专利名称：一种sod的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种酶的提取方法，具体涉及一种超氧化物歧化酶(SOD)的提取方法。
背景技术：
SOD是超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)的简称，国际酶学委员会的编码为EC I. 15. I. I,属于氧化还原类酶。SOD是一种能够清除机体中过多自由基的活性物质，该物质与机体的衰老、肿瘤发生、自身免疫性疾病和辐射防护等密切有关，对治疗类风湿性关节炎、白内障、膀胱炎、皮肤病、红斑狼疮等疾病疗效较好。此酶无抗原性，不良反应小，副作用小，是一种医疗价值很高、具有广阔前途的药用酶。SOD按金属辅基成分的不同分为三种，第一种是含有铜(Cu)锌(Zn)金属辅基的称 (Cu. Zn一S0D),呈绿色,存在于机体细胞衆中；第二种是是含有猛(Mn)金属辅基的称(Mn—S0D)，呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含有铁(Fe)金属辅基的称(Fe —S0D),呈黄褐色，存在于原核细胞中。SOD的分布极为广泛，迄今为止已从细菌、真菌、藻类、鱼类、昆虫和哺乳类动物等各种生物体分离得到。但是，从最早发现SOD到今天对SOD的开发应用，SOD大都是从动物的血液中分离提取。因此，公开的提取SOD的方式大多的是动物血液提取和分离。由于分离提取SOD的动物血液的资源有限，代价也非常昂贵，进而造成原料紧张，成本增加。在分离提取SOD时，需要多次加入动物血液再多次分离该物质，使得分离提取工艺繁琐复杂，容易造成化学污染。另外，由于使用的是动物血液，提取SOD时还存在艾滋病等血液中病毒的交叉感染及其它潜在危险。国际卫生组织曾经呼吁立刻停止从动物血液中提取的SOD的使用。另外，来源于动物血液的S0D，是含有铜(Cu)锌(Zn)金属辅基的称为Cu. Zn — S0D)
的单一性酶。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取SOD的方法，该方法可以从植物中获得S0D。本发明提供的SOD的提取方法包括以下步骤将刺梨果粉碎，获得刺梨果块；对刺梨果块进行浸提，得到浸提液；将浸提液进行离心分离，得到SOD粗酶液；将SOD粗酶液进行超滤，得到SOD溶液；将SOD溶液浓缩，得到SOD浓缩液；将SOD浓缩液离心喷雾干燥得到S0D。可选的，将SOD浓缩液离心喷雾干燥得到粉末状固体S0D。可选的，将野生刺梨果粉碎，获得野生刺梨果块。
可选的，在6(T70°C的纯净水中对刺梨果块进行恒温浸提8 12h。可选的，将SOD粗酶液进行超滤进一步包括将SOD粗酶液通过一级滤膜，收集一级截留液；用纯净水稀释一级截留液后再通过二级滤膜，收集二级通过液和二级截留液；用纯净水稀释二级通过液后再通过三级滤膜，收集三级截留液；将二级截留液和三级截留液合并得到为SOD溶 液。可选的，一级滤膜分子量为5000 10000，二级滤膜分子量为50000 80000，三级滤膜分子量为20000 40000。可选的，对SOD溶液进行PH调节，使其范围在3. 8 5. 2之间。可选的，在将刺梨果粉碎之前，还包括清洗刺梨果的步骤。可选的，在清洗之后对刺梨果进行烘干的步骤，且在烘干过程中向刺梨果加硫磺。可选的，将SOD溶液减压真空浓缩18 30min，得到SOD浓缩液。本发明提供的SOD的提取方法是全物理方法提取S0D，只需要常用的简单设备即可完成，工艺简单，不存在危险；且提取过程中所使用的温度不高，条件温和，成品SOD常温下能够保存；由于采用了生物技术保活工艺，全物理处理工艺，故既无环境污染也没有内原性化学污染；进而该SOD的提取方法能够降低开发成本，是一种具备规模提取植物SOD的方法。
图I是本发明实施例I提供的从野生刺梨中提取SOD的方法流程图。图2是本发明实施例2提供的从野生刺梨中提取SOD的方法流程图。
