用于调节mir-21活性的微rna化合物以及方法

用于调节mir-21活性的微rna化合物以及方法
【专利摘要】本文描述了用于抑制miR-21活性的组合物和方法。这些组合物具有某些产生miR-21活性的有效抑制剂的核苷修饰型态。这些组合物可用于抑制miR-21，以及治疗与miR-21的异常表达相关的疾病，诸如纤维化及癌症。
【专利说明】用于调节MIR-21活性的微RNA化合物以及方法
[0001]本申请要求2011年4月25日提交的美国临时申请案61/478，767号以及2011年12月I日提交的美国临时申请案61/565，779号的优先权益，这些申请案出于任何目的通过引用以其全文结合在此。
发明领域
[0002]本文提供用于调节miR-21活性的方法和组合物。
[0003]相关技术说明
[0004]微RNA (microRNA)亦称为“成熟微RNA”，是在植物及动物的基因组中编码的小型(长约18-24个核苷酸)非编码RNA分子。在某些情况下，高度保守的内源性表达的微RNA通过结合至特定mRNA的3’ -非翻译区(3’ -UTR)来调控基因的表达。已在植物和动物中鉴别出超过1000种不同的微RNA。某些成熟微RNA似乎来源于长度通常为数百个核苷酸的长内源性初级微RNA转录物(亦称为初级微RNA、初级mir、初级miR或初级微RNA前体)(Lee等人，EMBO J.，2002，21 (17)，4663-4670)。
[0005]对微RNA的功能性分析揭示，这些小型非编码RNA促进动物的不同生理过程，包括发育时序、器官发生、分化、成型(patterning)、胚胎发生、生长控制及渐进式细胞死亡。微RNA参与的特定过程的实例包括干细胞分化、神经生成、血管生成、造血作用及胞吐作用(由 Alvarez-Garcia 及 Miska, Development (《发育》),2005, 132, 4653-4662 评述)。
[0006]发明概述
[0007]本文提供包含经修饰寡核苷酸的化合物，其中经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21互补且经修饰寡核苷酸具有本文所述的核苷型态。
[0008]本文提供抑制miR-21活性的方法，包括使细胞与本文所述的化合物接触。在某些实施例中，细胞在活体内。在某些实施例中，细胞在活体外。
[0009]本文提供治疗与miR-21相关的疾病的方法，包括向患有与miR-21相关的疾病的受试者给予本文所述的化合物。在某些实施例中，动物是人类。
[0010]本文所述的化合物被提供用于疗法中。
[0011]本文提供包含由8至22个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态I的至少8个连续核苷:
[0012](R) x-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz
[0013]其中每个R独立地是非双环核苷；X是I至4 ;每个Nb独立地是双环核苷；每个Nq独立地是非双环核苷；并且每个Nz独立地是经修饰的核苷。
[0014]本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态II的至少8个连续核苷:
[0015]Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz
[0016]其中Nm独立地是不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb独立地是双环核苷；每个Nq独立地是非双环核苷；且Nz独立地是经修饰的核苷。
[0017]本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态III的至少8个连续核苷:
[0018](R) x-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz
[0019]其中每个R是非双环核苷；X是I至4 ;每个Nb是双环核苷；每个Nq是非双环核苷；Ny是经修饰的核苷或未经修饰的核苷；且每个Nz是经修饰的核苷。
[0020]本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态IV的至少8个连续核苷:
[0021]Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz
[0022]其中Nm是不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb是双环核苷；每个Nq是非双环核苷；NY是经修饰的核苷或未经修饰的核苷；且Nz是经修饰的核苷。
[0023]本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态V的至少8个连续核苷:
[0024]Nm-Nb- (Nq-Nq-Nb-Nb) 4_Nz
[0025]其中Nm是不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb是双环核苷；每个Nq是非双环核苷；且Nz是经修饰的核苷。
[0026]在核苷型态I或III的某些实施例中，X是1，X是2，X是3，或X是4。
[0027]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰的寡核苷酸包含核苷型态1、
I1、II1、IV或V的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个或22个连续核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰的寡核苷酸由核苷型态1、I1、II1、IV 或 V 之 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21 或 22 个连接的核苷组成。
[0028]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21的核苷碱基序列(SEQ ID NO:1)至少90%互补、至少95%互补或100%互补。
[0029]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，miR-21位置I上的核苷碱基与经修饰寡核苷酸的3’端上的第一核苷碱基配对。
[0030]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷独立地选自LNA核苷、cEt核苷及ENA核苷。
[0031 ] 在本文提供的任何化合物的某些实施例中，至少两个非双环核苷包含彼此不同的糖部分。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷具有相同类型的糖部分。
[0032]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷为cEt核苷。在某些实施例中，cEt核苷是S-cEt核苷。在某些实施例中，cEt核苷是R-cEt核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷是LNA核苷。
[0033]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷、β -D-核糖核苷、2’ -O-甲基核苷、2’ -O-甲氧基乙基核苷及2’ -氟核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷及2’ -O-甲氧基乙基核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷。[0034]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个双环核苷包含非甲基化核苷。[0035]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，不超过2个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些此类实施例中，每个其他非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。[0036]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，5’最末端非双环核苷及3’最末端非双环核苷是2’-0-甲氧基乙基核苷且其他每个非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，两个非双环核苷是2’ -MOE核苷且每个其他非双环核苷是β -D-脱氧核糖核苷。[0037]在核苷型态I或III的某些实施例中，每个核苷R是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在核苷型态I或III的某些实施例中，三个核苷R是2’ -O-甲氧基乙基核苷且一个核苷R是β -D-脱氧核糖核苷。[0038]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，至少一个核苷间键是经修饰的核苷间键。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个核苷间键均为经修饰的核苷间键。在某些实施例中，经修饰的核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键。[0039]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，至少一个核苷间键包含经修饰的核苷碱基。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，每个胞嘧啶均是5-甲基胞嘧啶。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰寡核苷酸的位置2上的胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。[0040]在核苷型态I的某些实施例中，R由四个连接的核苷Nk1-Nk2-Nk3-Nk4组成，其中Nki是2’ -O-甲氧基乙基核苷且Nk2-Nk3-Nk4的每一个是β -D-脱氧核糖核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在核苷型态I的某些实施例中，每个R是2’ -O-甲氧基乙基核苷；Χ是I ;每个Nb是S-cEt核苷；每个炉是β-D-脱氧核糖核苷；且#是2’-0-甲氧基乙基核苷。