专利名称：一种组织培养器皿与组织培养方法
技术领域：
本发明涉及一种专门用于组织培养的培养器皿以及使用该培养器皿进行组织培养的方法。
背景技术：
组织工程是当前生命科学研究的前沿学科，人类身体健康离不开组织工程科学的发展和完善。传统机体修复多采用自体组织移植手术，虽然可以取得满意疗效，但它是以牺牲自体健康组织为代价，挖东墙补西墙的保守办法，最终会导致很多并发症及附加二次损伤。最重要的是，一些人体重要的组织在机体内是独一无二的，例如，眼角膜。在眼角膜受到 伤害之后，机体内没有可以替代的组织，只能采用其他供体的或者人造的。但是，目前人体捐献的供体眼角膜来源十分有限，许多病人的健康恢复无法得到保障。从而，组织工程为众多的组织缺损的病人治疗带来了曙光。组织培养是组织工程得以发展和组织产品能够快速应用的重要技术基础。目前，组织培养研究较为迅速和成熟的是有关皮肤、眼角膜和卵巢组织的培养或再造等方面。通过体外培养角膜，再移植回人体，让因为角膜缺失或损坏而失明的人士恢复视力。对于被烧伤、炎症等因素损害的皮肤，通过体外培养皮肤组织移植人体，达到修复皮肤的外形和功能的目的。通过卵巢组织的培养，能够实现卵巢内遗传资源的开发和利用，对于现代畜牧业的遗传育种、新品种培育和濒临灭绝野生动物的保护具有着重要的意义。由于组织培养不同于细胞培养，组织培养需要有一个气液共存的培养环境。而目前常规的细胞培养器皿的结构无法提供理想的气液共存的培养环境，不能满足组织培养的需要。因此目前缺乏专用于组织培养的培养器皿。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种专门用于组织培养的培养器皿。本发明要解决的另外一个技术问题是提供一种使用上述培养器皿的组织培养方法。对于组织培养器皿，本发明采用的技术方案是一种组织培养器皿，包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养皿，培养皿包括盖子，内腔中还包括至少一个碗状容器，碗状容器包括半球形的碗底与开口，开口处设有与碗状容器侧壁垂直的边挡，边挡的内缘直径小于开口，外缘直径大于开口 ；碗状容器底部与培养皿底壁连接。作为改进，边挡外缘与培养皿的侧壁连接。更进一步的改进，多个碗状容器的边挡相互连接。另外一个改进是，碗状容器由塑料制成。还有一个改进是，碗状容器与培养皿由透明塑料一体制成。
对于组织培养方法，本发明采用的技术方案是一种使用上述的组织培养皿的组织培养方法，包括以下步骤
(1)在组织培养前，使用亲水性较强的无菌的明胶溶液对所述碗状容器进行包被；
(2)将所述组织培养皿正置，使碗状容器开口朝上，添加组织培养液于明胶溶液包被过的碗状容器内，培养液以添加到所述碗状容器边挡的下缘为宜；
(3)切割培养组织块，使培养组织块的体积为0.f Imm3 ;把培养组织块放入添加培养液的碗状容器内；
(4)合上组织培养器皿盖子，将组织培养皿整体倒置，使碗状容器开口朝下，然后放入培养箱中培养。上述步骤(I)先将组织培养器皿的碗状容器使用亲水性试剂明胶溶液进行包被， 是为了使组织培养器皿的碗状容器在倒置时能够牢固含住培养液。明胶是水溶性蛋白质混合物，皮肤、韧带、肌腱中的胶原经酸或碱部分水解或在水中煮沸而产生，作为亲水性材料目前已广泛用于食品和制作的粘合剂。本发明的有益效果是
通过在普通培养皿的内腔设置碗状容器，营造了组织培养所需要的气液共存的培养环境，使得所培养的组织在该环境中既能接触空气，又能保持营养供给。其使用方便、成本低廉、培养效果好，能够有效解决当前组织培养专业器皿的缺乏问题。本发明非常适合组织体积较小和密度较大的组织块的培养。
下面结合附图和具体实施方式
对本发明作进一步详细的说明。图I是本发明组织培养器皿实施例的主视图。图2是本发明组织培养器皿实施例的俯视图。图3是本发明组织培养器皿实施例的使用状态图。图中，I-外壁，101-盖子，2-碗状容器，201-边挡，3-培养液。
