专利名称：一种魔芋生防复合菌剂的制备及使用方法
技术领域：
本发明涉及一种植物病害防治和生物农药领域，尤其是一种防治魔芋软腐病的魔芋生防复合菌剂的制备及使用方法。
背景技术：
魔芋(Amorphophalluskonjac)为天南星科(Araceae)魔芋属(AmorphophallusBlume)多年生草本植物,富含葡甘露聚糖(konjac glucomannan,KGM)。魔芋葡甘露聚糖广泛应用于食品、医药保健、工业材料等领域，具有较高的经济价值，是一种很有发展前景的产品。它不仅有降糖、降脂、消肿解毒、抗炎抑菌、化痰等功能，对便秘、高血压、高血脂、动脉硬化、冠心病、糖尿病、肺寒、肠癌、食道癌等也有较好或特殊的疗效；其加工产品具有改善现代人的饮食结构、医药保健、工业应用等效能而倍受青睐，具有潜力巨大的国内外市场。然而，魔芋种植产量受到软腐病、白絹病等病害的严重影响，其中，以魔芋软腐病发生范围最广、危害最大、最难防治。魔芋软腐病是一种细菌性病害，该病害可导致魔芋种植产量损失30%-50%，重者绝收，严重制约魔芋产业化发展。微生物菌剂又称微生物肥料，是指由一种或数种有益微生物、培养基质和添加剂配制而成的生物性肥料，通常也叫菌剂或菌肥。它可改善土壤肥力；促进难溶性矿质营养释放；协助作物吸收养分；减少或降低植物病虫害的发生，增强植物抗性；改善作物品质；提高作物产量等。微生物菌剂是节省资源、环境友好、符合可持续发展生态农业要求的新型肥料，世界各国政府和学者对微生物肥料的研究与应用都予以高度重视
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种魔芋生防复合菌剂的制备及使用方法，对魔芋有明显的促生作用和防治软腐病的效果，对开发新的魔芋生防复合菌剂有较大的价值。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:一种魔芋生防复合菌剂的制备方法，该方法包括以下步骤:I)培养基的制备:分别制备LB培养基、PDA培养基以及高氏一号培养基；2)将固氮细菌Gl和魔芋内生拮抗细菌N8用LB培养基活化后，分别接种于LB培养基中，于37°C、180r/min培养I天，调整两种发酵液活菌数约IO8个/mL ；3)将解磷真菌Pl用PDA培养基活化后，再接入相同的PDA培养基中培养产孢子，用无菌水冲洗孢子，调整孢子悬液中孢子数约IO8个/mL ；4)将拮抗放线菌SJK18用高氏一号培养基活化后,再接入相同的高氏一号培养基中培养产孢子，用无菌水冲洗孢子，调整孢子悬液中孢子数约IO8个/mL ；5)将上述步骤2)、3)和4)制备的各发酵液和孢子悬液等体积混合，即制得本发明所述的魔芋生防复合菌剂。步骤I)中LB培养基的配方为:酵母膏5g/L，NaC15g/L，蛋白胨10g/L，pH值7.0。
步骤I)中PDA培养基的配方为:马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水IOOOmL, pH 值 6.8 7.0。步骤I)中高氏一号培养基的配方为:可溶性淀粉20g，NaCl0.5g，KNO3Ig,MgSO4.7Η200.5g, K2HPO40.5g, FeSO4.7Η200.0lg，琼脂 15g，蒸馏水 1000mL，pH 值 7.2 7.4。一种上述魔芋生防复合菌剂的使用方法，将该魔芋生防复合菌剂用于魔芋植株的浇灌。每棵魔芋植株施用魔芋生防复合菌剂的用量为100ml。本发明制备的魔芋生防复合菌剂的对魔芋软腐病的防病效果的试验结果如表2所示，可见魔芋生防复合菌剂对魔芋有明显的防治软腐病效果。本发明制备的魔芋生防复合菌剂的对魔芋球茎的增重效果的试验结果如表3所示，对魔芋植株的根数、根长和株高的促生试验结果如表I所示，可见魔芋生防复合菌剂对魔芋有明显的促生效果。本发明提供的一种魔芋生防复合菌剂的制备及使用方法，以固氮细菌、解磷真菌、魔芋内生软腐病拮抗细菌和魔芋软腐病拮抗链霉菌制备成魔芋生防复合菌剂，它对魔芋有明显的促生作用和防治软腐病的效果，为开发新的魔芋生防菌剂提供技术支撑。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明:图1为测定魔芋葡甘露聚糖含量时所绘制的标准工作曲线图。