在核苷型态I的某些实施例中，每个R是2’-O-甲氧基乙基核苷；Χ是I ;每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是2’-O-甲氧基乙基核苷；且Nz是2’-O-甲氧基乙基核苷。在核苷型态I的某些实施例中，每个R是2’-O-甲氧基乙基核苷；Χ是I ;每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是S_cEt核苷。在核苷型态I的某些实施例中，每个R是2’ -O-甲氧基乙基核苷；X是I ;每个Nb是LNA核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在核苷型态I的某些实施例中，每个R是2’ -O-甲氧基乙基核苷；Χ是I ;每个Nb是LNA核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是LNA核苷。[0041]在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个炉是2’ -O-甲氧基乙基核苷；且Nz是2’-O-甲氧基乙基核苷。在核苷型态I的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；每个N是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是S-cEt核苷。在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是LNA核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’-0_甲氧基乙基核苷。在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是LNA核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是LNA核苷。
[0042]在核苷型态III的某些实施例中，每个R是2’-0_甲氧基乙基核苷；X是I ;每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；ΝΥ是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’-O-甲氧基乙基核苷。在核苷型态III的某些实施例中，每个R是2’-O-甲氧基乙基核苷；Χ是I ;每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；ΝΥ是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是S-cEt核苷。在核苷型态III的某些实施例中，每个R是2’-O-甲氧基乙基核苷；X是I ;每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；ΝΥ是S-cEt核苷；且Nz是S-cEt核苷。
[0043]在核苷型态IV的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；ΝΥ是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -0-甲氧基乙基核苷。在核苷型态IV的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；ΝΥ是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是S-cEt核苷。在核苷型态IV的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；NY是S_cEt核苷；且Nz是S-cEt核苷。
[0044]在核苷型态V的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。
[0045]在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有SEQ ID NO:3的核苷碱基序列，其中序列中的每个T独立地选自T和U。在本文提供的任何化合物的某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有SEQ ID Ν0:4的核苷碱基序列，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0046]本文提供抑制miR-21活性的方法，包括使细胞与本文提供的化合物接触。在某些实施例中，细胞在活体内。在某些实施例中，细胞在活体外。在某些实施例中，细胞是成纤维细胞、过度增殖性细胞、角化细胞或乏氧细胞。在某些实施例中，成纤维细胞是过度增殖性成纤维细胞。
[0047]本文提供减少细胞中的胶原蛋白表达的方法，包括使细胞与本文提供的化合物接触。
[0048]本文提供治疗与miR-21相关的疾病、预防或延迟其发作的方法，包括向患有这种疾病的受试者给予本文提供的任何化合物。
[0049]在某些实施例中，疾病为纤维化。在某些实施例中，纤维化为肾纤维化、肺纤维化、肝纤维化、心脏纤维化、皮肤纤维化、年龄相关性纤维化、脾纤维化、硬皮病或移植后纤维化。
[0050]在某些实施例中，纤维化为肾纤维化且存在于患有选自以下项的疾病的受试者中:肾小球硬化、肾小管间质纤维化、IgA肾病、间质纤维化/肾小管萎缩；慢性肾损伤、肾小球疾病、肾小球肾炎、糖尿病、特发性局灶节段性肾小球硬化、膜性肾病、塌陷性肾小球病、慢性复发性肾脏感染以及终末期肾病。在某些实施例中，肾纤维化由肾脏的急性或反复性创伤引起。
[0051]在某些实施例中，纤维化是肝纤维化且存在于患有选自以下项的疾病的受试者中:慢性肝损伤、肝炎感染、非酒精性脂肪变性肝炎以及肝硬化。[0052]在某些实施例中，肺纤维化是特发性肺纤维化，或受试者患有慢性阻塞性肺病。
[0053]在某些实施例中，疾病是发炎性疾病。
[0054]本文提供促进受试者的伤口愈合的方法,包括向具有急性或慢性伤口的受试者给予本文提供的任何化合物。在某些实施例中，慢性伤口是急性或慢性手术伤口、穿透伤口、撕脱伤、挤压伤、剪力损伤、烧伤、撕裂、咬伤、动脉性溃疡、静脉性溃疡、褥疮及糖尿病性溃疡。在某些实施例中，化合物被局部给予伤口。
[0055]本文提供治疗受试者的纤维增生性病症的方法，包括向受试者给予本文提供的任何化合物。
[0056]本文提供的任何方法可包括选择一种或多种组织中的miR-21表达升高的受试
者。
[0057]在某些实施例中，向受试者给予本文提供的任何化合物减少了胶原蛋白表达。
[0058]在某些实施例中，受试者需要改善的器官功能，其中该器官功能选自心脏功能、肺功能、肝功能以及肾功能。在某些实施例中，给予本文提供的任何化合物改善受试者的器官功能，其中该器官功能选自心脏功能、肺功能、肝功能以及肾功能。
[0059]本文提供的任何方法包括评估受试者的肾功能，可包括测量受试者血液中的血液尿素氮；测量受试者血液中的肌酐；测量受试者的肌酐清除率；测量受试者的蛋白尿；测量受试者的白蛋白:Cr比率；和/或测量受试者的尿排泄量。
[0060]本文提供的任何方法可包括评估受试者的肝功能，可包括:测量受试者血液中的丙氨酸转氨酶含量；测量受试者血液中的天冬氨酸转氨酶含量；测量受试者血液中的胆红素含量；测量受试者血液中的白蛋白含量；测量受试者的凝血酶原时间；测量受试者的腹水；和/或测量受试者的脑病。
[0061]本文提供的任何方法可包括评估受试者的肺功能，可包括:测量受试者的肺活量；测量受试者的用力肺活量；测量受试者的一秒内用力呼气量；测量受试者的峰值呼气流速；测量受试者的用力呼气流量；测量受试者的最大随意通气量；测定受试者的一秒内用力呼气量与用力肺活量的比率；测量受试者的通气/灌注比率；测量受试者的氮气廓清；测量受试者一个或多个肺中的绝对空气容积。
[0062]本文提供的任何方法可包括评估受试者的心脏功能，可包括:测量受试者的心输出量；测量受试者的心搏排血量；测量受试者的平均收缩期射血率；测量受试者的收缩期血压；测量受试者的左心室射血分数；测定受试者的心搏指数；测定受试者的心脏指数；测量受试者的左心室缩短百分率；测量受试者的周径纤维平均缩短速度；测量受试者的左心室流入血流速度图；测量受试者的肺静脉血流速度图；测量受试者二尖瓣环的舒张早期峰值速度。
[0063]本文提供的任何方法可包括向受试者给予至少一种选自以下项的治疗剂:抗炎剂、免疫抑制剂、抗糖尿病剂、地高辛(digoxin)、血管舒张药、血管紧张素II转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂(ARB)、钙通道阻滞剂、异山梨醇二硝酸酯、肼屈嗪(hydralazine)、硝酸酯、肼屈嗪、β -阻滞剂、利钠肽、类肝素以及结缔组织生长因子抑制剂。在某些实施例中，抗炎剂是非类固醇抗炎剂，其中该非类固醇抗炎剂可任选地选自布洛芬(ibupiOfen)、C0X-1抑制剂或C0X-2抑制剂。在某些实施例中，免疫抑制剂选自皮质类固醇、环憐酸胺(cyclophosphamide)以及霉酚酸吗啉乙酯(mycophenolate mofetil)。在某些实施例中，抗炎剂是皮质类固醇，其中该皮质类固醇可任选地为强的松(prednisone)。在某些实施例中，血管紧张素II转化酶(ACE)抑制剂选自卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、赖诺普利(Iisinopril)、贝那普利(benazepril)、喹那普利(quinapril)、福辛普利(fosinopril)以及雷米普利(ramipril)。在某些实施例中，血管紧张素II受体阻滞剂(ARB)选自坎地沙坦(candesartan)、伊贝沙坦(irbesartan)、奥美沙坦(olmesartan)、洛沙坦(1sartan)、缴沙坦(valsartan)、替米沙坦(telmisartan)以及依普沙坦(eprosartan)。
[0064]在某些实施例中，疾病为癌症。在某些实施例中，癌症是肝癌、乳癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、脑癌、血液性癌症、胰脏癌、头颈癌、舌癌、胃癌、皮肤癌或甲状腺癌。在某些实施例中，肝癌是肝细胞癌。在某些实施例中，脑癌是多形性胶质母细胞瘤。在某些实施例中，血液性癌症是急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin’ s lymphoma)或非霍奇金氏淋巴瘤(non-hodgkin，s lymphoma)。
