专利名称：一种检测植物中目标基因的方法及其专用spr生物传感器的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测植物中目标基因的方法及其专用 SPR生物传感器。
背景技术：
表面等离子共振(Surface ρlasmon resonance, SPR)生物传感器是近年来国际上迅速发展的光学生物化学检测技术。SPR生物传感器是将探针或配体固定于传感器芯片的金膜表面形成单分子层，当含有能与之作用的分析物的液体流经传感片表面时，分子间发生特异性结合并可引起传感片表面折射率的改变，通过检测SI^R信号改变而监测分子间的相互作用。SI^R生物传感器具有无需标记、灵敏准确、快速、能够实现在线连续以及高通量等检测特点，特别适合于生物分子之间相互作用，通过传感器芯片实时监测各类生物分子如多肽、蛋白质、寡核苷酸、寡聚糖和小分子信号物质之间相互作用的整个过程，并通过分析软件可以测定溶液中与固定相作用的物质的量。
随着转基因植物以及产品的安全性问题日益受到关注，建立准确、可靠、便捷的转基因检测技术和检测平台对转基因植物商品化的检测非常重要。目前在核酸水平上鉴定转基因植物的方法中，应用最广泛的是PCR方法以及基于PCR的一系列改进技术，如提高定量PCR的测量限度和定性PCR的检测限度。PCR检测具有快速、简便、灵敏度高等特点， 已经广泛应用在检测各种转基因作物及其加工产品方面(Forte V Τ, DiPinto A, Martino C, et al. A general multiplex—PCR assay for the general detectionof genetically modified sya and maize. Food Control,2005,16:535-539 ；BerdalK. G, Hoist-Jensen A. , Rouddup Ready soybean event-specific real—timequantitative PCR assay and estimation of the practical detection andquantification limits in GMO analyses. Eur Food Res Technol，2001，213 :432-438 ；朱文斯，朱水芳，黄茜华，等，实时荧光PCR技术在快速检测植物及其加工产品中转基因成份中的应用.中国医药导刊，2003,5(1) :31.)。 但PCR方法也存在相应的缺点，首先，PCR产物中若出现非特异性带，不能确定样品中是否含有转基因成分；其次，不能确定PCR产物中的特异性带是否为目的条带，目前仅能通过测序来确定，成本高且费时，而Sra基于PCR的优点，弥补其不足，具有快速，高通量地检测PCR 产物中是否含有转基因成分的优点。
Bt基因已成为植物基因工程及转基因育种中应用最广泛，最具潜力和应用前景的抗虫基因。目前国内外利用修饰、改造、部分合成及全合成Cry基因转化植物，已成功地将 Bt杀虫基因导入并获得表达的有烟草、棉花、玉米、水稻、甘蔗、小麦、大豆、马铃薯、番茄、甘蓝、杨树和落叶松等60多种植物，其中CrylAc是转基因植物中常用的杀虫蛋白基因，因此将其作为研究对象对其进行特异性检测。
例Bt转基因抗虫棉在我国的栽植面积逐年增加，有数据显示，河北省今年栽植的棉花中90%为抗虫棉品种，然而抗虫棉可能会像其他的转基因作物一样带来一些问题， 诸如昆虫抗虫性增强，天敌数量减少，基因漂流，生物多样性被破坏等等，实现对Bt转基因抗虫棉的长期监测是目前研究的趋势。
据粗略统计，目前已经发现了 60群Bt杀虫晶体蛋白基因，根据它们杀虫范围和基因序列的同源性不同可粗分为六大类(Cry I、Cry II、Cry III、Cry IV、Cry V、Cyt)每一类中又可分为许多亚类，目前转入棉花的有CrylAc、CryIAb、CryIAc和CryIAb融合基因等几种对鳞翅目害虫有较强的抗性的Bt杀虫晶体蛋白基因。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种辅助检测或检测待测生物中目标基因的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤 1)提取待测生物的基因组DNA作为模板，以如下所述试剂中的所述引物对作为引物，进行PCR扩增，得到PCR产物； 2)将步骤1)得到的PCR产物变性为单链DNA分子； 3)将步骤2)得到的单链DNA分子流经如下所述的Sra生物传感器的传感芯片，若检测的RU值发生改变，则所述待测植物中候选含有或含有目标基因，若检测的RU值未发生变化，则所述待测植物中候选不含有或不含有目标基因。
