一种用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、β-环糊精、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、液体生物防腐剂Proclin300。通过上述方式，本发明的用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂由缓冲剂、螯合剂、糖类、表面活性剂、有机溶剂、防腐剂组成。本发明的复合稳定剂加入到乳酸脱氢酶测定试剂盒中后，可显著提高检测结果的稳定性，有效延长乳酸脱氢酶测定试剂盒的保存时间。
【专利说明】一种用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及体外诊断领域，特别是涉及一种用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定 剂。
【背景技术】
[0002] 血清乳酸脱氢酶（LDH)是一种氧化还原酶，催化丙酮酸和乳酸的相互转化反应。乳 酸脱氢酶根据亚单位分5种同工酶，有两种类型：肌肉型和心肌型。乳酸脱氢酶的活性用来 评价细胞或组织的损害状况，基于还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH)转化为氧化型烟酰 胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+)，引起340nm波长处吸光度的变化，从而来定量测定乳酸脱氢酶的 活性，乳酸脱氢酶的含量与NADH的消耗量成正比，而NADH作为一种辅酶，其活性易受各种 因素的干扰，且自身极易被氧化，直接影响乳酸脱氢酶含量的测定结果，致使乳酸脱氢酶测 定试剂盒缺乏稳定性，保存时间短，直接影响到临床使用。
[0003] 目前关于乳酸脱氢酶测定试剂稳定性的报道非常有限。专利CN200980105640中 通过加入葡糖脱氢酶对辅酶进行化学修饰，生成一种相对稳定的辅酶衍生物，从而使其达 到稳定的作用，且不影响试剂的应用，但这种方法成本较高，不便于推广；专利CN1179792A 中利用一种酶和底物将已氧化的辅酶还原成还原型辅酶，这样便于在贮存过程中辅酶再 生，但这种方法实施成本高，而且加入的酶自身也不稳定；专利CN02139298通过加入NAD+， 利用酶-底物-NAD +或酶-底物-NADP+系统循环将氧化型辅酶转化成还原型辅酶，当还原型 辅酶积累到一定浓度时即可进行测定，但是该方法较为复杂，且不能保证在系统循环中还 原型辅酶的产生速率和总量能满足试剂盒的要求；专利200610030784. 8提供了一种NADH 的复合稳定剂，但是只能证明该复合稳定剂对单独存在的NADH具有一定的稳定作用，并不 能说明加入到成分较为复杂的试剂盒中也能有类似的稳定效果。因此，研究开发一种配制 简单、成本低廉，对乳酸脱氢酶测定试剂盒有良好稳定效果的稳定剂是非常必要的。
【发明内容】
[0004] 本发明主要解决的技术问题是提供一种用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂，该 复合稳定剂要配制简单、成本低廉且对乳酸脱氢酶测定试剂盒有良好的稳定效果。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种用于乳酸脱氢酶 试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、海藻 糖、β-环糊精、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、液体生物防腐剂Proclin 300,各组分的含量为： 三羟甲基氨基甲烷（Tris) 3?9 g/L、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na) 4(T60 g/L、海藻糖 2(T30 g/L、i3-环糊精15?25 g/L、甘油5?15 g/L、聚乙烯吡咯烷酮15?25 g/L、液体生物 防腐剂 Proclin 300 1 ?10 g/L。
[0006] 在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂各组分的含量为：Tris 6. 06g/L、 EDTA-2Na 50 g/L、海藻糖25 g/L、β-环糊精20 g/L、甘油10 g/L、聚乙烯吡咯烷酮20 g/L >Proclin300 5 g/L〇
[0007] 在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂应用于乳酸脱氢酶试剂盒中，所述 乳酸脱氢酶试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的组分为：磷酸氢二钠25. 069 g/L、磷酸二氢钾2.435 g/L、a-酮丁酸钠盐0.496 g/L，所述第二试剂的组分为：Tris 8.479 g/L、NADH 0.0851 g/L、盐酸 5.6 mL/L。
[0008] 在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂的使用量在乳酸脱氢酶试剂盒中的 体积分数为5%。