[0065]在某些实施例中，本文提供的方法包括向受试者给予至少一种其他抗癌疗法。在某些实施例中，抗癌疗法为DNA损伤剂、增殖抑制剂、抗叶酸剂、生长因子受体抑制剂、抗血管生成剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、激酶抑制剂、生长因子抑制剂、细胞毒性剂、放射疗法或手术切除肿瘤。在某些实施例中，DNA损伤剂是1，3-双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲、白消安(busulfan)、卡钼(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺钼(cisplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、达卡巴嗪(dacarbazine)、道诺霉素(daunorubicin)、小红毒(doxorubicin)、表柔t匕星(epirubicin)、依托泊音(etoposide)、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊立替康(irinotecan)、洛莫司汀(1mustine)、氮芥(mechlorethamine)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素 C (mitomycin C)、米托蒽醌(mitoxantrone)、奥沙利钼(oxaliplatin)、替莫唑胺(temozolomide)或拓扑替康(topotecan)。在某些实施例中，抗叶酸剂是甲氨蝶呤(methotrexate)、氨基蝶呤(aminopterin)、胸苷酸合成酶、丝氨酸轻甲基转移酶、叶酰聚谷氨酰基合成酶、g_谷氨酰基水解酶、甘氨酰胺-核糖核苷酸转甲酰基酶、甲酰四氢叶酸、氨基-咪唑-甲酰胺-核糖核苷酸转甲酰基酶、5-氟尿嘧啶或叶酸转运体。在某些实施例中，生长因子受体抑制剂为埃罗替尼(erlotinib)或吉非替尼(gefitinib)。在某些实施例中，血管生成抑制剂是贝伐单抗(bevacizumab)、沙利度胺(thalidomide)、羧酰氨基三唑、TNP-470、CMlOUIFN-α、血小板因子-4、苏拉明(suramin)、SU5416、血小板反应蛋白(thrombospondin)、VEGFR拮抗剂、软骨源性血管生成抑制因子、基质金属蛋白酶抑制剂、血管生成抑制素(angiostatin)、内皮抑素(endostatin)、2_ 甲氧基雌二醇、替可加兰(tecogalan)、四硫钼酸盐、催乳激素或利诺胺(linomide)。在某些实施例中，激酶抑制剂是贝伐单抗、BIBW2992、西妥昔单抗(cetuximab)、伊马替尼(imatinib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、吉非替尼、兰尼单抗(ranibizumab)、哌加他尼(pegaptanib)、索拉菲尼(sorafenib)、达沙替尼(dasatinib)、舒尼替尼(sunitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、尼罗替尼(nilotinib)、拉帕替尼(Iapatinib)、帕尼单抗(panitumumab)、凡德他尼(vandetanib)、E7080、帕唑帕尼(pazopanib)、莫立替尼(mubritinib)或福马替尼(fostamatinib)。 [0066]在某些实施例中，向患有癌症的受试者给予使得肿瘤尺寸和/或肿瘤数减小。在某些实施例中，向患有癌症的受试者给予预防或延迟肿瘤尺寸和/或肿瘤数增加。在某些实施例中，向患有癌症的受试者给予预防或减缓转移性进展。在某些实施例中，向患有癌症的受试者给予延长受试者的总体存活时间和/或无进展存活期。在某些实施例中，本文提供的方法包括选择血清α -胎蛋白升高和/或血清脱-Y -羧基凝血酶原升高的受试者。在某些实施例中，本文提供的方法包括使血清α -胎蛋白和/或血清脱-Υ -羧基凝血酶原降低。在某些实施例中，本文提供的方法包括选择肝功能异常的动物。
[0067]在本文提供的任何方法中，受试者是人。
[0068]在本文提供的任何方法中，化合物作为药物组合物形式存在。
[0069]本文提供的任何化合物可用于疗法中。本文提供的任何化合物可用于治疗纤维化。本文提供的任何化合物可用于促进伤口愈合。本文提供的任何化合物可用于治疗癌症。本文提供的任何化合物可用于预防和/或延迟转移发作。
[0070]本文提供的任何化合物可用于治疗心脏病。
[0071]本文提供的任何化合物可用于制备药物。本文提供的任何化合物可用于制备治疗纤维化的药物。本文提供的任何化合物可用于制备促进伤口愈合的药物。本文提供的任何化合物可用于制备治疗癌症的药物。本文提供的任何化合物可用于制备预防和/或延迟转移发作的药物。
[0072]附图简要说明
[0073]图1展示如实例5中所述，给予抗miR21化合物的缺血再灌注/肾切除术(IR/Nx)模型小鼠的尿白蛋白:肌酐比率(ACR, μ gAlb/mgCr) 0
[0074]图2展示如实例6中所述，在被给予抗miR21化合物的UUO模型小鼠肾中的(A)胶原蛋白IAl和⑶胶原蛋白3A1表达。
[0075]详细说明
[0076]除非另外规定，否则本文中所用的所有技术及科学术语具有与本领域的技术人员通常所了解的相同的意义。除非提供特定定义，否则结合本文所述的分析化学、合成有机化学以及医疗及药物化学使用的命名法以及这些领域的程序及技术是本领域中熟知的和通常所使用的。在本文中的术语存在复数个定义的情况下，以本部分中的定义为准。可使用化学合成、化学分析、药物制备、调配和递送以及治疗受试者的标准技术。某些此类技术和程序可见于例如以下文献中:“Carbohydrate Modifications in Antisense Research”(“在反义研究中碳水化合物修饰”)，Sangvi及Cook编，American Chemical Society (《美国化学学会》),Washington D.C.(华盛顿)，1994 ；及 “Remington’s PharmaceuticalSciences”(《雷明顿药物科学》)，Mack Publishing C0.(Mack出版公司)，Easton (伊斯顿)，Pa.(宾夕法尼亚州)，第18版，1990;且其出于任何目的通过引用结合在此。除非另外说明，否则本文整篇披露中提及的所有专利、专利申请、公开申请及公开案、GENBANK序列、网站及其他公开材料在允许时均通过引用以其全文结合在此。在提及URL或其他类似识别符或地址的情况下，应了解这种识别符可改变并且因特网上的特定信息可改变，但可通过搜寻因特网找到等效信息。对其的提及证明这种信息的可用性及公开传播。
[0077]在披露和描述本发明的组合物和方法之前，应了解本文所用的术语仅出于描述特定实施例的目的而不欲具有限制性。须注意，除非上下文另外明确规定，否则如本说明书和所附权利要求书中所用的单数形式“一个(a)”、“一种(an)”以及“该(the) ”包括复数个指示物。
[0078]定义
[0079]“纤维化”意指在器官或组织中形成或产生过量纤维结缔组织。在某些实施例中，纤维化作为修复或反应性过程出现。在某些实施例中，纤维化响应于损害或损伤而出现。术语“纤维化”应理解为在器官或组织中作为修复或反应性过程形成或产生过量纤维结缔组织，而非形成纤维组织作为器官或组织的正常组分。
[0080]“怀疑患有……的受试者”意指展现疾病的一种或多种临床指标的受试者。
[0081]“怀疑患有纤维化的受试者”意指展现纤维化的一种或多种临床指标的受试者。
[0082]“成纤维细胞”意指产生结缔组织的细胞。
[0083]“纤维增生性病症”意指特征在于成纤维细胞的过度增殖和/或活化的病症。
[0084]“肝癌”意指肝脏的恶性肿瘤，为原发癌或转移癌。在某些实施例中，肝癌包括(但不限于)起因于肝细胞的癌症，诸如肝细胞瘤和肝细胞癌；纤维板层癌；及胆管细胞癌(或胆管癌)。
[0085]“转移”意指癌症自其首先产生为原发性肿瘤的位置扩散至体内其他位置的过程。原发性肿瘤的转移性进展反映多个阶段，包括自相邻原发性肿瘤细胞解离、在循环中存活以及在继发位置生长。
[0086]“总体存活时间”意指受试者在诊断出疾病或针对疾病进行治疗后存活的时间。在某些实施例中，疾病是癌症。在一些实施例中，总体存活时间是诊断后的存活期。在一些实施例中，总体存活时间是治疗开始后的存活期。
[0087]“无进展存活期”意指患有疾病的受试者在疾病不发生恶化的情况下存活的时间。在某些实施例中，无进展存活期系是通过对疾病进行分期或评分来评定。在某些实施例中，患有肝癌之受试者的无进展存活期系通过评估肿瘤尺寸、肿瘤数和/或转移来评定。
[0088]“抗miR剂”意指具有与微RNA互补的核苷碱基序列的寡核苷酸。在某些实施例中，抗HiiR剂为经修饰的寡核苷酸。
[0089]当“miR-X”表示特定微RNA时，“抗miR-X剂”意指具有与miR-X互补的核苷碱基序列的寡核苷酸。在某些实施例中，抗miR-X剂与miR-X完全互补。在某些实施例中，抗miR-X剂与miR-X至少80%、至少85%、至少90%或至少95%互补。在某些实施例中，抗miR-X剂是经修饰的寡核苷酸。
[0090]“miR-21”意指具有核苷碱基序列UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA(SEQ ID NO:1)的成熟miRNA。
[0091 ] “miR-21 茎-环序列”意指具有核苷碱基序列 UGUCGGGUAGCUUAUCAGACUGAUGUUGACUGUUGAAUCUCAUGGCAACACCAGUCGAUGGGCUGUCUGACA(SEQ ID NO:2)的茎-环序列。
[0092]“靶标核酸”意指这样一种核酸:寡聚化合物被设计为与该核酸杂交。
[0093]“靶向”意指设计并且选择将与靶标核酸杂交的核苷碱基序列的过程。
[0094]“靶向于”意指具有允许与靶标核酸杂交的核苷碱基序列。
[0095]“祀标卩齿合(target engagement) ”意指寡核苷酸同与其互补的微RNA以改变该微RNA的活性、表达或含量的方式相互作用。在某些实施例中，靶标啮合意指抗miR剂同与其互补的微RNA相互作用，使得该微RNA的活性受到抑制。
[0096]“调节”意指扰动功能、量或活性。在某些实施例中，调节意指功能、量或活性增加。在某些实施例中，调节意指功能、量或活性降低。
[0097]“表达”意指基因所编码的信息借以转化为细胞中存在和运转的结构的任何功能和步骤。
[0098]“5’靶标位点”意指靶标核酸中与特定寡核苷酸的3’最末端核苷碱基互补的核苷喊基。
[0099]“3’靶标位点”意指靶标核酸中与特定寡核苷酸的5’最末端核苷碱基互补的核苷喊基。