所述生物为植物；所述目标基因为抗虫蛋白的编码基因。
所述植物为转入所述目标基因的植物； 所述抗虫蛋白的编码基因为CrylAc ； 所述CrylAc的编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1。
在所述步骤1)后和所述步骤2、前，还依次包括纯化所述PCR产物和缓冲处理所述PCR产物的步骤； 所述缓冲处理PCR产物包括如下步骤将所述纯化得到的纯化后PCR产物与PH值为7. 4的PBM缓冲液混勻，得到缓冲处理后PCR产物； 步骤2)中，所述变性采用的温度为100°C，所述变性采用的时间为5min ； 步骤幻中，所述流经的速度为5 μ Ι/min，所述流经的温度为25°C，所述流经的时间为4min。
PBM缓冲液按照如下配方制备137mM NaCl, 2. 7mM KCl, IOmM Na2HPO4,2mM KH2PO4, 15mM MgCl2，其 PH 为 7.4。
本发明的第二个目的是提供一种用于辅助检测待测生物中目标基因的试剂。
本发明提供的试剂，由探针和用于扩增所述探针的引物对组成， 所述探针为满足如下1)和2)条件的单链DNA分子 1)不存在发夹结构和二聚体； 2)与所述目标基因的核苷酸序列的同一性大于90%。
所述探针的大小为25nt ； 所述探针的5'端标记生物素； 所述探针的核苷酸序列为序列表中序列1 ； 所述用于扩增所述探针的引物对中的一条引物为序列表中的序列2，另一条引物为序列表中的序列3。
本发明的第三个目的是提供一种用于辅助检测待测生物中目标基因的sra生物传感器。
本发明提供的sra生物传感器，为将所述试剂中的所述探针以共价结合的方式偶联到传感芯片上，得到sra生物传感器； 所述传感芯片为SA芯片； 所述目标基因为Cry IAc基因； 所述偶联包括如下步骤将所述单链DNA分子的溶液流经活化后的SA芯片，使其与SA芯片表面结合，得到sra生物传感器 所述传感芯片为SA芯片； 所述目标基因为Cry IAc基因； 所述偶联包括如下步骤将含有所述探针的溶液流经活化后的SA芯片，使其与SA 芯片表面结合，得到sra生物传感器 所述含有所述探针的溶液为将所述探针和PH为7. 4的PBM缓冲液混合，得到的溶液，所述探针在所述含有所述探针的溶液中的浓度为ι μ M ； 所述流经的流速为10 μ 1/min ； 所述流经的时间为128s ； 所述生物为植物，所述植物具体为棉花。
上述sra生物传感器在辅助检测生物中目标基因中的应用也是本发明保护的范围。
所述生物为植物；所述目标基因为抗虫蛋白的编码基因； 所述植物为转入所述目标基因的植物； 所述抗虫蛋白的编码基因为CrylAc ； 所述CrylAc的编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1。
本发明的实验证明，本发明构建了包被探针的sra生物传感器，可以通过其来检测转基因棉花中是否含有CrylAc基因，其具有高灵敏度、高通量、自动化的优点，而且操作简单。
图1为野生型棉花DP5415和转基因棉花NuCotn33B的生长 图2为野生型棉花DP5415和转基因棉花Nucotn33B的PCR扩增 图3为SPR生物传感器的制备的检测图 图4为单链DNA互补序列样品Com-Btl的SI3R检测 图5为非互补序列样品Non-Btl的SI3R检测 图6为PCR产物SPR检测流程图 图7为Nucotn33B棉花PCR产物SPR检测 图8为SI3R检测经PBM缓冲液调节PCR产物的结果图 图9为SI3R检测未经PBM缓冲液调节PCR产物的结果图 图10为SI3R检测经纯化后的PCR产物的结果图 图11为转基因棉花Nucotn33B的PCR产物的SI3R检测 图12为野生型棉花DP5415的PCR产物的SI3R检测 图13为对照PCR产物的SPR检测
