液，做四张膜可用6 fiLPOD母液，配制成12mL使用液)， 室温轻摇浸泡膜条30分钟。
5 )配制POD溶液。用Al液室温轻摇洗两次，每次5分钟。用C液 室温洗膜1-2分钟。
6)制显色液(显色液需新鲜配制19mL 0. 1M柠檬酸钠，1 mL TMB , 10pL 3% H202 )将膜条浸泡于显色液中避光显色IO分钟左右即可见斑点 显现，.若显色较弱可适当延长显色时间，显色完毕将膜条浸泡在水中清 洗，最后取出膜条于4。C保存。
5、 结果判定由斑点显现的位置即可断定结核杆菌耐药类型和耐药发生的基因 突变位点。
图1显示痰样A检测结果利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇都敏感。
图2显示痰样B4企测结果利福平(S531W)、异烟肼(315M)、链 霉素(88M)、乙胺丁醇(306M1)都耐药。
图3显示痰样C^r测结果利福平耐药(S531L)、异烟肼、链霉素、 乙胺丁醇都^t感。SEQUENCE LISTING
亚能生物技术(深圳)有限公司
<120>结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条及试剂盒
<130> P10948
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< 170> Patentln version 3.
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1
19
DNA
人工序列
<400> 1
catgggccag aacaacccg
19
<210> 2
<211> 19
<212> DNA <213>人工序列
<400> 2
catggtccag aacaacccg 19
<210> 3
<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
<400> 3
gacgcacaag cgccgact 18
<210> 4
<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
15<400> 4
gactcacaag cgccgact 18
<210> 5
<211> 16
<212> DNA <213>人工序列
<400> 5 tgtgggcgct ggggcc
<20> 6
<211> 16
<212> DNA <213>人工序列
<400> 6
tgtaggcgct ggggcc 16
<210> 7 <211>8
<212> DNA <213>人工序列
<400> 7
cgcgatcacc accggcat 18
<210> 8
<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
<400> 8
cggcgagaag ataggttg 18
<210> 9
<211> 19
<212> DNA <213>人工序列<400> 9
tccgatgaag ccgaactcg
<210> 10
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<212> DNA <213>人工序列
<400> 10 cggccgggtg atggacct
<210> 11
<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
<400> 11 cctgggcatc gcccgagt
<210> 12 <21>8
<212> DNA <213>人工序列
<400>2 cctgggcata gcccgagt
<210> 13
<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
<400> 13 cctgggcatt gcccgagt
<210> 14 <211> 22 <212> DNA
19
18
18
18
18<213>人工序列 <400> 14
gcaccagcca gctgagccaa tt
<20> 15
<211> 19
<212> DNA <213>人工序列
<400> 15 catggaccag aacaacccg
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<212> DNA <213>人工序列
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<210> 18
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22
19
18
18
16
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DNA
人工序列
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cgcgatcacc agcggcat
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<212> DNA <213>人工序列
<400> 20
cggcgagacg ataggttg 18
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<211> 19
<212> DNA <213>人工序列
<400> 21
tccgaagaag ccgaactcg 19
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<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
<400> 22
cggccgggtg aaggacct 18
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<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
<400> 23
cctgggcatg gcccgagt 18 <210> 24<211> 20 <212> DNA <213>人工序列
<400> 24
tggaggcgat cacaccgcag 20
<210> 25
<211> 19
<212> DNA <213>人工序列
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cgatcgggca catccggcc 19
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<212> DNA <213>人工序列
<400> 26
atcgtcggcg gtcacacttt c 21
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<211> 20
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<400> 27
cgtccttggc ggtagtattg 20
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<211> 20
<212> DNA <213>人工序列
<400> 28
ctcgctgccc ataaagggat 20<210> 29
<211> 19
<212> DNA <213>人工序列
<400> 29
tccggtaacc aggactgaa 19
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<211> 18
<212> DNA <213>人工序列
<400> 30
cgtggtgtat gcacccgc 18
<210> 31
<211> 18
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<400> 31
ggcatcagcc cttctcct 1 g
<210> 32
<211> 21
<212> DNA <213>人工序列
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tgaccgacgc cgtggtgata t 21
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<211> 21
<212> DNA <213>人工序列
<400> 33
ctgacatggg tcatcagcgc c 21
2权利要求
1、一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条，包括一基底，和固定于所述基底上的特异性寡核苷酸探针，其特征在于所述特异性寡核苷酸探针包括1)用于检测利福平耐药突变基因rpoB的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO1-6所示；2)用于检测异烟肼耐药突变基因KatG的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO7所示；3)用于检测异烟肼耐药突变基因inhA的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO8所示；4)用于检测链霉素耐药突变基因rpsL的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO9-10所示；5)用于检测乙胺丁醇耐药突变基因embB的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO11-13所示；6)rpoB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO14-18所示；7)KatG突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO19所示；8)inhA突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO20所示；9)rpsL突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO21-22所示；10)embB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO23所示；上述所有序列可由其碱基互补序列替换。
2、 根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜 条，其特征在于所述基底为尼龙膜。
3、 一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括1) 用于检测利福平耐药突变基因rpoB的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 1-6所示；2) 用于检测异烟肼耐药突变基因KatG的特异性寡核苷酸探针，其 石威基序列如SEQ ID NO: 7所示；3) 用于检测异烟肼耐药突变基因inhA的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 8所示;4) 用于检测链霉素耐药突变基因rpsL的特异性寡核苷酸探针，其 碱基序列如SEQ ID NO: 9-IO所示；5)用于检测乙胺丁醇耐药突变基因embB的特异性寡核苷酸探针， 其石威基序列如SEQ ID NO: 11-13所示；6) rpoB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 14 - 18所示;7) KatG突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 19所示;8) inhA突变基因所对应的正常对照特异性寡核普酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 20所示;9) rpsL突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 21-22所示；10) embB突变基因所对应的正常对照特异性寡核苷酸探针，其碱基 序列如SEQ ID NO: 23所示;上述所有特异性寡核苷酸探针序列可由其碱基互补序列替换；11) 特异性扩增rpoB基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 24 -25所示；12) 特异性扩增KatG基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 26 —27所示；13) 特异性扩增inhA基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 28 -29所示；14) 特异性扩增rpsL基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 30—31所示；15)特异性扩增embB基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO: 32 -33所示。
4、 根据权利要求3所述的一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测试 剂盒，其特征在于所述寡核苷酸探针固定于基底上。
5、 根据权利要求3所述的一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测试 剂盒，其特征在于所述寡核苷酸纟果针固定于尼龙膜上。
全文摘要
本发明涉及结核分枝杆菌耐药的诊断试剂，尤其涉及一种结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条及试剂盒。结核分枝杆菌耐药突变基因检测膜条，用于检测结核分支杆菌耐药突变基因的特异性寡核苷酸探针固定于基底上。结核分枝杆菌耐药突变基因检测试剂盒，包括固定有用于检测结核分支杆菌耐药突变基因的特异性寡核苷酸探针的膜条和特异性扩增结核分枝杆菌耐药相关基因的引物。本发明所述结核分枝杆菌耐药突变基因检测试剂盒可同时检测rpoB、katG、inhA、embB、rpsL五种基因上多种常见的耐药突变类型，适用于结核杆菌对利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素等抗结核药物的耐药性诊断，具有检测快速、准确及通量大等优点。
文档编号C12Q1/68GK101545011SQ20091010712
公开日2009年9月30日 申请日期2009年4月22日 优先权日2009年4月22日
发明者维 任, 廖生赟, 邹耀东 申请人:亚能生物技术(深圳)有限公司