具体实施例方式一种魔芋生防复合菌剂的制备方法，该方法包括以下步骤:I)培养基的制备:分别制备LB培养基、PDA培养基以及高氏一号培养基；2)将固氮细菌Gl和魔芋内生拮抗细菌N8用LB培养基活化后，分别接种于LB培养基中，于37°C、180r/min培养I天，调整两种发酵液活菌数约IO8个/mL ；3)将解磷真菌Pl用PDA培养基活化后，再接入相同的PDA培养基中培养产孢子，用无菌水冲洗孢子，调整孢子悬液中孢子数约IO8个/mL ；4)将拮抗放线菌SJK18用高氏一号培养基活化后,再接入相同的高氏一号培养基中培养产孢子，用无菌水冲洗孢子，调整孢子悬液中孢子数约IO8个/mL ；5)将上述步骤2)、3)和4)制备的各发酵液和孢子悬液等体积混合，即制得本发明所述的魔芋生防复合菌剂。步骤I)中LB培养基的配方为:酵母膏5g/L，NaC15g/L，蛋白胨10g/L，pH值7.0。步骤I)中PDA培养基的配方为:马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水IOOOmL, pH 值 6.8 7.0。步骤I)中高氏一号培养基的配方为:可溶性淀粉20g，NaCl0.5g，KNO3Ig,MgSO4.7Η200.5g, K2HPO40.5g, FeSO4.7Η200.0lg，琼脂 15g，蒸馏水 1000mL，pH 值 7.2 7.4。一种上述魔芋生防复合菌剂的使用方法，将该魔芋生防复合菌剂用于魔芋植株的浇灌。每棵魔芋植株施用魔芋生防复合菌剂的用量为100ml。
魔芋种芋为花魔芋，每个约重6.5g。盆栽用土为连作魔芋4年的土壤，第4年种植的魔芋病情指数为70.0%。盆栽位于室外有树荫处，每盆(花盆规格为口径X底径X高=120mmX IOOmmX 110mm)种I棵魔芋。种植后，其中23盆各浇灌复合菌剂IOOmL,另23盆浇灌等量水作空白对照，共46盆。全过程未加任何肥料，逢表土干燥即浇水。本发明制备的魔芋生防复合菌剂对魔芋植株的根数、根长和株高的促生应用过程如下:待魔芋叶子充分展开后，各处理随机取3盆健康的魔芋，连根带土拔出整株魔芋，用水冲洗掉泥土，分别记录魔芋根数、根长和株高。空白处理的魔芋，其根数为16.7，根长为2L 3cm，株高为24.1cm ;而以复合菌剂处理的魔芋，其根数为TL 3，根长为25.3cm，株高为32.0cm，与空白对照相比，分别增加了 63.47%、18.78%和32.78%，结果如表I所示。表I魔芋生防复合菌剂对魔芋植株的根数、根长和株高的促生应用试验结果
权利要求
1.一种魔芋生防复合菌剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤: O培养基的制备:分别制备LB培养基、PDA培养基以及高氏一号培养基； 2)将固氮细菌Gl和魔芋内生拮抗细菌N8用LB培养基活化后，分别接种于LB培养基中，于37°C、180r/min培养I天，调整两种发酵液活菌数约IO8个/mL ； 3)将解磷真菌Pl用PDA培养基活化后，再接入相同的PDA培养基中培养产孢子，用无菌水冲洗孢子，调整孢子悬液中孢子数约IO8个/mL ； 4)将拮抗放线菌SJK18用高氏一号培养基活化后,再接入相同的高氏一号培养基中培养产孢子，用无菌水冲洗孢子，调整孢子悬液中孢子数约IO8个/mL ； 5)将上述步骤2)、3)和4)制备的各发酵液和孢子悬液等体积混合，即制得本发明所述的魔芋生防复合菌剂。
2.根据权利要求1所述的一种魔芋生防复合菌剂的制备方法，其特征在于步骤I)中LB培养基的配方为:酵母膏5g/L，NaC15g/L，蛋白胨10g/L，pH值7.0。
3.根据权利要求1所述的一种魔芋生防复合菌剂的制备方法，其特征在于步骤I)中PDA培养基的配方为:马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH值6.8 7.0。
4.根据权利要求1所述的一种魔芋生防复合菌剂的制备方法，其特征在于步骤I)中高氏一号培养基的配方为:可溶性淀粉 20g，NaCl0.5g，KNO3Ig, MgSO4.7H200.5g，K2HPO40.5g，FeSO4.7H200.0lg,琼脂 15g，蒸馏水 IOOOmL, pH 值 7.2 7.4。
5.一种上述魔芋生防复合菌剂的使用方法，其特征在于:将该魔芋生防复合菌剂用于魔芋植株的浇灌。
6.根据权利要求5所述的魔芋生防复合菌剂的使用方法，其特征在于:每棵魔芋植株施用魔芋生防复合菌剂的用量为100ml。
全文摘要
一种魔芋生防复合菌剂的制备方法，该方法包括以下步骤1)培养基的制备；2)用固氮细菌G1和魔芋内生拮抗细菌N8制备发酵液；3)用解磷真菌P1制备孢子悬液；4)用拮抗放线菌SJK18制备孢子悬液；5)将上述各发酵液和孢子悬液等量混合，即制得魔芋生防复合菌剂。一种上述魔芋生防复合菌剂的使用方法，将该魔芋生防复合菌剂用于魔芋植株的浇灌。本发明提供的一种魔芋生防复合菌剂的制备及使用方法，以固氮细菌、解磷真菌、魔芋内生软腐病拮抗细菌和魔芋软腐病拮抗链霉菌制备成魔芋生防复合菌剂，它对魔芋有明显的促生作用和防治软腐病的效果，为开发新的魔芋生防菌剂提供技术支撑。
文档编号C12R1/645GK103222485SQ20131011442
公开日2013年7月31日 申请日期2013年4月2日 优先权日2013年4月2日
发明者乐超银, 叶晶龙, 潘虹, 程海丽, 雷珍珍, 廖甜甜, 望慧星, 陈云, 许克静, 陈磊 申请人:三峡大学