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、SI3R生物传感器的制备及验证 Bt蛋白的编码基因CrylAc的SI3R检测的原理使用基于表面等离子共振(SPR) 原理设计的BIACore3000 (GE公司)来检测样品中是否含有CrylAc基因，选用的芯片为SA 芯片，其特点是在羧基化的葡聚糖表面覆盖了一层链霉亲合素(str印tavidin)，非常适合用于捕获生物素标记的DNA片段，因此设计探针时，可在其5'端标记上生物素。由于链霉亲合素和生物素之间结合的高亲合力，当探针流进芯片表面时将结合到芯片表面作为配体 (ligand)，样品以恒定的流速和浓度流过芯片表面，如果样品中的待分析物(analyte)和偶联在芯片上的配体发生碱基互补配对，芯片表面物质的质量将发生改变，仪器记录下对应的响应值(RU)的改变；如果样品中的待分析物没有与配体发生结合，仪器将不会有响应值的改变。
一、sra生物传感器的制备 1、探针的选择 在探针的选择上主要参考两个标准1)、探针本身要求不能存在发夹结构和二聚体，错配尽可能少；2)、探针的特异性与CrylAc基因的同一性高(不低于90%)，与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。根据这两个标准，合成了一个探针(上海英骏生物技术有限公司)，探针的5'端用生物素进行了标记(表1)。
根据CrylAc基因序列，在探针两端分别设计了正反引物(表2)， 表1为生物素标记的探针 探针名称探针序列 Biot-Btl5' Biotin-TAAACAGCGGATGGCAAGTTAGAAG 3' 表2为生物素标记的探针两端的引物 探针名称引物名称引物序列 BtFffl5' CTCTCTATGGAACTATGGGAAACGC 3'(序列 2) Biot-Btl BtRVl5' ATTGTTGTTCTGTGGTGGGATTTCG 3'(序列 3) 从孟山都公司购买野生型棉花DPM15种子和转基因棉花Nuc0tn33B(其为转入 CrylAc基因)种子，温水(30°C左右)浸种他，在25°C下保温催芽12h，当种子露出白芽到芽长达种子长的1/2时播入土中，在温室中25°C条件下培养一个月，得到野生型棉花DPM15 和转基因棉花Nucotn33B (见图1)。
以野生型棉花DPM15和转基因棉花NuCotn33B的基因组为模板，以BtFWl和 BtRVl 为引物，进行 PCR 扩增，PCR 程序为94°C for 3min,94°C for 30s, 54°C for 30s, 72°C for 45s, 35 cycles ；72°C for 5min ； 10 °C for ever，结果如图 2 所示，转基因棉花 Nucotn33B(Bt棉花基因组)得到251bp的片段，野生型棉花(WT棉花基因组)未扩增出目的片段，经过测序，该251bp的片段中含有与探针Biot-Btl相同或互补的核苷酸序列。
2、sra生物传感器的制备 用50mM NaOH (含IM NaCl)的溶液以10 μ 1/min的流速冲洗SA芯片(GE公司， BR-1000-32)三次，每次 lmin。用 PBM 缓冲液(137mM NaCl, 2. 7mM KCl, IOmM Na2HPO4, 2mM KH2PO4,15mM MgCl2, PH = 7. 4)稀释探针 Biot-Btl 至 1 μ M(取 2 μ 1 无菌水稀释的 100 μ M 的探针溶液加入198 μ 1 PBM缓冲液)，以10 μ 1/min的流速流经SA芯片，分两次流入，与芯片表面的链霉亲和素结合，探针注入时间U8s，得到sra生物传感器。结果如图3所示，总结合量为1990RU(结合前是1163RU，结合后是3153RU)(图3双向箭头所对应的纵坐标)。
二、sra生物传感器的特异性验证 1、单链DNA的合成 使用BIACore3000检测DNA问的互作，需要进行试验条件的摸索，比如探针是否可用，样品流速，缓冲液的选择，解离条件的摸索等等。为了建立基因sra检测系统，合成了探针 Biot-Btl 的互补序列 Com-Btl :5' CTTCTAACTTGCCATCCGCTGTTTA 3'和非互补序列 Non-Btl 5' GTTTCTGCTCAGCGAGTTCGTGCCA3 ‘。试验首先选用单链 DNA 摸索了检测条件， 此后用PCR产物进行了相关的试验。
