专利名称：用于测量低密度脂蛋白胆固醇的方法
技术领域：
本发明涉及测量样本中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的方法，其中具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物特异地和非LDL(VLDL或者HDL)形成复合物。
背景技术：
除了和白蛋白结合的游离脂肪酸外，存在于血液的脂质掺入脂蛋白的结构中，并且它们以乳糜微粒(CHM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白 (HDL)等等的形式存在。胆固醇特别地分布于VLDL、LDL和HDL。已知LDL起运输胆固醇的作用，并且高水平的LDL促进动脉硬化。已知血液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的测量成为动脉硬化发生和进行的指示物。Burstein M 等人(Rapid Method for the Isolation of Lipoproteins from Human Serum by Precipitation with Polyanions, J. Lipid Researchll :583，1970)描述， 主要地通过使用聚阴离子化合物使除了 HDL外的脂蛋白特异凝集。然而，该文献描述的聚阴离子化合物特异地和非LDL(VLDL或者HDL)形成复合物是困难的。CC Heuck 禾口 G Schlierf(Beta-lipoprotein cholesterol quantitation with polycations，Clin Chem 1977 23 =536-540)描述通过使用聚乙烯亚胺和阳离子交换树脂排除VLDL和HDL，从而定量脂蛋白胆固醇。然而，该文献描述的方法难以解决其要求孵育 15分钟或更长，以及其需要两类试剂的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种高选择性测量体液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL)的方法。作为为实现上述目的而进行的深入研究的结果，本发明的发明人发现具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物，其能够和非LDL形成复合物。使用本发明的化合物，使得单一的化合物和非LDL(特别地，VLDL和HDL)在短时间形成复合物成为可能。因此，使得测量包含于LDL的成分(例如胆固醇、中性脂肪和脱辅基蛋白)成为可能。本发明基于这些发现而完成。本发明提供减少或者除去样本中极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL) 的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物处理含有极低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的样本。本发明还提供测量体液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物处理体液，并使用(a)胆固醇酯酶和(b)胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。优选地，使用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物，其和脂蛋白中的极低密度脂蛋白(VLDL)形成复合物。优选地，使用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物，其和脂蛋白中的高密度脂蛋白(HDL)形成复合物。优选地，所述具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物是聚(烯丙胺)、聚(烯丙胺)盐酸盐、烯丙胺盐酸盐共聚物、二烯丙胺盐酸盐聚合物和二烯丙胺盐酸盐共聚物中的任何，条件是根据需要任选修饰烯丙胺和二烯丙胺。优选地，所述烯丙胺盐酸盐共聚物和二烯丙胺盐酸盐共聚物分别是烯丙胺盐酸盐和-S02-的共聚物以及二烯丙胺盐酸盐和-S02-的共聚物。优选地，所述具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物是聚(烯丙胺)或者二烯丙胺盐酸盐和-S02-的共聚物。优选地，所述低密度脂蛋白胆固醇通过使得过氧化物酶和色原体作用于从低密度脂蛋白胆固醇产生的过氧化氢以实施显色反应而测量，所述过氧化氢是由于胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的作用而从所述低密度脂蛋白胆固醇产生的。本发明还提供用于测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的试剂，其包括(a)胆固醇酯酶、(b)胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶和(c)具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物。本发明还提供用于测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的试剂盒，其包括(a)胆固醇酯酶、(b)胆固醇氧化酶、(c)过氧化物酶、(d)色原体和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物。本发明还提供用于测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的干燥分析元件，其包括 (a)胆固醇酯酶、(b)胆固醇氧化酶、(c)过氧化物酶、(d)色原体和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物。根据本发明，可以仅使用单一化合物在短时间内高选择性地测量低密度脂蛋白胆固醇。
图1显示实施例1中进行的琼脂糖凝胶电泳(胆固醇染色的结果)。图2显示对比例1中进行的琼脂糖凝胶电泳(胆固醇染色的结果)。图3显示实施例2中LDL-C测量的结果。图4显示对比例2中LDL-C测量的结果。