具体实施例方式下面结合附图对本发明提供的技术方案进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应视为对本发明公开技术内容的限制。申请人:检测种植刺梨和野生刺梨中SOD的含量，种植刺梨含S0D54000U/100g，野生刺梨含SOD ^ 810000U/100go野生刺梨中SOD的含量很高，野生刺梨一般生长在海拔800米到1800米的高度，具有极强的抗异性。一般认为，生物体抗异性越强，SOD的含量就越高。实施例I :以下是对本发明实施例提供的提取方法进行描述。请参考图1，图I是本发明实施例I提供的一种从野生刺梨中提取SOD的方法流程图，该方法包括以下步骤步骤101 :将野生刺梨果粉碎，获得野生刺梨果块。步骤102 :将得到的野生刺梨果块在水中浸提，得到浸提液。步骤103 :将浸提液进行离心分离，取上清液得到SOD粗酶液。步骤104 :将SOD粗酶液进行超滤，过滤掉杂质得到SOD溶液。步骤105 :将SOD溶液进行浓缩，得到SOD浓缩液。步骤106 :将SOD浓缩液离心喷雾干燥得到S0D。该实施例提供的SOD的提取方法是全物理方法提取、分离SOD复合酶，只需要常用的简单设备即可完成，工艺简单，不存在危险；且提取过程中所使用的温度不高，条件温和，成品SOD常温下能够保存；由于采用了生物技术保活工艺，全物理处理工艺，故既无环境污染也没有内原性化学污染；进而该SOD的提取方法能够降低开发成本，是一种具备规模提取植物SOD的方法。用该方法提取出来的产品是Cu. Zn — S0D、Mn — SOD和Fe — SOD三种酶的聚合体。鉴别三种酶的聚合体的方法是电泳法通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据Cu. Zn — S0D、Mn — SOD和Fe—SOD的相对分子质量与所带电荷等的性质差异，在凝胶条上区分成不同的带。实施例2 参考图2，实施例2提供的用野生刺梨果提取SOD的方法，包括以下步骤步骤101 :将野生刺梨果用水清洗。 步骤102 :将野生刺梨果干燥，具体实施方式
为自然晾干，达到含水率为109^20%即可。步骤103 :用粉碎机将野生刺梨果粉碎，用1(T20目的筛子筛分野生刺梨果和杂质，得到野生刺梨果块。步骤104 :称取野生刺梨果块2公斤用纱布松散包好，放入40公斤纯净水溶剂里，加温到55°C保持此温度不变浸提24小时，每2小时人工搅拌一次，得到浸提液。步骤105 :将浸提液离心分离，然后静置2小时，取上层清液即得SOD粗酶液。步骤106 :将SOD粗酶液通过分子量为5000的一级滤膜，除去大部分小分子物质，主要是无机盐和有机酸及多糖，收集一级截留液和一级通过液，用纯净水稀释一级截留液100 倍。步骤107 :将稀释后的一级截留液通过分子量为50000的二级滤膜，收集二级截留液和二级通过液，再用纯净水把通过液稀释100倍。步骤108 :将稀释后的二级通过液通过分子量为20000的三级滤膜，收集三级截留液。将二级截留液、三级截留液合并即为SOD溶液，其主要成分是Cu. Zn — S0D、Mn — SOD和Fe — SOD三种酶的聚合体。步骤109 :用稀释后的一级截留液对SOD溶液进行PH调节，使其PH值达到3. 8。步骤110 :将经过PH调节的SOD溶液减压真空浓缩，温度保持在80°C，浓缩时间18min,得到SOD浓缩液。步骤111 :将SOD浓缩液离心喷雾干燥，离心喷雾干燥机的进风口温度为180°C，这样出料温度可以保持在50°C左右。步骤112:得到 S0D。鉴别三种酶的聚合体的方法是电泳法通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据Cu. Zn — S0D、Mn — SOD和Fe—SOD的相对分子质量与所带电荷等的性质差异，在凝胶条上区分成不同的带。SOD是体内专一清除超氧阴离子自由基的一个抗氧酶，它的清除反应如下 O2 +O2 +2H+ — H202+02SOD通过三条途径确保高效清除(O2‘_)。其一是运用金属辅基形式的多样性，一旦一种酶受阻，就可用另一种来补偿；二是利用在进化上的高度保守，防止发生变异；三是借助与催化有关部位上表现出高度的结构统一性，保证催化功能的顺利进行。
