专利名称：用于治疗过敏的热致死菌株的食品组合物以及医药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种食品组合物以及医药组合物，特别是ー种包含用于治疗过敏的具有免疫活性的热致死菌株的食品组合物以及医药组合物。
背景技术：
一般食用含乳酸菌(LAB)的产品仅具有调整肠道的健康效果，虽然有数以万计的乳酸菌菌株存在于自然界，但仅有少数乳酸菌株具有抗过敏的特质。少数这些细菌株所具有的耐酸与耐胆盐能力、吸附黏膜表皮细胞的能力以及在通过肠胃道后仍可存活的能力等特性，是筛选有促进健康效果的菌株时的重要依据。时至今日，仅有少数几株经证明其具有抗过敏健康效果的乳酸菌菌株被确认出来，而乳酸菌对身体健康的功能在于菌株(strain)的特异性而非菌种(species),此种对于人的身体健康有特殊功效的菌株称为功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food ；Report of joint FAO/WHOworking group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food ；London Ontario，Canada April 30and May I,2002 :1_7)。益生菌与免疫反应之间的关系，约从公元2000年开始被集中性的大量研究直到今日。益生菌大都为革兰氏阳性菌，从体外进入体内后，附着于人体的黏膜细胞上方，与树突状细胞及巨噬细胞的类铎受体结合。每种类铎受体所辨识的物质皆不尽相同，除了在细胞表面的类铎受体较易辨识多糖体物质，如肽聚糖或是脂多糖等，也有细胞内的胞内类铎受体，只为辨识菌体内物质，如细胞质蛋白或是遗传物质脱氧核糖核酸链等。菌体所包含的物质与类铎受体作用后，会使树突状细胞或巨噬细胞成熟化，并分泌相关的细胞激素来刺激免疫反应的运行。目前在研究上发现，益生菌影响免疫反应最典型的现象即为刺激第一型辅助型T细胞的活化，第二个现象则为第一型调节型T细胞的成熟。此两个不同的途径，在树突状细胞或巨噬细胞被刺激分泌的细胞激素就已经有所区別。在前者，此两种抗原呈现细胞所分泌的细胞激素大多为前发炎细胞激素，如IL-12、IFN-Y , TNF-α等；后者分泌的细胞激素多数为抗发炎细胞激素，如IL-10。国内外有许多乳酸菌与过敏反应有关的文献报导。在针对乳酸菌减低过敏的能力进行动物试验的研究方面，热致死的乳酸菌L. plantarum L-137所作的动物试验能够诱导DBA/2鼠的巨噬细胞与脾脏细胞产生IL-12及IFN-Y，并且能抑制已具酪蛋白(casein)专ー性的IgE及对酪蛋白专ー性的IgGl抗体(Murosaki，1998)。针对OVA-TCR-Tg鼠喂食L. casei Shirota四周，增加脾脏细胞分泌IFN-Y和IL-12，降低分泌IL-4和IL_5 (Shidaet al. ,2002)。OVA致敏BALB/c鼠喂食乳酸菌Lactobacillus发酵奶27天,可降低血清中具有 OVA 特异性 IgE(Ishida et al. ,2003) C3H/Hej 鼠经 OVA 与霍乱毒素(choleratoxin)致敏,喂食B. bifidum BGN4、L. casei 911,可使血清中具OVA特异性IgE、IgA及总IgE、IgGl降低(Kim et al.，2005)，这些文献证实在过敏模式的动物试验上，喂食乳酸菌能够降低血清中IgE的含量，藉此改善过敏的情形。乳酸菌在临床实验上，具有过敏疾病的患者确实能改善过敏反应，合并服用干燥的乳酸菌L. rhamnosus及L. reuteri六周,对过敏疾病有益处，以问卷调查家长评估益生菌对一至十三岁儿童异位性皮肤炎，发现56%的儿童异位性皮肤炎有改善(Rosenfeldt etal. , 2003) ο Ishida (2005)学者针对四十九位过敏性鼻炎患者，饮用L. acidophilus strainL-92，也发现过敏症状获得改善。服用L fermentum VRI 003 PCCTM八周，五十三位具有异位性皮肤炎症状的小孩可以增加PBMC细胞产生IFN- Y，并改善过敏情形(Prescott etal.，2005)。F5lster-Holst (2006)等学者研究指出针对五十四位具有异位性皮肤炎患者所作的试验，给予服用L. rhamnosus strain GG及安·剂后，能有效改善过敏症状。具抗过敏功效性的活体乳酸菌，其保存必须藉由冷藏或冷冻的方式，才能使其抗过敏活性不至于因长时间在室温存放而降低。而具有免疫活性的热致死菌株，经由特定温度热致死后，可以解决一般抗过敏益生菌产品在常温保存上的问题。
发明内容
