专利名称：结核分枝杆菌固、液培养基及其使用方法
技术领域：
本发明涉及一种在医学检验领域中用于结核分枝杆菌增菌培养的结核分枝杆菌固、液培养基及其使用方法。
背景技术：
结核分枝杆菌的增菌培养是结核分枝杆菌医学检验过程中的重要步骤。现有的结核分枝杆菌医学检验中，结核分枝杆菌增菌培养所用的时间较长。原因有二一是所用的培养基，不管是液体培养基还是固体培养基，结核分枝杆菌的生长和繁殖速度都不够理想。因为现有的适合结核分枝杆菌增菌培养的液体培养基和固体培养基如7H9培养基和罗氏培养基中都含有结核分枝杆菌生长和繁殖所需的营养成分，液体培养基中的营养成分结核分枝杆菌容易吸收，但固体培养基中的营养成分需要不断地从其中扩散到其表面才能被结核分枝杆菌吸收，这样，培养基中的营养成分提供给结核分枝杆菌的速度较慢，影响结核分枝杆菌的生长和繁殖速度，因此，结核分枝杆菌在液体培养基中生长和繁殖速度较在固体培养基表面上生长和繁殖速度快，但液体培养基中所含的营养成分与固体培养基中所含的营养成分不完全相同，有些具有促进结核分枝杆菌生长和繁殖的营养物质可以加入到固体培养基中但无法加入到液体培养基中，例如卵黄、马铃薯淀粉对于结核分枝杆菌生长和繁殖有很好的促进作用，但卵黄、马铃薯淀粉如果加入到液体培养基中，会使液体培养基变得混浊而无法观察，因而卵黄、马铃薯淀粉等只适合加入到固体培养基例如罗氏培养基中， 这就使得结核分枝杆菌不管是在液体培养基中培养还是在固体培养基表面上培养，其生长和繁殖速度都不理想。二是初始菌量小。利用现有的培养基和现有的方法增菌培养，不管是用固体培养基还是用液体培养基，都只利用少部份已经浓集的结核分枝杆菌标本进行分离和增菌培养，这样，初始菌量小，利用小的初始菌量通过增菌培养达到理想的菌量，所需的时间较长。综上所述，要想达到试验所需的理想菌量，利用现有的培养基和方法增菌培养所用的时间较长，在整个试验过程中，增菌培养所用时间占的比重较大。例如现有的结核分枝杆菌药敏试验，整个试验过程一般可分为标本前处理、增菌或分离培养和药敏检验三个阶段，增菌或分离培养阶段所需的时间大约1个月左右，占整个药敏试验所需时间的50%及以上。
发明内容
本发明的目的是提供一种结核分枝杆菌生长和繁殖速度快，从而减少增菌培养时间、减少培养物污染的结核分枝杆菌固、液培养基；另一个目的是提供一种增菌培养的初始菌量大，从而进一步减少增菌培养时间、减少培养物污染的结核分枝杆菌固、液培养基使用方法。为实现上述目的，本发明结核分枝杆菌固、液培养基，由适合结核分枝杆菌增菌培养的固体培养基和适合结核分枝杆菌增菌培养的液体培养基混合组成，混合组成后的结核分枝杆菌固、液培养基中的固体培养基为固态，液体培养基为液态。
所述的结核分枝杆菌固、液培养基，其固体培养基为罗氏培养基，液体培养基为 7H9培养基。所述的结核分枝杆菌固、液培养基，固体培养基与液体培养基的体积比为 1:0. 5—1. 5。所述的结核分枝杆菌固、液培养基，装在培养容器中的固体培养基，其上表面为斜 所述的结核分枝杆菌固、液培养基，装在培养容器中的固体培养基，其上表面为斜所述的结核分枝杆菌固、液培养基的使用方法，将固体培养基装在培养容器中，向液体培养基中加入经过标本前处理的结核分枝杆菌标本后，再将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中并按常规的要求进行增菌培养。所述的结核分枝杆菌固、液培养基的使用方法，将固体培养基装在培养容器中，将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中，再向培养容器中加入经过标本前处理的结核分枝杆菌标本并按常规的要求进行增菌培养。所述的结核分枝杆菌固、液培养基的使用方法，对采用过滤方法浓集结核分枝杆菌标本的，结核分枝杆菌标本粘附在过滤膜上，将固体培养基装在培养容器中，将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中，再将粘附有结核分枝杆菌标本的过滤膜放入培养容器中并按常规的要求进行增菌培养。因为本发明结核分枝杆菌固、液培养基由适合结核分枝杆菌增菌培养的固体培养基和适合结核分枝杆菌增菌培养的液体培养基混合组成，混合组成后的结核分枝杆菌固、 液培养基中的固体培养基为固态，液体培养基为液态，结核分枝杆菌在液体培养基中培养， 在对结核分枝杆菌增菌培养的过程中，一是增加和补充液体培养基中的营养成分。结核分枝杆菌在生长和繁殖的过程中会消耗营养物质，使液体培养基中的营养物质减少，本发明中固体培养基中的营养物质会从固体培养基中渗出并溶入到液体培养基中，不断增加和补充液体培养基中被消耗的营养成分，从而保证液体培养基中营养成分的浓度，保证结核分枝杆菌生长和繁殖的需要；二是增加现有液体培养基中无法加入的营养成分。有一些只能加入到固体培养基中但又具有促进结核分枝杆菌生长和繁殖的营养物质，例如卵黄、马铃薯淀粉等可以加入到本发明中的固体培养基中，其中能促进结核分枝杆菌生长和繁殖的成分会从固体培养基中渗出并溶入到液体培养基中，从而加速结核分枝杆菌的生长和繁殖。因为本发明结核分枝杆菌固、液培养基，其使用方法是将固体培养基装在培养容器中，将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中，将经过标本前处理的结核分枝杆菌标本加入到本发明中的液体培养基中，在加入适当的对杂菌有抑制作用的杂菌抑菌剂后，可以将已经浓集的结核分枝杆菌标本都放入本发明培养基中进行增菌培养，因此，本发明培养基可以在初始菌量很大的条件下进行增菌培养。综上所述，利用本发明结核分枝杆菌固、液培养基及其使用方法增菌培养结核分枝杆菌，结核分枝杆菌生长和繁殖速度快，且可以采用大初始菌量，因而减少了增菌培养的时间；由于减少了培增菌培养的时间，从而减少了培养物被污染的机会。经发明人反复试验证明，利用本发明培养结核分枝杆菌，一般情况下3—6天就可以达到结核分枝杆菌药敏试验所需的理想菌量，完成增菌，且菌体集落形成粗壮的条索状，更有利于后续的试验和观