实施例3 提供用野生刺梨果提取SOD的方法，与实施例2除了以下步骤外均相同步骤104 :称取粉碎后的野生刺梨果块2公斤用纱布松散包好，放入100公斤纯净水溶剂里，加温到90°C保持此温度不变浸提8小时，每2小时人工搅拌一次，得到浸提液。步骤106 :将SOD粗酶液通过分子量为10000的一级滤膜，除去大部分小分子物质，主要是无机盐和有机酸及多糖，收集一级截留液和一级通过液，用纯净水稀释一级截留液100倍。步骤107 :将稀释后的一级截留液通过分子量为80000的二级滤膜，收集二级截留液和二级通过液，再用纯净水把通过液稀释100倍。步骤108 :将稀释后的二级通过液通过分子量为40000的三级滤膜，收集三级截留液。将二级截留液、三级截留液合并即为SOD溶液，其主要成分是Cu. Zn — S0D、Mn — SOD和 Fe — SOD三种酶的聚合体。步骤109 :用稀释后的一级截留液对SOD溶液进行PH调节，使其PH值达到4. O。步骤110 :将经过PH调节的SOD溶液减压真空浓缩，温度保持在65°C，浓缩时间30min，得到SOD浓缩液。步骤111 :将SOD浓缩液离心喷雾干燥，离心喷雾干燥机进风口温度160°C，出料温度 20。。。SOD是生物体内防御氧化损伤的一种十分重要的金属酶，作为专一超氧阴离子自由基的清除剂，在疾病的治疗、食品、化妆品、农业等方面具有广泛的应用。实施例4 提供用种植刺梨果提取SOD的方法，与实施例2除了以下步骤外均相同步骤104 :称取粉碎后的种植刺梨果块2公斤用纱布松散包好，放入140公斤纯净水溶剂里，加温到70°C保持此温度不变浸提12小时，每2小时人工搅拌一次，得到浸提液。步骤109 :用稀释后的一级截留液对SOD溶液进行PH调节，使其PH值达到5. 2。步骤110 :将经过PH调节的SOD溶液减压真空浓缩，温度保持在75°C，浓缩时间20min，得到SOD浓缩液。步骤111 :将SOD浓缩液离心喷雾干燥，离心喷雾干燥机进风口温度160°C，出料温度 20。。。用此方法提取出来的SOD为三种酶的综合体，第一种为Cu. Zn—SOD含量为65. 3% ；第二种为Mn — SOD含量为14. 4% ;第三种为Fe — SOD含量为20. 3%。实施例5 提供用野生刺梨果提取SOD的方法，与实施例2除了以下步骤外均相同步骤102 :将野生刺梨果加热烘干，同时每吨野生刺梨果加入6克硫磺做保护剂，最大限度的保留刺梨干果的生物成分及活性物质，达到含水率为109^20%即可停止烘干。野生刺梨果加入硫磺的量可以根据实际需要确定。步骤104 :称取粉碎后的野生刺梨果块2公斤用纱布松散包好，放入100公斤纯净水溶剂里，加温到60°C保持此温度不变浸提8小时，每2小时人工搅拌一次，得到浸提液。步骤109 :用稀释后的一级截留液对SOD溶液进行PH调节，使其PH值达到4. 5。步骤110 :将经过PH调节的SOD溶液减压真空浓缩，温度保持在70°C，浓缩时间20min，得到SOD浓缩液。步骤111 :将SOD浓缩液离心喷雾干燥，离心喷雾干燥机进风口温度160°C，出料温度 20。。。本方法主要是全物理方法提取、分离S0D，只需要常用的简单设备即可完成，工艺简单，不存在危险；且提取过程中所使用的温度不高于200°C，条件温和，成品SOD常温下能够保存；由于采用了生物技术保活工艺，全物理处理工艺，故既无环境污染也没有内原性化学污染；降低开发成本，是一种具备规模提取植物SOD的方法。实施例6 提供用野生刺梨果提取SOD的方法，与实施例2除了以下步骤外均相同步骤102 :将野生刺梨果加热烘干，同时每吨野生刺梨果加入6克硫磺做保护剂，最大限度的保留刺梨干果的生物成分及活性物质，达到含水率为109^20%即可停止烘干。 