防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株、其制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及微生物和生物防治领域中的一种生物拮抗菌、其制备方法及其应用。菌株名称为Enterobacter?cowanii?B-6-1，属于肠杆菌属Enterobacteriaceae。其主要形态特征包括：杆状，短棒状，长0.8-1.2μm，宽1.0-1.6μm，革兰氏染色阴性，菌落白色，表面光滑，在常温下生长良好。本发明的菌株具有优良的抗病性能，最佳配方为：拮抗菌菌液浓度为1×108cfu/mL以上，添加50m?mol/L的Na2SiO3，能够达到最佳的抗病效果，对果蔬农业的发展具有十分重要的价值。
【专利说明】防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株、其制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物和生物防治领域中的一种生物拮抗菌、其制备方法及其应用，特别是涉及此生物拮抗菌在果蔬采后病害防治中的应用。
【背景技术】
[0002]果蔬采后 由真菌引起的腐烂而造成的损失非常巨大。目前，化学杀菌剂是防治果蔬采后真菌病害的主要手段之一。然而，长期使用化学杀菌剂，其残留水平不断升高，同时也导致具有抗性病原菌的产生。例如，许多杀菌剂可控制柑桔的青霉病和绿霉病的发生，但近年来由于大量使用杀菌剂引起指状青霉和意大利青霉的获得性抗性已经成为采后病害防治的一大难题而引起人们的重视。许多杀菌剂具有异味，污染环境，不易降解，因此，寻找低毒性、高效、环境友好和残留量低的杀菌剂的替代品或部分替代品就日渐迫切。
[0003]使用拮抗酵母菌防治果蔬采后病害，可以减少化学农药的用量和在果蔬产品上的残毒，对保护人体健康和防止环境污染都极为重要。Aspire?、BiosavellO和Biosavelll是国外已经注册升记的酵母类微生物抗菌剂，主要用于控制柑橘类和仁果类果实的采后腐烂。这展示了利用拮抗菌来安全有效地防治水果采后病害具有广阔的前景。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种能防治果蔬采后病害的菌株Enterobactercowanii B-6-1,同时提供此菌株的制备方法以及利用此菌株制备的抗病菌液。
[0005]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。
[0006]防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株B-6-1,其名称为Enterobacter cowaniiB-6-1,属于肠杆菌属Enterobacteriaceae,保藏日期2012年10月11日，保藏号CCTCCM2012398 ;其主要特征见下表:
[0007]
【权利要求】
1.防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株B-6-1,其名称为EnterobactercowaniiB-6-1,属于肠杆菌属Enterobacteriaceae,保藏日期2012年10月11日，保藏号CCTCCM2012398 ;其主要特征见下表:
2.防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株B-6-1的制备方法，其特征步骤包括:A、取一至多个番茄，将其放在盛有0.2M磷酸缓冲液的容器中，在IOOrpm旋转振荡器中洗涤lOmin，丢弃洗液；再用相同方法进行二次清洗，二次清洗前，先对番茄进行30秒超声处理，保留洗液； B、然后对二次洗液进行连续稀释后，将稀释液涂布在LB固体培养基上，每皿0.lmL，在28°C下培养24-48h至长出单菌落，依据不同的菌落特征随机选取单菌落，在LB固体培养基上重复划线后，挑取纯化的单菌落与配制的灰葡萄孢孢子悬液在PDA平皿上做对峙试验，选择可明显抑菌作用的菌落； C、将有明显抑菌作用的菌落于200r/min28°C下，在LB液体培养基中摇菌，48小时后进行番茄的活体实验；每果刺5mmX 5mm伤口两个，于伤口处分别接种悬浮液接种50 μ L，2h后再分别接种IXlO5孢子/mL的灰葡萄孢悬液20 μ L，将上述经处理的果实于25°C下保湿，7d后统计发病率和病斑直径； D、筛选出抑菌效果较好的菌株，再根据权利要求1所述的特征对其进行鉴定，即得目的菌株。
3.利用权利要求1所述的生物拮抗菌菌株B-6-1制备的抗病菌液，其特征在于:拮抗菌菌液浓度为IX 107cfu/mL以上，添加25-100m mol/L的Na2Si03。
4.根据权利要求3所述的抗病菌液，其特征在于:拮抗菌菌液浓度为IX108cfu/mL以上，添加 50m mol/L 的 Na2SiO30
5.权利要求3或4所述的抗病菌液的制备方法，其特征步骤包括: 挑取原种，将其接种在 LB液体培养基中，在28°C下摇床培养1-2天后，得种子液； 种子液在28°C条件下，200rpm/min摇床培养，LB培养基中摇床培养24-36小时后即得目的菌液。
6.权利要求3或4所述的抗病菌液的使用方法，其特征在于:将果蔬浸泡于抗病菌液中，其腐烂即得到良好控制。
【文档编号】C12R1/01GK103952327SQ201310344832
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2013年8月3日 优先权日:2013年8月3日
【发明者】施俊凤, 孙常青, 王潇冉, 王春生, 白云凤, 郭志利 申请人:山西省农业科学院农产品贮藏保鲜研究所