[0100]“区”意指核酸内一部分连接的核苷。在某些实施例中，寡核苷酸具有与靶标核酸的区互补的核苷碱基序列。例如，在某些此类实施例中，寡核苷酸与微RNA茎-环序列的区互补。在某些此类实施例中，寡核苷酸与微RNA茎-环序列的区完全互补。
[0101]“区段”意指区的较小部分或子部分。
[0102]“核苷碱基序列”意指寡聚化合物或核酸中连续核苷碱基的次序，通常按5’至3’方向列出，而与任何糖、键和/或核苷碱基修饰无关。
[0103]“连续核苷碱基”意指核酸中彼此紧邻的核苷碱基。
[0104]“核苷碱基互补 性”意指两个核苷碱基经由氢键连结非共价配对的能力。
[0105]“互补”意指一个核酸能够与另一核酸或寡核苷酸杂交。在某些实施例中，互补指寡核苷酸能够与靶标核酸杂交。
[0106]“完全互补”意指寡核苷酸的每个核苷碱基均能够与靶标核酸中每个相应位置处的核苷碱基配对。在某些实施例中，寡核苷酸与微RNA完全互补，亦即寡核苷酸的每个核苷碱基与微RNA中相应位置处的核苷碱基均互补。在某些实施例中，每个核苷碱基与微RNA茎-环序列的区内的核苷碱基均具有互补性的寡核苷酸与该微RNA茎-环序列完全互补。
[0107]“互补性百分比”意指寡核苷酸中与靶标核酸的等长部分互补的核苷碱基的百分率。互补性百分比通过将寡核苷酸中与靶标核酸中相应位置处的核苷碱基互补的核苷碱基的数目除以寡核苷酸中核苷碱基的总数来计算。
[0108]“一致性百分比”意指第一核酸中与第二核酸中相应位置处的核苷碱基一致的核苷碱基的数目除以第一核酸中核苷碱基的总数。在某些实施例中，第一核酸为微RNA且第二核酸为微RNA。在某些实施例中，第一核酸为寡核苷酸且第二核酸为寡核苷酸。
[0109]“杂交”意指通过核苷碱基互补性而发生的互补核酸的退火。
[0110]“错配”意指第一核酸中的核苷碱基不能与第二核酸中相应位置处的核苷碱基配对。
[0111]“一致”在核苷碱基序列的情况下意指具有相同核苷碱基序列，而与糖、键和/或核苷碱基修饰无关且与所存在的任何嘧啶的甲基状态无关。
[0112]“微RNA”意指长度在18与25个核苷碱基之间的内源性非编码RNA，它是由酶Dicer裂解微RNA前体的产物。成熟微RNA的实例可见于称为miRBase的微RNA数据库中(http://microrna.sanger.ac.uk/)。在某些实施例中，微 RNA 缩写为“微 RNA” 或“miR”。
[0113]“微RNA前体”或“miR前体”意指具有发夹结构的非编码RNA，其为由称为Drosha的双链RNA特异性核糖核酸酶裂解初级miR的产物。
[0114]“茎-环序列”意指具有发夹结构且含有成熟微RNA序列的RNA。微RNA前体序列及茎-环序列可能重叠。茎-环序列的实例可见于称为miRBase的微RNA数据库中(http://microrna.sanger.ac.uk/)。
[0115]“初级微RNA”或“初级miR”意指具有发夹结构的非编码RNA，其为双链RNA特异性核糖核酸酶Drosha的底物。
[0116]“微RNA前体”意指来源于基因组DNA且包含含一个或多个微RNA序列的非编码结构化RNA的转录物。例如，在某些实施例中，微RNA前体是微RNA前体。在某些实施例中，微RNA前体是初级微RNA。
[0117]“微RNA调控的转录物”意指受微RNA调控的转录物。
[0118]“单顺反子转录物”意指含有单一微RNA序列的微RNA前体。
[0119]“多顺反子转录物”意指含有两个或两个以上微RNA序列的微RNA前体。[0120]“种子序列”意指包含成熟微RNA序列的5’端的核苷碱基I至9中6至8个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
[0121]“种子匹配序列”意指与种子序列互补并且长度与种子序列相同的核苷碱基序列。
[0122]“寡聚化合物”意指包含复数个连接的单体亚基的化合物。寡聚化合物包括寡核苷酸。
[0123]“寡核苷酸”意指包含复数个连接的核苷的化合物，其中各核苷可彼此独立地经修饰或未经修饰。
[0124]“天然存在的核苷间键”意指核苷之间的3’至5’磷酸二酯键。
[0125]“天然糖”意指DNA (2’ -H)或RNA (2’ -0H)中存在的糖。
[0126]“核苷间键”意指相邻核苷之间的共价键。
[0127]“连接的核苷”意指由共价键连接的核苷。
[0128]“核苷碱基”意指能够与另一核苷碱基非共价配对的杂环部分。
[0129]“核苷”意指连接于糖部分的核苷碱基。
[0130]“核苷酸”意指具有共价连接于核苷的糖部分的磷酸酯基的核苷。
[0131]“包含由多个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物”意指包括具有指定数目的连接核苷的经修饰寡核苷酸的化合物。因此，该化合物可包括另外的取代基或结合物。除非另外说明，否则该化合物不包括除寡核苷酸的那些核苷以外的任何其他核苷。
[0132]“包含由多个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物”意指包括具有指定数目的连接核苷的经修饰寡核苷酸的化合物。因此，该化合物可包括另外的取代基或结合物。除非另外说明，否则该化合物不包括除经修饰寡核苷酸的那些核苷以外的任何其他核苷。
[0133]“经修饰的寡核苷酸”意指相对于天然存在的末端、糖、核苷碱基和/或核苷间键具有一种或多种修饰的寡核苷酸。经修饰的寡核苷酸可包含未经修饰的核苷。
[0134]“单链经修饰寡核苷酸”意指未与互补链杂交的经修饰寡核苷酸。
[0135]“经修饰的核苷”意指与天然存在的核苷相比具有任何变化的核苷。经修饰的核苷可具有经修饰的糖及未经修饰的核苷碱基。经修饰的核苷可具有经修饰的糖及经修饰的核苷碱基。经修饰的核苷可具有天然糖以及经修饰的核苷碱基。在某些实施例中，经修饰的核苷是双环核苷。在某些实施例中，经修饰的核苷是非双环核苷。
[0136]“经修饰的核苷间键”意指与天然存在的核苷间键相比存在任何变化。
[0137]“硫代磷酸酯核苷间键”意指核苷间一个非桥连原子是硫原子的键。
[0138]“经修饰的糖部分”意指与天然糖相比的取代和/或任何变化。[0139]“未经修饰的核苷碱基”意指RNA或DNA的天然存在的杂环碱基:嘌呤碱基腺嘌呤(A)及鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)(包括5-甲基胞嘧啶)及尿嘧啶⑶。
[0140]“5-甲基胞嘧啶”意指包含连接于5位的甲基的胞嘧啶。
[0141]“非甲基化胞嘧啶”意指不具有连接于5位的甲基的胞嘧啶。
[0142]“经修饰的核苷碱基”意指不为未经修饰的核苷碱基的任何核苷碱基。
[0143]“呋喃醣基”意指包含由四个碳原子及一个氧原子组成的5员环的结构。
[0144]“天然存在的呋喃醣基”意指如在天然存在的RNA中所发现的呋喃核糖基或如在天然存在的DNA中所发现的脱氧呋喃核糖基。
[0145]“糖部分”意指天然存在的呋喃醣基或经修饰的糖部分。
[0146]“经修饰的糖部分”意指经取代的糖部分或糖替代物。
[0147]“经取代的糖部分”意指不为天然存在的呋喃醣基的呋喃醣基。经取代的糖部分包括(但不限于)在天然存在的呋喃醣基的2’位、5’位和/或4’位包含修饰的糖部分。某些经取代的糖部分是双环糖部分。
[0148]“糖替代物”意指不 包含呋喃醣基且能够置换核苷中天然存在的呋喃醣基的结构，所述置换使得所得核苷能够(I)并入寡核苷酸中及(2)与互补核苷杂交。此类结构包括呋喃醣基的相对简单的变化，诸如包含不同数目的原子的环(例如4员、6员或7员环)；呋喃醣基的氧置换为非氧原子(例如碳、硫或氮)；或原子数变化及置换氧两者。此类结构还可包含对应于针对经取代的糖部分所述的取代的取代(例如可任选地包含其他取代基的6员碳环双环糖替代物)。糖替代物还包括更复杂的糖置换(例如肽核酸的非环系统)。糖替代物包括(但不限于)吗啉基、环己烯基及环己醣醇(cyclohexitol)。
[0149]“2’ -O-甲基糖”或“2’ -OMe糖”意指在2’位具有O-甲基修饰的糖。
[0150]“2’ -O-甲氧基乙基糖”或“2’ -MOE糖”意指在2’位具有O-甲氧基乙基修饰的糖。
[0151]“2’-O-氟”或“2’-F”意指在2’位具有氟修饰的糖。
[0152]“双环糖部分”意指包含4至7员环的经修饰糖部分(包括(但不限于)呋喃醣基)，其包含连接该4至7员环的两个原子的桥键以形成第二环，从而产生双环结构。在某些实施例中，4至7员环是糖环。在某些实施例中,4至7员环是呋喃醣基。在某些此类实施例中，桥键连接呋喃醣基的2’碳与4’碳。
[0153]“锁核酸(LNA)糖部分”意指在4’与2’呋喃醣环原子之间包含(CH2)-O桥的经取代的糖部分。
[0154]“ΕΝΑ糖部分”意指在4’与2’呋喃醣环原子之间包含(CH2)2-O桥的经取代的糖部分。
[0155]“约束乙基(cEt)糖部分”意指在4’与2’呋喃醣环原子之间包含CH(CH3)-O桥的经取代的糖部分。在某些实施例中，CH(CH3)-O桥约束呈S型取向。在某些实施例中，(CH2)2-O约束呈R型取向。
[0156]“S-cEt糖部分”意指在4’与2’呋喃醣环原子之间包含S型限制性CH(CH3) -O桥的经取代的糖部分。
[0157]“R-cEt糖部分”意指在4’与2’呋喃醣环原子之间包含R型限制性CH(CH3) -O桥的经取代的糖部分。[0158]“2’ -O-甲基”核苷意指具有2’ -O-甲基糖修饰的2’位上经修饰的核苷。
[0159]“2’-O-甲氧基乙基核苷”意指具有2’-O-甲氧基乙基糖修饰的2’位上经修饰的核苷。2’-O-甲氧基乙基核苷可包含经修饰或未经修饰的核苷碱基。
[0160]“2’ -氟核苷”意指具有2’ -氟糖修饰的2’位上经修饰的核苷。2’ -氟核苷可包含经修饰或未经修饰的核苷碱基。
[0161]“双环核苷”意指具有双环糖部分的2’位上经修饰的核苷。双环核苷可具有经修饰或未经修饰的核苷碱基。
[0162]“cEt核苷”意指包含cEt糖部分的核苷。cEt核苷可包含经修饰或未经修饰的核昔喊基。
[0163]“S-cEt核苷”意指包含S-cEt糖部分的核苷。
[0164]“R-cEt核苷”意指包含R-cEt糖部分的核苷。
[0165]“非双环核苷”意指具有除双环糖以外的糖的核苷。在某些实施例中，非双环核苷包含天然存在的糖。在某些实施例中，非双环核苷包含经修饰的糖。在某些实施例中，非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。在某些实施例中，非双环核苷是2’-O-甲氧基乙基核苷。
[0166]“ β -D-脱氧核糖核苷”意指天然存在的DNA核苷。β -D-脱氧核糖核苷可包含经修饰或未经修饰的核苷碱基。 [0167]“ β -D-核糖核苷”意指天然存在的RNA核苷。β -D-核糖核苷可包含经修饰或未经修饰的核苷碱基。