本发明一方面广义的包括热致死的粪肠球菌(Enterococcus faecalis) YM-73菌 株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO M 2011123以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂所组成的组合物。在另ー项具体实施例中，增强抗过敏能力的生理上可接受的同种或突变种的热致死粪肠球菌YM-73菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO M 2011123。又，另ー项具体实施例中，本发明可广义的包括经由促进白细胞介素-12 (IL-12)或干扰素Y调控Thl型免疫反应而抑制免疫球蛋白IgE,改善Th2型免疫反应过剩的过敏现象，其是对哺乳动物给予可达到刺激Thl型免疫效果剂量的热致死粪肠球菌YM-73菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO M 2011123。本发明亦可广义的包括本发明说明书中分开或总合说明的部分、构成要件与特征，及任何包含该等部分、构成要件与特征中任何一者或更多者的任何或全部组合，且若本文所述及的明确完整事物已于与本发明有关的相关技术中出现已知的同等物时，所述已知的同等物将如同独立事项并入本文中。
图I显示，当分别以IO6至IO8个Cfu粪肠球菌YM-73菌株CCTCC NO M 2011123的活菌及两种热致死条件处理的菌体与IO5至IO7个人外周血单个核细胞(PBMC)分别共同培养48小时，收取细胞上清液，以酶联免疫分析法检测干扰素Y (IFN-gamma)在上清液中的含量。其中以实验背景值(Cell only)为负对照组，以发表多数文献证明其有抗过敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的活菌及相同热致死条件处理的菌体为功能性对照组，PHA(Phytohemagglutinin)为正对照组，检测干扰素Y受刺激浓度。结果显示两种热致死条件处理的粪肠球菌YM-73菌株可以显著的刺激人外周血单个核细胞(PBMC)分泌干扰素 Y 与对照组(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)有显著性差异。55°C 80°C的热致死温度下,粪肠球菌YM-73菌株比对照组(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出36倍；90°C 120°C的热致死温度下，粪肠球菌YM-73菌株比对照组(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出15倍(PBMC)。
图2显示，当分别以热致死IO6至IO8个cfu粪肠球菌YM-73菌株CCTCC NO:M 2011123的活菌及两种热致死条件处理的菌体与IO5至IO7个人外周血单个核细胞(PBMC)分别共同培养48小时，收取细胞上清液，以酶联免疫分析法检测白细胞介素12p70(IL-12p70)在上清液中的含量。其中以实验背景值(Cell only)为负对照组，以发表多数文献证明其有抗过敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的活菌及相同热致死条件处理的菌体为功能性对照组，PHA (Phytohemagglutinin)为正对照组，检测白细胞介素12p70(IL-12p70)受刺激浓度。结果显示两种热致死条件处理的粪肠球菌YM-73菌株可以显著的刺激人外周血单个核细胞(PBMC)分泌白细胞介素12p70与对照组(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)有显著性差异。55°C 80°C 的热致死温度下，幾肠球菌YM-73菌株比对照组(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出50倍；90°C 120°C的热致死温度下，粪肠球菌YM-73菌株比对照组(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出 18 倍。图3显示，当分别以热致死IO6至IO8个cfu粪肠球菌YM-73菌株CCTCC NO M2011123的活菌及两种热致死条件处理的菌体与IO5至IO7个人外周血单个核细胞(PBMC)分别共同培养48小时，收取细胞上清液，以酶联免疫分析法检测白细胞介素13(IL-13)在上清液中的含量。其中以实验背景值(Cell only)为负对照组，以发表多数文献证明其有抗过敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的活菌及相同热致死条件处理的菌体为功能性对照组，PHA(Phytohemagglutinin)为正对照组,检测白细胞介素13(IL-13)受刺激浓度。