[0009] 本发明的有益效果是：本发明的用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂，所述复合 稳定剂由缓冲剂、螯合剂、糖类、表面活性剂、有机溶剂、防腐剂组成。本发明的复合稳定剂 加入到乳酸脱氢酶测定试剂盒中后，可显著提高检测结果的稳定性，有效延长乳酸脱氢酶 测定试剂盒的保存时间。另外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单。
【具体实施方式】
[0010] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0011] 本发明涉及的仪器有：uv Blue Star紫外分光光度计1台（北京莱伯泰科仪器有 限公司，亦或者其它品牌)、恒温数显水浴锅1台（上海梅香仪器有限公司，亦或者其它品 牌)。
[0012] 实施例1 提供一种用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂各组分的含量为： Tris 6.06 g/L、EDTA-2Na 50 g/L、海藻糖 25 g/L、0-环糊精 20 g/L、甘油 10 g/L、聚乙 烯吡咯烷酮20 g/L、Pr〇Clin300 5 g/L。将上述各组分充分溶解、混合后，即可制得一种 液体复合稳定剂成品。
[0013] 将实施例1应用于乳酸脱氢酶测定试剂盒，并从稳定性、准确度和使用量方面进 行评价。
[0014] (一）稳定性及准确度试验 1、供试稳定剂：实施例1所述复合稳定剂。
[0015] 2、供试试剂盒为乳酸脱氢酶测定试剂盒，由试剂1和试剂2组成。组分如下： 试剂1 :磷酸氢二钠25. 069 g/L、磷酸二氢钾2. 435 g/L、α -酮丁酸钠盐〇· 496 g/L ; 试剂 2 :Tris 8.479 g/L、NADH 0.0851 g/L、盐酸 5.6 mL/L。
[0016] 3、试验方法及结果 将实施例1配制的复合稳定剂按3% (v/v)的量加入乳酸脱氢酶测定试剂盒中(试剂1 和试剂2均按此量添加)，与不添加复合稳定剂的乳酸脱氢酶测定试剂盒分别测定样本中乳 酸脱氢酶含量。本试验以英国朗道质控血清水平2 (质控2)和质控血清水平3 (质控3)为 样本，采用紫外可见分光光度计进行检测，设一个空白测试、两个样本测试(空白测试以蒸 馏水代替样本)。样本与试剂1和试剂2的比例为20 μ L :1000 μ L :250 μ L，设定的主波长为 340nm、副波长为405nm，样品与试剂混勻后延迟Imin读数，读数时间为I. 5min，得出Λ A/ min (每分钟吸光度变化)，根据公式LDH (U/L)= Λ A/min X F计算出样本LDH含量(计算 因子F=12500)。质控2中LDH的靶值为402U/L，质控3中LDH的靶值为754U/L，允许偏差 范围±10%。
[0017] 根据以上测定方法，以同批次同瓶装的质控血清2、质控血清3作为检测样本，分 别用添加3% (v/v)复合稳定剂的乳酸脱氢酶测定试剂盒和不添加复合稳定剂的乳酸脱氢 酶测定试剂盒进行检测，每5天测试一次，每次做三个平行并取其平均值，检测周期35天， 得到针对质控血清2、质控血清3的测试结果，计算得到测定结果的标准偏差（SD)和有效期 天数。标准偏差这项可反映测定结果的稳定性。试验结果见下表。
【权利要求】
1. 一种用于乳酸脱氢酶试剂盒的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂包括三羟 甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、￠-环糊精、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、液体生物防 腐剂Proclin 300,各组分的含量为：三羟甲基氨基甲烷（Tris) 3、g/L、乙二胺四乙酸二 钠（EDTA-2Na) 40?60 g/L、海藻糖 20?30 g/L、￠-环糊精 15?25 g/L、甘油 5?15 g/L、聚 乙烯吡咯烷酮15?25 g/L、液体生物防腐剂Proclin 300 flO g/L。
2. 根据权利要求1所述的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂各组分的含量为： Tris 6.06 g/L、EDTA-2Na 50 g/L、海藻糖 25 g/L、P-环糊精 20 g/L、甘油 10 g/L、聚乙 烯吡咯烷酮 20 g/L、Proclin300 5 g/L。
3. 根据权利要求1所述的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂应用于乳酸脱氢 酶试剂盒中，所述乳酸脱氢酶试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的组分为：磷 酸氢二钠25. 069 g/L、磷酸二氢钾2. 435 g/L、a -酮丁酸钠盐0. 496 g/L，所述第二试剂的 组分为：Tris 8.479 g/L、NADH 0.0851 g/L、盐酸 5.6 mL/L。
4. 根据权利要求1所述的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂的使用量在乳酸 脱氢酶试剂盒中的体积分数为5%。
【文档编号】C12Q1/32GK104388531SQ201410554433
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月20日 优先权日:2014年10月20日
【发明者】周立霞, 杨灵勇, 王燕华, 李勋波 申请人:苏州康铭诚业医用科技有限公司