2、单链DNA的SPR检测 用PBM缓冲液稀释上述合成的探针Biot-Btl的互补序列样品Com-Btl和非互补序列样品Non-Btl至IOnM (取0. 2 μ 1无菌水稀释的10 μ M的样品溶液加入199. 8 μ 1 PBM 缓冲液)，得到两种样品，在25°C的条件下以5 μ 1/min的流速流经上述获得的SI5R生物传感器的芯片表面，总上样量为25 μ 1 (时间为5min)，然后用PBM缓冲液解离aiiin。
互补序列样品Com-Btl的结果如图4所示，构建的SPR生物传感器检测出互补序列样品Com-Btl与探针发生了相互作用，由进样前的2766RU(进缓冲液)，增大到 3084RU(用PBM解离^iiin后的值)，响应值增大了 318RU，且它们的结合很牢固，进样结束后，PBM缓冲液流经芯片表面时，基本上没有解离，尝试了用ImM HCl进行芯片的再生，但效果不太理想，最终确定用50mM NaOH以30 μ 1/min的流速再生芯片，每次用5 μ 1即可； 而非互补序列样品Non-Btl的结果如图5所示，非互补序列样品Non-Btl没有与Sra生物传感器的芯片表面的探针发生互作，进样前为^47RU (进缓冲液)，用PBM解离 aiiin后为沈50冊，RU值基本上没有改变，这表明包被好的芯片的特异性很好，可以用来进行CrylAc基因的检测。
三、SPR生物传感器检测PCR产物的条件验证 1、SPR检测PCR产物的缓冲液条件摸索 PCR产物为双链结构，因此在检测前必须使其变性成单链，采用的方法是将上述 PCR产物分别金属浴上100°C加热5min，迅速转移到冰水中，使样品保持单链状态，检测时从冰水中取出在25°C的条件下以5μ 1/min的流速流经芯片表面，如果分析物中存在可以与生物素标记的探针互补的序列，在芯片表面发将会发生杂交，从而引起RU值的变化(检测流程图如图6所示)。
样品检测时，缓冲液非常关键，缓冲条件合适时，互作信号很明显；但是如果没有注意到样品的缓冲条件，往往检测不到互作信号。
提取NUCOtn3;3B棉花叶片的基因组DNA，并以此为模板，用目标基因的特异性引物BtFW和BtRV (表3)，采用高保真DNA聚合酶经过聚合酶链式反应(PCR)，扩增得到PCR产物，PCR 扩增程序:94°C for 3min，94°C for 30s，54°C for 30s, 72°C for45s, 35cycles ； 72°C for 5min ； 10°C for ever。结果如图 7 所示，得到 1780bp 片段。
将该PCR产物送去测序，结果为该PCR产物具有序列表中序列1所示的核苷酸， 与已报道的转CrylAc基因棉花中的CrylAc基因碱基序列(GenBank :Y09787)同源性达 96. 18%。
将PCR产物用限制性内切酶Xho I和Hind III酶切后回收片段，与经过同样酶切的原核表达载体PGEX-KG(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，MCV030)载体大片段连接，得到连接产物，转入大肠杆菌DH5 α中，得到转化子，提取转化子的质粒，该质粒为将序列表中序列1插入pGEX-KG的Xho I和Hind III酶切位点间得到的载体，将该质粒命名为 pGEX-KG-CrylAc。
表3为目标基因的特异性引物
基因名称引物名称引物序列酶切位点CrylAcBtFW5 ‘ AACCTCGAGATGGACAACAACCCAAACATCMC 3 ‘Xho IBtRV5' ACCAAGCTTCGCTGAMTTCCTAACACCCACGAT 3'Hind III 以pGEX-KG-CryIAc质粒为模板，用引物BtFWl和BtRVl进行PCR扩增，纯化PCR产物，纯化后的PCR产物用无菌水回收，取30 μ 1加入等体积的PBM缓冲液调节缓冲条件(是先加缓冲液再进行单链处理)，再在金属浴上100°C加热5min，迅速转移到冰水中，使样品保持单链状态，从冰水中取出样品在25°C的条件下以5μ Ι/min的流速流经芯片表面，上样量为20 μ 1 (时间为4min)，然后用PBM缓冲液解离2min，结果如图8所示，可以看到分析物与探针发生了互作，由进样前的1828RU (进缓冲液)，增大到1866RU (用PBM解离2min后的值)，响应值增大了约38RU。