4察。
下面结合附图和实施例对本发明结核分枝杆菌固、液培养基作进一步说明。附图所示为本发明结核分枝杆菌固、液培养基装在培养容器中的剖视图示意图。1、培养容器，2、固体培养基，3、液体培养基。
具体实施例方式如图所示，在培养容器(1)中装有固体培养基(2)，其上表面为斜面，固体培养基 (2)可以选用罗氏培养基，在固体培养基(2)上表面的培养容器(1)中装有液体培养基(3)， 液体培养基(3)可以选用7H9培养基，固体培养基(2)和液体培养基(3)组成本发明结核分枝杆菌固、液培养基。在本发明结核分枝杆菌固、液培养基中适当加入对杂菌有抑制作用的杂菌抑菌剂。下面给出本发明用于结核分枝杆菌药敏试验的实施例 1、将患者晨痰标本留取5ML用4%氢氧化钠消化；
2、用过滤夹层杯的方法过滤浓集标本，绝大部分结核分枝杆菌标本粘附在过滤膜上；
3、在培养容器中装有罗氏培养基和7H9培养基，罗氏培养基的上表面为斜面，罗氏培养基和7H9液体培养基的体积比为1:0. 8，在标准的7H9培养基中增加对杂菌有抑制作用的杂菌抑菌剂，将粘附有结核分枝杆菌的过滤膜放入到7H9培养基中；
4、放置在37°C的培养箱中增菌培养3—6天；
5、将含有增菌后的结核分枝杆菌的7H9培养基倒入呈液态的琼脂培养基中并混勻；
6、将上述呈液态的琼脂培养基倒入培养盒中，培养盒可以设计成由盒体和盒盖组成， 在凝固成稳定的凝胶状后，在其上表面设定的位置上贴上欲测药物纸片；
7、盖上盒盖，放置在37°C的培养箱中增菌培养5—7天，如果药物对结核分枝杆菌有抑制作用，则会在贴有药物纸片的周围形成抑菌圈；
8、根据抑菌圈的大小判断药物对结核分枝杆菌的作用效果。
权利要求
1.一种结核分枝杆菌固、液培养基，其特征是由适合结核分枝杆菌增菌培养的固体培养基和适合结核分枝杆菌增菌培养的液体培养基混合组成，混合组成后的结核分枝杆菌固、液培养基中的固体培养基为固态，液体培养基为液态。
2.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌固、液培养基，其特征是固体培养基为罗氏培养基，液体培养基为7H9培养基。
3.根据权利要求1或2所述的结核分枝杆菌固、液培养基，其特征是固体培养基与液体培养基的体积比为1:0. 5 —1. 5。
4.根据权利要求1或2所述的结核分枝杆菌固、液培养基，其特征是装在培养容器中的固体培养基，其上表面为斜面。
5.根据权利要求3所述的结核分枝杆菌固、液培养基，其特征是装在培养容器中的固体培养基，其上表面为斜面。
6.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌固、液培养基的使用方法，其特征是将固体培养基装在培养容器中，向液体培养基中加入经过标本前处理的结核分枝杆菌标本后，再将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中并按常规的要求进行增菌培养。
7.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌固、液培养基的使用方法，其特征是将固体培养基装在培养容器中，将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中，再向培养容器中加入经过标本前处理的结核分枝杆菌标本并按常规的要求进行增菌培养。
8.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌固、液培养基的使用方法，其特征是对采用过滤方法浓集结核分枝杆菌标本的，结核分枝杆菌标本粘附在过滤膜上，将固体培养基装在培养容器中，将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中，再将粘附有结核分枝杆菌标本的过滤膜放入培养容器中并按常规的要求进行增菌培养。
全文摘要
本发明公开了一种在医学检验领域中用于结核分枝杆菌增菌培养的结核分枝杆菌固、液培养基，由适合结核分枝杆菌增菌培养的固体培养基和适合结核分枝杆菌增菌培养的液体培养基混合组成，混合组成后的结核分枝杆菌固、液培养基中的固体培养基为固态，液体培养基为液态，固体培养基为罗氏培养基，液体培养基为7H9培养基，装在培养容器中的固体培养基上表面为斜面；使用方法是对采用过滤方法浓集结核分枝杆菌标本的，结核分枝杆菌标本粘附在过滤膜上，将固体培养基装在培养容器中，将液体培养基加入到装有固体培养基的培养容器中，再将粘附有结核分枝杆菌标本的过滤膜放入培养容器中并按常规的要求进行增菌培养。
文档编号C12R1/32GK102191196SQ20111007113
公开日2011年9月21日 申请日期2011年3月24日 优先权日2011年3月24日
发明者彭钧, 谌宝康 申请人:湖南省天骑医学新技术有限公司