具体实施例方式图2是一种方形组织培养器皿，由底壁与4个侧壁构成培养皿的正方形的外壁I,外壁I所围成了培养皿的内腔，外壁I的开口处以盖子101将培养皿的内腔封闭。内腔设有4个开口直径约Icm的碗状容器2，碗状容器2具有半球形的碗底与边挡201。在图I中，边挡201垂直于碗状容器的侧壁，边挡201的内缘直径小于碗状容器的开口，边挡的外缘直径则大于开口。边挡201内径较碗状容器开口小，有利于当碗状容器倒置后，容器内液体不会从开口处向外流出。为使得碗状容器2能够稳稳固定在培养皿中，将碗状容器2底部与培养皿底壁连接，将边挡201的外缘与培养皿的侧壁连接，将4个碗状容器的边挡相互连接。本实施例中，碗状容器2与培养皿外壁I都是用透明塑料一体制成的。使用时，先将组织培养皿正置，使碗状容器2开口朝上，再将直径不大且开口处更小的碗状容器2盛满培养液3并放入要培养的组织块，然后合上盖子101将培养皿内腔封闭，再将整个培养皿倒置，使碗状容器2开口朝下(图3)，由于碗状容器出口处的液体表面张力使得容器内液体不会流出而含在碗状容器中并倒悬在培养皿的半空，使培养液中所培养的组织块既能得到培养液供给的营养，又能与培养皿内腔的空气接触，由此营造了一个气液共存的良好的组织培养环境。为了使用效果更好，可在放入培养液和组织块之前先用亲水性试剂明胶溶液对组织培养器皿的碗状容器2进行包被。本实施例适合用于培养组织体积较小和密度较大的组织块，如生殖细胞来源的卵巢组织和睾丸组织。以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明 的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。
权利要求
1.一种组织培养器皿，包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养皿，所述培养皿包括盖子，其特征在于所述内腔中还包括至少一个碗状容器，所述碗状容器包括半球形的碗底与开口，所述开口处设有与碗状容器侧壁垂直的边挡，所述边挡的内缘直径小于开口，外缘直径大于开口 ；所述碗状容器底部与培养皿底壁连接。
2.根据权利要求I所述的组织培养器皿，其特征在于所述边挡外缘与培养皿的侧壁连接。
3.根据权利要求I所述的组织培养器皿，其特征在于多个所述碗状容器的边挡相互连接。
4.根据权利要求I所述的组织培养器皿，其特征在于所述碗状容器由塑料制成。
5.根据权利要求I所述的组织培养器皿，其特征在于所述碗状容器与培养皿由透明塑料一体制成。
6.一种使用权利要求I所述的组织培养皿的组织培养方法，其特征在于包括以下步骤 (1)在组织培养前，使用亲水性较强的无菌的明胶溶液对所述碗状容器进行包被； (2)将所述组织培养皿正置，使碗状容器开口朝上，添加组织培养液于明胶溶液包被过的碗状容器内，培养液以添加到所述碗状容器边挡的下缘为宜； (3)切割培养组织块，使培养组织块的体积为0.f Imm3 ;把培养组织块放入添加培养液的碗状容器内； (4)合上组织培养器皿盖子，将组织培养皿整体倒置，使碗状容器开口朝下，然后放入培养箱中培养。
7.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于所述明胶为分析纯级别以上的细胞培养用产品，明胶溶于水高压灭菌后即为无菌的明胶溶液。
全文摘要
本发明公开了一种组织培养器皿与组织培养方法。组织培养器皿包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养皿，培养皿包括盖子，内腔中还包括至少一个碗状容器，碗状容器包括半球形的碗底与开口，开口处设有与碗状容器侧壁垂直的边挡，边挡的内缘直径小于开口，外缘直径大于开口；碗状容器底部与培养皿底壁连接。组织培养方法包括如下步骤(1)用亲水性明胶包被碗状容器；(2)添加培养液；(3)切割和加入组织块；(4)倒置培养皿后放入培养箱。本发明通过在普通培养皿的内腔设置碗状容器，营造了组织培养所需要的气液共存的培养环境，其使用方便、成本较低、效果较好，特别适宜体积较小和密度较大的组织块的培养。
文档编号C12N5/076GK102719361SQ20121020396
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月20日 优先权日2012年6月20日
发明者刘亚, 张运海, 曹鸿国, 李运生, 杨盼, 章孝荣, 蒲勇, 陶勇 申请人:安徽农业大学