[0168]“LNA核苷”意指包含LNA糖部分的核苷。
[0169]“ΕΝΑ核苷”意指包含ENA糖部分的核苷。
[0170]“基序”意指寡核苷酸中经修饰和/或未经修饰的核苷碱基、糖和/或核苷间键的型态。在某些实施例中，基序为核苷型态。
[0171]“核苷型态”意指经修饰的寡核苷酸或其区中核苷修饰的型态。核苷型态是描述寡核苷酸中核苷修饰的排列的基序。
[0172]“完全修饰的寡核苷酸”意指每个核苷碱基、每个糖和/或每个核苷间键均经修饰。
[0173]“均一修饰的寡核苷酸”意指在整个经修饰的寡核苷酸中每个核苷碱基、每个糖和/或每个核苷间键均具有相同修饰。
[0174]“稳定化修饰”意指使经修饰的寡核苷酸在核酸酶存在下的稳定性相对于由磷酸二酯核苷间键连接的2’ -脱氧核苷所提供的稳定性有所增强的核苷修饰。例如，在某些实施例中，稳定化修饰为稳定化核苷修饰。在某些实施例中，稳定化修饰为核苷间键修饰。
[0175]“稳定化核苷”意指经修饰以使寡核苷酸的核酸酶稳定性相对于由2’ -脱氧核苷提供的稳定性有所增强的核苷。在一个实施例中，稳定化核苷是2’位上经修饰的核苷。
[0176]“稳定化核苷间键”意指使寡核苷酸的核酸酶稳定性相对于由磷酸二酯核苷间键提供的稳定性有所改良的核苷间键。在一个实施例中，稳定化核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键。
[0177]“受试者”意指选用于治疗或疗法的人类或非人类动物。
[0178]“有需要的受试者”意指受试者被鉴别为需要疗法或治疗的状态。
[0179]“怀疑患有……的受试者”意指展现疾病的一种或多种临床指标的受试者。
[0180]“给予”意指向受试者提供医药药剂或组合物，且包括(但不限于)由医学专业人员给予以及自给予。
[0181 ] “肠胃外给予”意指经由注射或输注给予。
[0182]肠胃外给予包括(但不限于)皮下给予、静脉内给予或肌肉内给予。
[0183]“皮下给予”意指恰给予于皮肤下方。
[0184]“静脉内给予”意指给予至静脉中。
[0185]“心脏内给予”意指给予至心脏中。在某些实施例中，心脏内给予借助于导管进行。在某些实施例中，心脏内给予借助于开心手术进行。
[0186]“肺部给予”意指给予至肺部。
[0187]“并行给予”系指两种药剂以其两者的药理学作用在患者体内同时表现的任何方式共同给予。并行给予不需要该两种药剂于单一药物组合物中、以相同剂型或通过相同给药途径给予。两种药剂的作用本身无需同时表现。这些作用仅需重叠一段时间而无需共同延长。
[0188]“持续时间”意指活性或事件持续的时段。在某些实施例中，治疗的持续时间是给予医药药剂或药物组合物的剂量的时段。
[0189]“疗法”意指疾病治疗方法。在某些实施例中，疗法包括(但不限于)化学疗法、放射疗法或给予医药药剂。
[0190]“治疗”意指 施用一种或多种用于治愈或改善疾病的特定程序。在某些实施例中，特定程序为给予一种或多种医药药剂。
[0191]“改善”意指减轻病状或疾病的至少一种指标的严重性。在某些实施例中，改善包括延迟或减缓病状或疾病的一种或多种指标的进展。指标的严重性可通过本领域的技术人员已知的主观或客观量度来确定。
[0192]“有产生……的风险”意指受试者易于产生病状或疾病的状态。在某些实施例中，有产生病状或疾病的风险的受试者展现该病状或疾病的一种或多种症状，但并不展现足以诊断为患有该病状或疾病的数目的症状。在某些实施例中，有产生病状或疾病的风险的受试者展现该病状或疾病的一种或多种症状，但程度轻于诊断为患有该病状或疾病所需的程度。
[0193]“预防……发作”意指预防有产生疾病或病状的风险的受试者产生该病状或疾病。在某些实施例中，有产生疾病或病状的风险的受试者接受与已患该疾病或病状的受试者所接受的治疗类似的治疗。
[0194]“延迟……发作”意指延迟有产生疾病或病状的风险的受试者产生该病状或疾病。在某些实施例中，有产生疾病或病状的风险的受试者接受与已患该疾病或病状的受试者所接受的治疗类似的治疗。
[0195]“治疗剂”意指用于治愈、改善或预防疾病的医药药剂。
[0196]“剂量”意指单次给药中所提供的医药药剂的指定量。在某些实施例中，剂量可以两次或两次以上快速注射(bolus)、片剂或注射来给予。例如，在需要皮下给予的某些实施例中，所要剂量所需的体积不易通过单次注射提供。在此类实施例中，可使用两次或两次以上注射来达成所要剂量。在某些实施例中，剂量可以两次或两次以上注射给予以使受试者的注射部位反应最小。在某些实施例中，剂量是以缓慢输注形式给予。
[0197]“剂量单位”意指提供医药药剂时所采用的形式。在某些实施例中，剂量单位为容纳冻干寡核苷酸的小瓶。在某些实施例中，剂量单位为容纳复原寡核苷酸的小瓶。
[0198]“治疗有效量”是指医药药剂向动物提供治疗益处的量。
[0199]“药物组合物”意指包括医药药剂的适于给予受试者的物质的混合物。例如，药物组合物可包含无菌水溶液。
[0200]“医药药剂”意指在给予受试者时提供治疗作用的物质。
[0201]“活性医药成分”意指药物组合物中提供所要作用的物质。
[0202]“器官功能改善”意指器官功能朝向正常限度变化。在某些实施例中，通过测量受试者血液中存在的分子来评定器官功能。例如，在某些实施例中，肝功能改善是通过血液肝转氨酶含量降低来测量。
[0203]“可接受的安全性概况”意指临床上可接受的限度内的副作用型态。
[0204]“副作用”意指除所要作用以外的归因于治疗的生理反应。在某些实施例中，副作用包括(但不限于)注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝中毒、肾中毒、中枢神经系统异常以及肌病。此类副作用可直接或间接检测。例如，血清中的转氨酶含量升高可指示肝中毒或肝功能异常。例如，胆红素增加可指示肝中毒或肝功能异常。
[0205]“注射部位反应”意指受试者的注射部位处皮肤的炎症或异常发红。
[0206]“受试者依从性”意指受试者遵循推荐或规定的疗法。
[0207]“依从”意指受试者遵循推荐的疗法。
[0208]“推荐的疗法”意指医学专业人员关于治疗、改善、延迟或预防疾病所推荐的治疗。
[0209]概论
[0210]miR-21是广泛表达的微RNA，其与多种细胞过程有关，包括细胞分化、增殖、细胞凋亡以及基质周转。另外，miR-21与多种疾病相关。miR-21在癌症中常常上调，且抑制miR-21已在若干癌症动物模型中展现出肿瘤生长抑制作用。在心脏肥大动物模型中抑制miR-21表明miR-21在心脏病中的作用。已在心脏纤维化、肾纤维化及肺纤维化的动物模型中表明在纤维化中的作用。在组织外植体模型中抑制miR-21的研究说明抑制miR-21会促进伤口愈合。因此，miR-21的抑制剂适用于多种研究及临床配置中。
[0211]为鉴别miR-21的有效抑制剂，设计了大量抗miR-21化合物。这些化合物在长度以及双环核苷和非双环核苷的数目、位置及身份方面不同。将最初的一系列化合物在活体外荧光素酶分析中进行测试，鉴别出一个化合物子集为活性化合物的活体外活性化合物。接着在活体内分析中测试这些活体外活性化合物以鉴别在活体内作为miR-21的有效抑制剂的那些化合物。根据最初的活体外及活体内筛选，选择某些化合物作为设计其他化合物的基础。使用结构与活性(活体外活性和活体内活性两者)之间根据实验观测到的相关性来预测这些其他化合物的设计，这些其他化合物在长度以及双环和非双环核苷的选择和排列方面具有进一步的变化。接着对这些其他化合物重复活体外及活体内筛选分析。还测试某些化合物的其他性质，例如对核酸外切酶活性的敏感性。观察到在活体外最具活性的化合物在活体外最具活性并不一定为在活体内最具活性的化合物在活体内最具活性者，且还观测到一些在活体外具中等活性的化合物在活体外具中等活性为在活体内具高度活性的化合物。在此过程中活体外筛选的178种化合物中，60种被鉴别为在荧光素酶分析中具活性。在这些60种活性活体外化合物中，鉴别出一个子集在活体内具活性。经由设计和筛选化合物的此重复过程， 观察到具有特定双环和非双环型态的化合物在活体内为miR-21的有效抑制剂。因此，这些化合物适用于调节由miR-21活性促进的细胞过程。此外，此类化合物适用于治疗与miR-21相关的疾病、预防和/或延迟该等疾病发作。此类疾病的特征可在于相对于无病样品异常高的miR-21表达。此类疾病包括(但不限于)纤维化、急性肾损伤、心脏肥大、心肌梗塞以及癌症。另外，本文提供的组合物和方法可用于促进伤口愈合。
[0212]靶向miR-21的某些经修饰寡核苷酸
[0213]本文提供具有某些双环及非双环核苷型态的经修饰寡核苷酸。具有本文鉴别的型态的经修饰寡核苷酸是miR-21活性的有效抑制剂。
[0214]本文说明的各核苷型态按5’至3’方向展示。
[0215]在某些实施例中，本文提供包含由8至22个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态I的至少8个连续核苷:
[0216](R) x-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz
[0217]其中每个R是非双环核苷；X是I至4 ; [0218]每个Nb是双环核苷；
[0219]每个Nq是非双环核苷；且
[0220]每个Nz是经修饰的核苷。
[0221 ] 在核苷型态I的某些实施例中，X是I。在核苷型态I的某些实施例中，X是2。在核苷型态I的某些实施例中，X是3。在核苷型态I的某些实施例中，X是4。
[0222]在某些实施例中，本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态II的至少8个连续核苷:
[0223]Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz
[0224]其中Nm是不为双环核苷的经修饰核苷；
[0225]每个Nb是双环核苷；
[0226]每个Nq是非双环核苷；且
[0227]Nz是经修饰的核苷。
[0228]在某些实施例中，本文提供包含由8至22个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态III的至少8个连续核苷:
[0229](R) x-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz
[0230]其中每个R是非双环核苷；X是I至4 ;
[0231]每个Nb是双环核苷；
[0232]每个Nq是非双环核苷；
[0233]Ny是经修饰的核苷或未经修饰的核苷；且
[0234]每个Nz是经修饰的核苷。
[0235]在核苷型态111的某些实施例中，X是I。在核苷型态I的某些实施例中，X是2。在核苷型态III的某些实施例中，X是3。在核苷型态III的某些实施例中，X是4。