而直接取无菌水回收的同样的PCR产物(没有进行缓冲处理)进行检测时，结果如图9所示，由进样前的1821RU(进缓冲液)，用PBM解离2min后1810RU，没有检测到互作。
2、SI3R检测PCR产物的纯度条件摸索 如果PCR产物直接拿来检测，结果往往出现异常现象。
以pGEX-KG-CryIAc质粒为模板，用引物BtFWl和BtRVl进行PCR扩增(未纯化 PCR产物)，PCR产物取10 μ 1力卩入90 μ 1 PBM缓冲液调节缓冲条件，再在金属浴上100°C 加热5min，迅速转移到冰水中，使样品保持单链状态，从冰水中取出样品在25°C的条件下以5 μ 1/min的流速流经芯片表面，上样量为20 μ 1 (时间为4min)，然后用PBM缓冲液解离 2min，结果如图10所示，Sra检测时检测到了互作信号，由进样前的1911RU(进缓冲液)，增大到2136RU(用PBM解离2min后的值)，响应值增大了约225RU，但曲线不同于常见的互作曲线(解离时RU值逐渐降低或不变)，它在解离时RU值有个增大的过程，随后才慢慢减小。
结果的异常可能在于PCR产物中的成分过于复杂，有大量的酶，盐离子等干扰成分，在Sra检测时影响了分析物与探针的结合，因此，建议PCR产物用DNA纯化试剂盒做一个快速简单的纯化，去除干扰因素后再检测，此时结果非常稳定且准确。
实施例2、SPR生物传感器检测目的基因 1、样品制备 上述试验从各个方面探讨了 sra检测时需要注意的问题，为接下来的转基因检测提供了依据。
实验使用植物基因组快速提取试剂盒(Novascience，Dg05020)提取了野生型棉花DPM15和转基因棉花NuCotn33B的基因组，以它们为模板，用引物BtFWl和BtRVl分别进行PCR扩增；分别得到野生型棉花DPM15的PCR产物和转基因棉花NuCOtn3;3B的PCR产物。
此外，为了分析芯片在检测PCR产物时是否具有特异性，设计了一个负对照，艮口用弓I 物 BtFW2 禾口 BtRV2(BtFW2 5 ‘ CGGTTACACTCCCATCGACATCTCC 3 ‘ ；BtRV2 5' TTGAATTGAATACGCATTTCCTCGC 3')以转基因棉花Nucotn3;3B的基因组为模板进行PCR 扩增，得到对照PCR产物。
将上述三种PCR产物分别经过纯化试剂盒(北京全式金生物技术有限公司， EP101-01)纯化后用BIACOre3000进行检测，具体如下的步骤2。
2、检测 分别将上述纯化后的三种PCR产物取10 μ 1加入90 μ 1 PBM缓冲液进行缓冲条件的调节(将纯化后PCR产物与PH值为7. 4的PBM缓冲液混勻(室温25°C下用移液枪吹打混勻)，再在金属浴上100°C加热5min，迅速转移到冰水中，使样品保持单链状态，从冰水中取出样品在25°C的条件下以5 μ 1/min的流速进样，总进样量20 μ 1 (时间为^iin)，然后用 PBM缓冲液解离anin。
转基因棉花NUCOtn33B的PCR产物的结果如图11所示，能检测到很明显的互作信号，RU值随着样品的流入逐渐增大，表明样品与探针正在发生互作，通入PBM缓冲液时发生了缓慢解离，能检测到很明显的互作信号，RU值随着样品的流入逐渐增大，表明样品与探针正在发生互作，通入PBM缓冲液时发生了缓慢解离，响应值由进样前的1909RU，增大到1930RU(用PBM解离^iiin后的值)，解离结束后响应值增大了 21RU，说明转基因棉花 Nucotn33B中含有目的基因CryIAc。
野生型棉花DPM15的PCR产物的结果如图12所示，没有检测到与探针的互作，进样前的响应值为1843RU (进缓冲液)，用PBM解离^iin后响应值减小为1^6RU，RU值没有增加，说明野生型棉花DPM15中不含有目的基因CrylAc。
对照PCR产物的结果如图13所示，同样没有检测到与探针的互作，进样前的响应值为1851RU (进缓冲液)，用PBM解离^iin后为1843RU，进样后RU值没有增加，说明对照 PCR产物里没有目的基因Cry IAc。
本发明对目的基因CrylAc的定性检测，上述三种样品，每种样品至少重复了 5次 (从采样到PCR到纯化到检测均独立进行)，每次的结果均和上述无显著差异。
权利要求
