一种涕灭威的核酸适体、衍生物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种涕灭威的核酸适体、衍生物及其应用，所述核酸适体的核苷酸序列为：GCCAAGTGGTATCTTCTGCAGCGATTCTTGATCGACCGGTCGTTGTTCGCTGATTAAGCTTGGC。所述涕灭威的核酸适体的衍生物为核酸序列进行巯基化或同位素化修饰得到的。所述的涕灭威的核酸适体或衍生物用于涕灭威浓度定性、定量检测分析。本发明优点在于涕灭威适体的制备步骤简单、效率高、品质均一、稳定性好、开发周期短、生产成本低、操作简单、安全性高，在检测分析领域的应用前景广阔。
【专利说明】一种涕灭威的核酸适体、衍生物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物【技术领域】，尤其涉及一种涕灭威的核酸适体、衍生物及其应用。
【背景技术】
[0002] 涕灭威，属氨基甲酸酯类农药，其是一种高效、广谱型杀虫剂，其毒理机制是抑制 害虫体内胆碱酯酶，使乙酰胆碱积累，影响神经兴奋传导，从而使害虫发生痉挛、麻痹死亡， 常用来处理种子，抑制害虫生长。因为氨基甲酸酯类农药的滥用，导致人畜中毒现象屡有发 生，所以其成为蔬菜中农药残留的重点检测品种。涕灭威是氨基甲酸酯类农药中的剧毒杀 虫剂，由于其高毒性和难降解等特性，国内外在蔬菜、水果、水稻等农作物上的用量都做了 严格的限制。
[0003] 目前报道的检测涕灭威农药的方法主要有光谱分析法、色谱法，但是仪器操作需 要专业人员，且样品前处理复杂、费时，不适合我国蔬菜分散销售市场常规性的现场快速检 测需要。酶抑制法、速测卡法和免疫分析法等快速检测方法因其操作较快速、简便，近年来 得到越来越广泛的应用。但是酶抑制法缺点在于只能对有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留 做粗略的定性鉴定，不能定量分析，且方法重现性差，假阳性和假阴性率高，易受环境影响， 酶活性保存不易，不同来源的AchE对农药的敏感度也不尽相同。
[0004] 核酸适体是一类体外人工合成并具有确定二级或三级结构的单链DNA或RNA寡核 苷酸分子，其能够对靶分子进行特异性识别。通过指数富集的配基系统进化技术，经过体外 筛选、扩增和富集过程可以从随机寡核苷酸库中筛选出针对多种靶分子的适体。传统SELEX 技术以小分子为靶标物质筛选时，通常以在固相基质上的固定态与寡核苷酸分子结合，利 于后续的分离过程，但必须在小分子上修饰活性基团才能将其与固相载体结合，因此在一 定程度上会影响目标靶的构象；以农药为靶分子，对其改造时，既要保证其杀虫活性结构不 被破坏又不能掩盖与核酸的结合位点。而利用溶液中的自由态可以简化筛选步骤。
[0005] 适体的优点包括易合成与标记、无批间差异和化学稳定性好等，因此对食品和环 境中涕灭威农药残留检测具有耗时短、成本低、灵敏度高的特点，有很好的应用前景。
【发明内容】
[0006] 本发明提供了一种涕灭威的核酸适体、衍生物及其应用。
[0007] 本发明采用如下技术方案： 本发明的涕灭威的核酸适体的核苷酸序列为：GCCAAGTGGTATCTTCTGCAGCGATTCTTGATCG ACCGGTCGTTGTTCGCTGATTAAGCTTGGC ； 利用DNAMAN软件模拟其二级结构，具有一种可能的茎环结构，其结构如下：
【权利要求】
1. 一种涕灭威的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体的核苷酸序列为：GCCAAGTGGTA TCTTCTGCAGCGATTCTTGATCGACCGGTCGTTGTTCGCTGATTAAGCTTGGC〇
2. 如权利要求1所述的涕灭威的核酸适体，其特征在于：所述涕灭威核酸适体序列上 偶联各种荧光素或酶或HIS标签或生物素或地高辛或纳米材料或胶体金或荧光基团或发 光物质。
3. 如权利要求1所述的涕灭威的核酸适体，其特征在于：将所述涕灭威核酸适体序列 置换、缺失和增加碱基后具有相同功能用途的核酸序列。
4. 一种如权利要求1所述的涕灭威的核酸适体的衍生物，其特征在于：所述涕灭威的 核酸适体的衍生物为核酸序列进行巯基化或同位素化修饰得到的。
5. 如权利要求1-4任一项所述的涕灭威的核酸适体或衍生物的应用，其特征在于：所 述的涕灭威的核酸适体或衍生物用于涕灭威浓度定性、定量检测分析。
6. 如权利要求5所述的涕灭威的核酸适体或衍生物的应用，其特征在于：所述应用的 具体方法如下：在涕灭威的核酸适体或衍生物上标记可检测标记物，加入样品，当样品中有 涕灭威时通过检测标记物的信号而获得涕灭威的浓度。
7. 如权利要求5所述的涕灭威的核酸适体或衍生物的应用，其特征在于：所述应用的 具体方法如下：组装适体胶体金试纸，样品中含有涕灭威，试纸上出现一条红线为阳性，达 到检测的目的。
【文档编号】C12N15/115GK104140969SQ201410370618
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年7月31日 优先权日:2014年7月31日
【发明者】王耘, 王淮庆 申请人:金陵科技学院