[0236]在某些实施例中，本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态IV的至少8个连续核苷:
[0237]Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz
[0238]其中Nm是不为双环核苷的经修饰核苷；
[0239]每个Nb是双环核苷；
[0240]每个Nq是非双环核苷；
[0241]Ny是经修饰的核苷或未经修饰的核苷；且
[0242]Nz是经修饰的核苷。
[0243]在某些实施例中，本文提供包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸的化合物，其中经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)互补且其中经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态V的至少8个连续核苷:
[0244]Nm-Nb- (Nq-Nq-Nb-Nb) 4_Nz
[0245]其中Nm是不为双环核苷的经修饰核苷；
[0246]每个Nb是双环核苷；
[0247]每个Nq是非双环核苷；且
[0248]Nz是经修饰的核苷。
[0249]以下实施例适用于本文所述的任何核苷型态，包括核苷型态I至V。
[0250]在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸包含本文所述核苷型态的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个或22个连续核苷。
[0251]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21 (SEQ ID NO:1)至少90%互补。在某些实施例中，经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与(SEQ ID NO:1)至少95%互补。在某些实施例中，经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与(SEQID NO:1) 100% 互补。
[0252]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21互补以使得微RNA的位置I与该寡核苷酸的3’端核苷碱基配对。例如:
[0253]5， -UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3’ (miR-21;SEQ ID NO:1)
[0254]I I I I I I I I I I I I I I I I I I
[0255]3，-ATCGAATAGTCTGACTACA-5，(抗 miR-21; SEQ ID NO: 3);
[0256]5， -UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3’ (miR-21;SEQ ID NO:1)
[0257]I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I
[0258]3，-ATCGAATAGTCTGACTACAACT-5’(抗 miR-21; SEQ ID NO: 4)。
[0259]应理解的是在SEQ ID N0:3和SEQ ID N0:4中序列中的每个“T个可以独立地是“T”核苷碱基亦或“U”核苷碱基，并且具有SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4序列的化合物可以包含所述核苷碱基全部是T的、全部是U的、或者U和T的任意组合的核苷碱基。因此，在整个本披露中和在所附序列表中，在SEQ ID N0:3和SEQ ID NO:4中不同位置处的“T”的存在没有对具体核苷碱基是“T”还是“U”的方面造成限制。
[0260]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，每个双环核苷独立地选自LNA核苷、cEt核苷及ENA核苷。在某些实施例中，至少两个双环核苷的糖部分彼此不同。在某些实施例中，所有双环核苷均具有彼此相同的糖部分。在某些实施例中，每个双环核苷是cEt核苷。在某些实施例中，每个双环核苷是LNA核苷。
[0261]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，cEt核苷是S-cEt核苷。在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，cEt核苷是R-cEt核苷。
[0262]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷、β -D-核糖核苷、2’ -O-甲基核苷、2’ -O-甲氧基乙基核苷以及2’ -氟核苷。
[0263]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷以及2’ -O-甲氧基乙基核苷。
[0264]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，至少两个非双环核苷包含彼此不同的糖部分且独立地选自β-D-脱氧核糖核苷、β-D-核糖核苷、2’-O-甲基核苷、2’-O-甲氧基乙基核苷及2’-氟核苷。
[0265]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，至少两个非双环核苷包含彼此不同的糖部分且独立地选自β -D-脱氧核糖核苷以及2’ -O-甲氧基乙基核苷。
[0266]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，每个非双环核苷具有相同类型的糖部分且选自β-D-脱氧核糖核苷、β-D-核糖核苷、2’-O-甲基核苷、2’-O-甲氧基乙基核苷以及2’-氟核苷。
[0267]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，每个非双环核苷是β -D-脱氧核糖核苷。在某些实施例中，每个非双环核苷是2’-O-甲基核苷。
[0268]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，不超过3个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，不超过2个非双环核苷是2’-O-甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，不超过1个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷。
[0269]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，一个非双环核苷是2’ -MOE核苷且其他每个非双环核苷是β -D-脱氧核糖核苷。在某些实施例中，两个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷且其他每个非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。在某些实施例中，三个非双环核苷是2’ -O-甲氧基乙基核苷且其他每个非双环核苷是β -D-脱氧核糖核苷。
[0270]在本文所述的任何核苷型态的某些实施例中，5’最末端非双环核苷和3’最末端非双环核苷是2’-O-甲氧基乙基核苷且其他每个非双环核苷是β-D-脱氧核糖核苷。
[0271]在X是4的任何核苷型态I的某些实施例中，每个核苷R是2’-O-甲氧基乙基核苷。在X是4的核苷型态1的某些实施例中，两个核苷R是β -D-脱氧核糖核苷且两个核苷R是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在X是4的核苷型态I的某些实施例中，三个核苷R是β -D-脱氧核糖核苷且一个核苷R是2’ -O-甲氧基乙基核苷。
[0272]在核苷型态I的某些实施例中，R是Nk1-Nk2-Nk3-Nk4,其中Nki是2’ -MOE核苷，Nk2是β -D-脱氧核糖核苷，Ne3是β -D-脱氧核糖核苷，且Nk4是β -D-脱氧核糖核苷。
[0273]在核苷型态1的某些实施例中，R由四个连接的核苷Nk1-Nk2-Nk3-Nk4组成，其中Nki是2’ -O-甲氧基乙基核苷且Nk2-Nk3-Nk4各自是β -D-脱氧核糖核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:4，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0274]在核苷型态1的某些实施例中，X是I且每个核苷R是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是2’ -O-甲氧基乙基核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID N0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0275]在核苷型态I的某些实施例中，X是4且每个核苷R是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S-cEt核苷；每个Nq是2’-O-甲氧基乙基核苷；且#是2’-0_甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID N0:4，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0276]在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S_cEt核苷；每个Nq是β-D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0277]在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S_cEt核苷；每个Nq是β-D-脱氧核糖核苷；且Nz是S-cEt核苷。在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0278]在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是LNA核苷；每个Nq是β-D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0279]在核苷型态II的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是LNA核苷；每个Nq是β-D-脱氧核糖核苷；且Nz是LNA核苷。