结果显示两种热致死条件处理的粪肠球菌YM-73菌株可以显著的刺激人外周血单个核细胞(PBMC)降低分泌白细胞介素13，与正对照组(PHA)有显著性差异。55°C 80°C的热致死温度下,粪肠球菌YM-73菌株比对照组(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量下降6倍；90°C 120°C的热致死温度下，粪肠球菌YM-73菌株比对照组(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量也下降近6倍。图4显示，A图为55°C 80°C条件下热致死粪肠球菌YM-73菌株冷冻干燥成菌粉，在FE-SEM下放大50000倍观察；B图为90°C 120°C条件下热致死粪肠球菌YM-73菌株冷冻干燥成菌粉，在FE-SEM下放大50000倍观察；C图为粪肠球菌YM-73菌株的活性菌体冷冻干燥成菌粉，在FE-SEM下放大50000倍观察。从A图与C图比较中可以发现，在55°C 80°C条件下热致死粪肠球菌YM-73菌株后，菌株表面的皱折变多，菌体变得更加集中；而B图与C图的比较，发现粪肠球菌YM-73菌株被破坏，且有破裂的菌体。因此在此两热致死温度下，菌体刺激免疫细胞产生Thl细胞激素的能力比活性菌体增强约4. 6倍。图5显示，依据Jacobsen等学者(1999)的分析方法，当每个视野的平均菌数少于40时，判定为不附着(nonadhesive);当每个视野的平均菌数介于41至100时，判定为附着(adhesive);当姆个视野的平均菌数大于100时,判定为强烈附着(strongly adhesive)。显示粪肠球菌YM-73菌株CCTCC NO M 2011123的活性菌体及55°C 80°C条件热致死后的菌体判定为“附着”；90°C 120°C条件热致死后的菌体判定为“不附着”。
具体实施例方式本发明可广义的包括热致死的粪肠球菌(Enterococcus faecalis) YM-73菌株，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO M 2011123。
许多文献指出増加第一型T细胞细胞激素包括白细胞介素(IL-12)、干扰素
Y(IFN-gamma)的分泌增加,可以有效改善过敏症状；进ー步的研究也指出特定的乳酸菌菌株和树突状细胞上类铎受体(Toll-like receptor)结合，活化细胞内的转译蛋白移至核内而释放大量细胞激素，属于先天免疫的ー环，因此某些特定的乳酸菌菌种借由其细胞壁多糖类物质如peptidoglycan、polysaccharide等,经先天免疫系统,确实能活化体内T细胞的发育。本发明所述的菌株的冷冻干燥培养物已保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国武汉。保藏的详细资料如表I所示表I
权利要求
1.一种食品组合物，其特征在于，包含 刺激免疫细胞分泌抗过敏相关细胞激素的热致死粪肠球菌(Enterococcus faecalis)YM-73，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO M 2011123 ;以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂。
2.如权利要求I所述的食品组合物，其特征在于，该热致死温度为55°C 80°C。
3.如权利要求I所述的食品组合物，其特征在于，该热致死温度为90°C 120°C。
4.如权利要求I所述的食品组合物，其特征在于，该赋形剂或稀释剂为一种食品。
5.如权利要求4所述的食品组合物，其特征在于，该食品包含发酵乳、酸奶、奶酪、乳制饮品乳粉、茶、咖啡或以上的组合。
6.一种用于治疗过敏的医药组合物，包含 刺激免疫细胞分泌抗过敏相关细胞激素的热致死粪肠球菌(Enterococcus faecalis)YM-73，中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC NO M 2011123 ;以及医药上可接受的赋形剂或稀释剂。
7.如权利要求6所述的用于抗过敏的医药组合物，其特征在于，该热致死温度为55 80°C。
8.如权利要求6所述的用于抗过敏的医药组合物，其特征在于，该热致死温度为90°C 120°C。
全文摘要
本发明涉及具有免疫活性的热致死菌株及含过去未知可用于增进它治疗过敏能力的该热致死菌株的新颖组合物，该组合物可以食品或医药组合物的形式存在。其中亦说明如何筛选测定该热致死乳酸菌株组合物而增进Th1型免疫能力藉此降低因过敏而反应过度的Th2型的免疫反应的方法。
文档编号A23L1/30GK102835667SQ201110179140
公开日2012年12月26日 申请日期2011年6月20日 优先权日2011年6月20日
发明者谢佩珊, 蔡宜钧, 郭仲伟, 林美吟, 庄家如 申请人:丰华生物科技股份有限公司