具体实施例方式在下文中，本发明的实施方案将被详细描述。在本发明说明书中，以％表达的浓度表示重量百分比浓度。本发明涉及减少或者除去样本中极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL) 的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物处理含有极低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的样本。此外，本发明涉及测量体液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物处理体液，并使用(a)胆固醇酯酶和(b)胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。血液、血清、血浆、尿等等可以用作体液。这样的血液、血清、血浆或者尿可以直接用作体液样品。另外，也可以使用已经适当地预处理的血液、血清、血浆或者尿。构成本发明所用的具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物的单体的实施例包括烯丙胺(伯胺)、二烯丙胺(仲胺)、烷基二烯丙胺(叔胺)和二烷基二烯丙胺(季胺)。 胺既可以是游离形式，也可以是盐，如盐酸盐、乙酸盐或硫酸盐。氨基基团可以由烷基基团 (例如甲基基团、乙烷基团等)、烷氧羰基基团(例如甲氧羰基基团)或其它基团保护。多胺可以是多胺的均聚物、或多胺和二氧化硫、顺丁烯二酸等等形成的共聚物。所述具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物优选是聚(烯丙胺)、聚(烯丙胺)盐酸盐、烯丙胺盐酸盐共聚物、二烯丙胺盐酸盐聚合物和二烯丙胺盐酸盐共聚物中的任何，条件是根据需要任选修饰烯丙胺和二烯丙胺。应当指出，本发明中使用的术语“盐酸盐聚合物或者共聚物”，不是指单体盐酸盐聚合形成的产物，而是指单体聚合后形成的聚合物的胺的部分是盐酸盐，与生产方法无关。具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物的分子量优选是从300至200000，更优选是从1000至50000，以及进一步优选从1000至10000。本发明使用的具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物的具体实施例包括 Nitto Boseki Co.，LTD的PAA系列和PAS系列。可以用于本发明的Nitto Boseki Co., LTD的PAA系列和PAS系列聚合物化合物的性质将在下面描述。然而，可以用于本发明的化合物的类型并不受限于此。表 权利要求
1.一种用于减少或除去样本中极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)的方法， 其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物处理含有极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的样本。
2.一种测量体液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物处理体液，以及使用(a)胆固醇酯酶和(b)胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶测量低密度脂蛋白胆固醇(LHL-C)。
3.根据权利要求2的方法，其中使用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物，其和脂蛋白中极低密度脂蛋白(VLDL)形成复合物。
4.根据权利要求2的方法，其中使用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物，其和脂蛋白中高密度脂蛋白(HDL)形成复合物。
5.根据权利要求2的方法，其中所述具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物是聚 (烯丙胺)、聚(烯丙胺)盐酸盐、烯丙胺盐酸盐共聚物、二烯丙胺盐酸盐聚合物和二烯丙胺盐酸盐共聚物中的任何，条件是根据需要任选修饰烯丙胺和二烯丙胺。
6.根据权利要求5的方法，其中所述烯丙胺盐酸盐共聚物和二烯丙胺盐酸盐共聚物分别是烯丙胺盐酸盐和-S02-的共聚物以及二烯丙胺盐酸盐和-S02-的共聚物。
7.根据权利要求4的方法，其中所述具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物是聚 (烯丙胺)或者二烯丙胺盐酸盐和-S02-的共聚物。
8.根据权利要求2的方法，其中所述低密度脂蛋白胆固醇通过使得过氧化物酶和色原体作用于从低密度脂蛋白胆固醇产生的过氧化氢以实施显色反应而测量，所述过氧化氢是由于胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的作用而从所述低密度脂蛋白胆固醇产生的。
9.用于测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的试剂，其包括(a)胆固醇酯酶、(b)胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶和(c)具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物。
10.用于测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的试剂盒，其包括(a)胆固醇酯酶、(b)胆固醇氧化酶、(c)过氧化物酶、(d)色原体和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物。
11.用于测量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的干燥分析元件，其包括(a)胆固醇酯酶、 (b)胆固醇氧化酶、(c)过氧化物酶、(d)色原体和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物。
全文摘要
本发明提供用于测量低密度脂蛋白胆固醇的方法。具体地说，本发明提供能够高选择性地测量体液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺单元的聚合物化合物处理体液，以及使用(a)胆固醇酯酶和(b)胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶测量低密度脂蛋白胆固醇(LHL-C)。
文档编号C12Q1/60GK102162005SQ20111004511
公开日2011年8月24日 申请日期2011年2月22日 优先权日2010年2月23日
发明者M·朱马维德, 猪股弘子 申请人:富士胶片株式会社