在某些实施例中，经修饰的寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。 [0280]在核苷型态III的某些实施例中，R是不为双环核苷的经修饰核苷；且X是I。在核苷型态III的某些实施例中，R是不为双环核苷的经修饰核苷；x是I ;且每个Nq是未经修饰的核苷。在核苷型态III的某些实施例中，R是不为双环核苷的经修饰核苷；Χ是I ;每个Nq是未经修饰的核苷；每个Nb独立地选自S-cEt核苷以及LNA核苷；且Ny选自β -D-脱氧核糖核苷、2’ -O-甲氧基乙基核苷、S-cEt核苷以及LNA核苷。在核苷型态III的某些实施例中，R是不为双环核苷的经修饰核苷；X是I ;且每个Nq是β-D-脱氧核糖核苷。在核苷型态III的某些实施例中，R是不为双环核苷的经修饰核苷；Χ是I ;每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；每个Nb独立地选自S-cEt核苷以及LNA核苷；且Ny选自β -D-脱氧核糖核苷、2’-O-甲氧基乙基核苷、S-cEt核苷以及LNA核苷。在核苷型态III的某些实施例中，R是不为双环核苷的经修饰核苷；Χ是I ;每个Nq是未经修饰的核苷；每个Nb是S-cEt核苷；且Ny选自β-D-脱氧核糖核苷、2’-O-甲氧基乙基核苷以及S-cEt核苷。在核苷型态III的某些实施例中，R是不为双环核苷的经修饰核苷；Χ是I ;每个#是β-D-脱氧核糖核苷；每个Nb是S-cEt核苷；且Ny选自β -D-脱氧核糖核苷、2’ -O-甲氧基乙基核苷以及S-cEt核苷。在某些实施例中，型态III的经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0281]在核苷型态IV的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb选自S_cEt核苷以及LNA核苷；每个Nq选自β -D-脱氧核糖核苷以及2’ -O-甲氧基乙基核苷；ΝΥ选自2’-0_甲氧基乙基核苷、S-cEt核苷、LNA核苷以及β-D-脱氧核糖核苷；且#选自2’_0_甲氧基乙基核苷、LNA核苷以及S-cEt核苷。在某些实施例中，型态IV的经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0282]在核苷型态IV的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S_cEt核苷；各Nq选自β -D-脱氧核糖核苷以及2’ -O-甲氧基乙基核苷；ΝΥ选自2’ -O-甲氧基乙基核苷、S-cEt核苷以及β-D-脱氧核糖核苷；且#选自2’ -O-甲氧基乙基核苷以及S-cEt核苷。在某些实施例中，型态IV的经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0283]在核苷型态IV的某些实施例中，Nm是2’-O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S_cEt核苷；每个Nq是β -D-脱氧核糖核苷；ΝΥ是S-cEt核苷；且Nz是S-cEt核苷。在某些实施例中，型态IV的经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0284]在核苷型态V的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；各Nb选自S_cEt核苷以及LNA核苷；各Nq选自β-D-脱氧核糖核苷以及2’ -O-甲氧基乙基核苷；且Nz选自2’ -O-甲氧基乙基核苷、LNA核苷以及S-cEt核苷。在某些实施例中，型态V的经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID NO: 3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0285]在核苷型态V的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S_cEt核苷；每个Nq是β-D-脱氧核糖核苷；且Nz选自2’-O-甲氧基乙基核苷以及S-cEt核苷。在某些实施例中，型态V的经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0286]在核苷型态V的某些实施例中，Nm是2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是S_cEt核苷；每个Nq是β-D-脱氧核糖核苷；且Nz是2’ -O-甲氧基乙基核苷。在某些实施例中，型态V的经修饰寡核苷酸具有 核苷碱基序列SEQ ID Ν0:3，其中序列中的每个T独立地选自T和U。
[0287]在某些实施例中 ，本文提供的化合物具有如表1中所示的核苷碱基序列和修饰。核苷修饰如下指示:之后未接下标的核苷指示β-D-脱氧核糖核苷；之后接有下标“Ε”的核苷指示2’ -MOE核苷；之后接有下标“L”的核苷为LNA核苷；之后接有下标“S”的核苷指示S-cEt核苷。每个核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键。上标“Me”指示核苷的碱基上的5-甲基。
[0288]表1:抗miR-21化合物
[0289]
【权利要求】
1.一种化合物，包含由8至22个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态I的至少8个连续核苷:
(R) X-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz
其中每个R独立地是一种非双环核苷；X是I至4 ; 每个Nb独立地是一种双环核苷； 每个Nq独立地是一种非双环核苷；并且 每个Nz独立地是一种经修饰的核苷。
2.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态II的至少8个连续核苷:
Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Nq_Nz 其中Nm独立地是一种不为双环核苷的经修饰核苷； 每个Nb独立地是一种双环核苷； 每个Nq独立地是一种非双环核苷；并且 Nz独立地是一种经修饰的核苷。
3.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态III的至少8个连续核苷:`
(R) X-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz
其中每个R是一种非双环核苷；X是I至4 ; 每个Nb是一种双环核苷； 每个Nq是一种非双环核苷； Ny是一种经修饰的核苷或一种未经修饰的核苷；并且 每个Nz是一种经修饰的核苷。
4.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态IV的至少8个连续核苷:
Nm-Nb-Nq-Nq-Nb- (Nq-Nq-Nq-Nb) 3-Ny_Nz
其中Nm是一种不为双环核苷的经修饰核苷； 每个Nb是一种双环核苷； 每个Nq是一种非双环核苷； Ny是一种经修饰的核苷或一种未经修饰的核苷；并且 Nz是一种经修饰的核苷。
5.一种化合物，包含由8至19个连接的核苷组成的一种经修饰寡核苷酸，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21(SEQ ID NO:1)互补，并且其中该经修饰寡核苷酸按5’至3’方向包含以下核苷型态V的至少8个连续核苷:
Nm-Nb- (Nq-Nq-Nb-Nb) 4-Nz 其中Nm是一种不为双环核苷的经修饰核苷；每个Nb是一种双环核苷； 每个Nq是一种非双环核苷；并且 Nz是一种经修饰的核苷。
6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中该经修饰寡核苷酸包含核苷型态1、I1、II1、IV或V的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个或22个连续核苷。
7.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中该经修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与miR-21的核苷碱基序列(SEQ ID NO:1)至少90%互补、至少95%互补或100%互补。
8.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中每个双环核苷独立地选自LNA核苷、cEt核苷以及ENA核苷。
9.如权利要求1至7中任一项所述的化合物,其中每个双环核苷是一种S-cEt核苷。
10.如权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中每个双环核苷是一种LNA核苷。
11.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中每个非双环核苷独立地选自β -D-脱氧核糖核苷以及2’ -O-甲氧基乙基核苷。
12.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中每个非双环核苷是一种β-D-脱氧核糖核苷。
13.如权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中每个非双环核苷是一种2’-0_甲氧基乙基核苷。
14.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中该经修饰寡核苷酸由核苷型态1、I1、II1、IV 或 V 的 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21 或 22 个连接的核苷组成。
15.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷间键是一种经修饰核苷间键，或其中每个核苷间键是一种经修饰核苷间键，并且其中该经修饰核苷间键可任选地为一种硫代磷酸酯核苷间键。
16.如权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中至少一个胞嘧啶是一种5-甲基胞嘧啶，或其中每个胞嘧啶是一种5-甲基胞嘧啶。