步骤104 :称取粉碎后的野生刺梨果块2公斤用纱布松散包好，放入100公斤纯净水溶剂里，加温到65°C保持此温度不变浸提24小时，每2小时人工搅拌一次，得到浸提液。步骤109 :用稀释后的一级截留液的野生刺梨汁对SOD溶液进行PH调节，使其PH值达到5.0。步骤110 :将经过PH调节的SOD溶液减压真空浓缩，温度保持在80°C，浓缩时间18min,得到SOD浓缩液。步骤111 :将SOD浓缩液离心喷雾干燥，进风口温度180°C，出料温度50°C。该提取方法在国际市场前景广阔，而且国内市场需求也很大，许多先进国家只承认第三代保健食品，能适应发展的需求和进入WTO及国际市场。为直接利用植物资源的抗氧化产品的生产产业化打开了方便之门。旨在通过对功能食品关键技术的研究与产业化示范，增强我国功能食品的原始创新能力和国际竞争力。本文中应用了具体个例对本发明提供的技术方案进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明提供的技术方案。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰；这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
权利要求
1.一种超氧化物歧化酶SOD的提取方法，其特征在于，包括以下步骤 将刺梨果粉碎，获得刺梨果块； 对刺梨果块进行浸提，得到浸提液； 将浸提液进行离心分离，得到SOD粗酶液； 将含有SOD粗酶液进行超滤，得到SOD溶液； 将SOD溶液浓缩，得到SOD浓缩液； 将SOD浓缩液离心喷雾干燥得到S0D。
2.如权利要求I所述的SOD的提取方法，其特征在于，将SOD浓缩液离心喷雾干燥得到粉末状固体S0D。
3.如权利要求I所述的SOD的提取方法，其特征在于，将野生刺梨果粉碎，获得野生刺梨果块。
4.如权利要求I所述的SOD的提取方法，其特征在于，在6(T70°C的纯净水中对刺梨果块进行恒温浸提8 12h。
5.如权利要求I所述的SOD的提取方法，其特征在于，将SOD粗酶液进行超滤进一步包括 将SOD粗酶液通过一级滤膜，收集一级截留液； 用纯净水稀释一级截留液后再通过二级滤膜，收集二级通过液和二级截留液； 用纯净水稀释二级通过液后再通过三级滤膜，收集三级截留液； 将二级截留液和三级截留液合并得到SOD溶液。
6.如权利要求5所述的SOD的提取方法，其特征在于，一级滤膜分子量为5000 10000，二级滤膜分子量为50000 80000，三级滤膜分子量为20000 40000。
7.如权利要求I至6任一项所述的SOD的提取方法，其特征在于，对SOD溶液进行PH调节，使其范围在3. 8^5. 2之间。
8.如权利要求I至6任一项所述的SOD的提取方法，其特征在于，在将刺梨果粉碎之前，还包括清洗刺梨果的步骤。
9.如权利要求8所述的SOD的提取方法，其特征在于，在清洗之后对刺梨果进行烘干的步骤，且在烘干过程中向刺梨果加硫磺。
10.如权利要求I至6任一项所述的SOD的提取方法，其特征在于，将SOD溶液减压真空浓缩18 30min，得到SOD浓缩液。
全文摘要
本发明公开一种酶的提取方法，具体涉及一种SOD的提取方法。包括以下步骤将刺梨果粉碎，获得刺梨果块；对刺梨果块进行浸提，得到浸提液；将浸提液进行离心分离，得到SOD粗酶液；将SOD粗酶液进行超滤，得到SOD溶液；将SOD溶液浓缩，得到SOD浓缩液；将SOD浓缩液离心喷雾干燥得到SOD。本方法是全物理方法提取SOD，采用常用的简单设备即可完成，工艺简单，不存在危险；且提取过程中所使用的温度不高，条件温和，SOD常温下能够保存；由于采用了生物技术保活工艺，全物理处理工艺，故既无环境污染也没有内原性化学污染；降低开发成本，是一种具备规模提取植物SOD的方法。
文档编号C12N9/02GK102747054SQ201210265598
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月27日 优先权日2012年7月27日
发明者田瑛 申请人:田瑛