1.一种辅助检测或检测待测生物中目标基因的方法，包括如下步骤1)提取待测生物的基因组DNA作为模板，以如下权利要求5或6所述试剂中的所述引物对作为引物，进行PCR扩增，得到PCR产物；2)将步骤1)得到的PCR产物变性为单链DNA分子；3)将步骤2)得到的单链DNA分子流经如下权利要求7或8所述的SI3R生物传感器的传感芯片，若检测的RU值发生改变，则所述待测植物中候选含有或含有目标基因，若检测的RU值未发生变化，则所述待测植物中候选不含有或不含有目标基因。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述生物为植物；所述目标基因为抗虫蛋白的编码基因。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于 所述植物为转入所述目标基因的植物；所述抗虫蛋白的编码基因为CrylAc ；所述CrylAc的编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于在所述步骤1)后和所述步骤幻前，还依次包括纯化所述PCR产物和缓冲处理所述PCR 产物的步骤；所述缓冲处理PCR产物包括如下步骤将所述纯化得到的纯化后PCR产物与PH值为 7. 4的PBM缓冲液混勻，得到缓冲处理后PCR产物；步骤2)中，所述变性采用的温度为100°C，所述变性采用的时间为5min ； 步骤3)中，所述流经的速度为5 μ Ι/min，所述流经的温度为25°C，所述流经的时间为 4min。
5.一种用于辅助检测待测生物中目标基因的试剂，由探针和用于扩增所述探针的引物对组成，所述探针为满足如下1)和2)条件的单链DNA分子1)不存在发夹结构和二聚体；2)与所述目标基因的核苷酸序列的同一性大于90%。
6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于 所述探针的大小为25nt ；所述探针的5'端标记生物素； 所述探针的核苷酸序列为序列表中序列1 ；所述用于扩增所述探针的引物对中的一条引物为序列表中的序列2，另一条引物为序列表中的序列3。
7.一种用于辅助检测待测生物中目标基因的SPR生物传感器，为将权利要求5或6所述试剂中的所述探针以共价结合的方式偶联到传感芯片上，得到SPR生物传感器。
8.根据权利要求7所述的生物传感器，其特征在于 所述传感芯片为SA芯片；所述目标基因为CrylAc基因；所述偶联包括如下步骤将含有所述探针的溶液流经活化后的SA芯片，使其与SA芯片表面结合，得到sra生物传感器所述含有所述探针的溶液为将所述探针和PH为7. 4的PBM缓冲液混合，得到的溶液， 所述探针在所述含有所述探针的溶液中的浓度为1 μ M ； 所述流经的流速为10μ Ι/min ； 所述流经的时间为128s ； 所述生物为植物，所述植物具体为棉花。
9.权利要求7或8所述SPR生物传感器在辅助检测生物中目标基因中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述生物为植物；所述目标基因为抗虫蛋白的编码基因；所述植物为转入所述目标基因的植物；所述抗虫蛋白的编码基因为CrylAc ；所述CrylAc的编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1。
全文摘要
本发明公开了一种检测植物中目标基因的方法及其专用SPR生物传感器。本发明提供检测待测植物中目标基因的方法，包括如下步骤1)提取待测生物的基因组DNA作为模板，以如下试剂中的所述引物对作为引物，进行PCR扩增，得到PCR产物；2)将步骤1)得到的PCR产物变性为单链DNA分子；3)将含有步骤2)得到的单链DNA分子的溶液流经所述的SPR生物传感器，检测的RU值发生改变，则所述待测植物中含有目标基因，若检测的RU值未发生变化，则所述待测植物中不含有目标基因。本发明的实验证明，本发明构建了包被探针的SPR生物传感器，可以通过其来检测转基因棉花中是否含有Cry1Ac基因，其具有高灵敏度、高通量、自动化的优点，而且操作简单。
文档编号C12Q1/68GK102181555SQ201110100899
公开日2011年9月14日 申请日期2011年4月21日 优先权日2011年4月21日
发明者麻密, 赵卓亚, 徐文忠, 何振艳, 陈焱山 申请人:中国科学院植物研究所