17.如权利要求1所述的化合物，其中: a.R由四个连接的核苷Nk1-Nk2-Nk3-Nk4组成，其中Nki是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷，并且的每一个是一种β _D-脱氧核糖核苷； 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； b.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核苷；X是I ; 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； c.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核苷；Χ是I ; 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；d.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核昔；X是1 ;每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种S-cEt核苷；e.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核昔；X是1 ;每个Nb是一种LNA核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；或f.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核昔；X是1 ;每个Nb是一种LNA核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种LNA核苷。
18.如权利要求2所 述的化合物，其中:a.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；b.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；c.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；每个N是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种S-cEt核苷；d.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是一种LNA核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；或e.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；每个Nb是一种LNA核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且Nz是一种LNA核苷。
19.如权利要求3所述的化合物，其中:a.每个R是一种2’ -O-甲氧基乙基核昔；X是1 ;每个Nb是一种S-cEt核苷；每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；Ny是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； b.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核苷；X是I ; 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷； Ny是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种S-cEt核苷；或 c.每个R是一种2’-O-甲氧基乙基核苷；X是I ; 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷； Nz是一种S-cEt核苷；并且 Nz是一种S-cEt核苷。
20.如权利要求4所述的化合物，其中: a.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷； Ny是一种β -D-脱氧核糖核苷； Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷；并且 b.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷； Ny是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种S-cEt核苷； c.Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷； Nz是一种S-cEt核苷；并且 Nz是一种S-cEt核苷。
21.如权利要求5所述的化合物，其中: Nm是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷； 每个Nb是一种S-cEt核苷； 每个Nq是一种β -D-脱氧核糖核苷；并且 Nz是一种2’ -O-甲氧基乙基核苷。
22.如以上权利要求中任一项所述的化合物，其中该经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID NO: 3，或其中该经修饰寡核苷酸具有核苷碱基序列SEQ ID Ν0:4，并且其中在这种序列中的每个T独立地选自T和U。
23.—种抑制miR-21的活性的方法，包括使一种细胞与如权利要求1至22中任一项所述的化合物接触。
24.如权利要求23所述的方法,其中该细胞在活体内，或其中该细胞在活体外。
25.如权利要求23或24所述的方法，其中该细胞是成纤维细胞、过度增殖性细胞、角化细胞或乏氧细胞。
26.—种减少细胞中的胶原蛋白表达的方法，包括使一种细胞与如权利要求1至22中任一项所述的化合物接触。
27.一种治疗与miR-21相关的疾病、预防或延迟与miR-21相关的疾病发作的方法，包括向患有与miR-21相关的一种疾病的一个受试者给予如权利要求1至22中任一项所述的化合物。
28.如权利要求27所述的方法，其中该疾病是纤维化。
29.如权利要求28所述的方法，其中该纤维化选自肾纤维化、肺纤维化、肝纤维化、心脏纤维化、皮肤纤维化、年龄相关性纤维化、脾纤维化、硬皮病以及移植后纤维化。
30.如权利要求29所述的方法，其中: a.该肾纤维化存在于患有一种选自以下项的疾病的一个受试者中:肾小球硬化、肾小管间质纤维化、IgA肾病、间质纤维化/肾小管萎缩；慢性肾损伤、肾小球疾病、肾小球肾炎、糖尿病、特发性局灶节段性肾小球硬化、膜性肾病、塌陷性肾小球病、慢性复发性肾脏感染以及终末期肾病； b.该肾纤维化由肾脏的急性或反复性创伤引起； c.该肝纤维化存在于患有一种选自以下项的疾病的一个受试者中:慢性肝损伤、肝炎感染、非酒精性脂肪变性肝炎以及肝硬化；该肺纤维化是特发性肺纤维化；和/或 d.该受试者患有慢性阻塞性肺病。
31.一种治疗一个受试者中的纤维增生性病症的方法，包括向该受试者给予如权利要求I至22中任一项所述的化合物。
32.如权利要求23至31中任一项所述的方法，包括选择一种或多种组织中的miR-21表达升高的一个受试者。
33.如权利要求27至31中任一项所述的方法，其中该受试者需要改善的器官功能，其中该器官功能选自心脏功能、肺功能、肝功能以及肾功能。
34.如权利要求27至33中任一项所述的方法，其中该给予改善该受试者的器官功能，其中该器官功能选自心脏功能、肺功能、肝功能以及肾功能。
35.如权利要求27至34中任一项所述的方法，包括给予至少一种选自以下项的治疗剂:抗炎剂、免疫抑制剂、抗糖尿病剂、地高辛、血管舒张药、血管紧张素II转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂(ARB)、钙通道阻滞剂、异山梨醇二硝酸酯、肼屈嗪、硝酸酯、肼屈嗪、β -阻滞剂、利钠肽、类肝素以及结缔组织生长因子抑制剂。
36.如权利要求27所述的方法，其中该疾病是癌症。
37.如权利要求36所述的方法，其中该癌症为肝癌、乳癌、膀胱癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、脑癌、血液性癌症、胰脏癌、头颈癌、舌癌、胃癌、皮肤癌或甲状腺癌。
38.如权利要求36或37所述的方法，进一步包含向该受试者给予至少一种其他抗癌疗法。
39.如权利要求23至38中任一项所述的方法，其中该受试者是人。
40.如权利要求23至39中任一项所述的方法，其中该化合物以一种药物组合物存在。
41.如权利要求1至22中任一项所述的化合物，该化合物用于疗法。
42. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗纤维化。
43. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物，该化合物用于促进伤口愈合。
44. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗癌症。
45. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物，该化合物用于预防和/或延迟转移的发作。
46. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗心脏病。
47. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物用于制备一种药物的用途。
48. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物用于制备一种治疗纤维化的药物的用途。
49. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物用于制备一种促进伤口愈合的药物的用途。
50. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物用于制备一种治疗癌症的药物的用途。
51. 如权利要求1至22中任一项所述的化合物用于制备一种预防和/或延迟转移发作的药物的用途。
【文档编号】C12N15/113GK103620035SQ201280031285
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2012年4月25日 优先权日:2011年4月25日
【发明者】B.巴特 申请人:莱古路斯治疗法股份有限公司