假单胞菌及其用途
【专利摘要】本发明涉及微生物【技术领域】，具体公开一种假单胞菌及其用途。本发明的假单胞菌已于2014年9月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏名称为：Pseudonomonas sp.SY-HP-11，保藏编号：CCTCC No:M2014400。本发明的假单胞菌能够用于降解各种不同的酚类化合物，尤其是对苯二酚，以及用于处理含酚的工业废水。CCTCC M20144002014.09.09
【专利说明】假单胞菌及其用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物【技术领域】，特别涉及一种假单胞菌及其用途。
【背景技术】
[0002] 对苯二酷是一种常见的水溶性有机污染物，可W应用于照相的显影剂、橡胶和汽 油的抗氧剂、染料及医药的原料。含酷的工业废水来源于石油、化工、煤气、焦化、钢铁及酷 类生产厂排放的废水，排放量大、具有明显的毒性和致癌、致突变作用，对水体污染严重。
[0003] 目前国内外处理含对酷工业废水的方法主要有物理法、化学法、生物法等。物理 法适用于处理酷浓度较低的废水，对高浓度酷废水的处理效果较差；化学法具有降解效率 高，反应速率快的特点，但化学法操作复杂、成本高，反应中间产物往往仍然具有毒性。生物 法利用微生物代谢活动去除废水中的有毒物质，具有环境友好、无二次污染、经济安全等优 点，是最有前途的处理方法。
[0004] 已报道的通过筛选获得的降解对苯二酷菌株有假单胞菌（Pseudonomonas SP.)、 红球菌巧hodococcus)等，目前所分离的酷类降解菌株中，大多数W某种单一酷类化合物 作为底物，能够广谱降解多种酷类化合物的微生物相对较少；并且，所分离的酷类降解菌株 一般对高浓度含酷废水的耐受能力较低，使得生化法处理含酷废水周期较长，在处理实际 废水时经济性低。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在克服现有生物法只能降解某种单一酷类化合物的技术缺陷，提供一种 新型假单胞菌，能够广谱降解多种酷类化合物，尤其能够高效降解对苯二酷，同时，能够解 决生物处理含高酷实际废水时酷降解率低的问题。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用W下技术方案：
[0007] 一方面，本发明提供一种假单胞菌，保藏名称为；Pseudonomonas sp. SY-HP-11，保 藏单位：中国典型培养物保藏中也，保藏地址；中国武汉武汉大学；保藏日期：2014年9月9 日，保藏号；CCTCC No:M2014400。
[0008] 另一方面，本发明提供上述假单胞菌的用途，用于降解酷类化合物，W及用于处理 含有酷的工业废水，尤其是用于降解对苯二酷。酷类化合物包括对苯二酷、邻苯二酷、间苯 二酷、4-甲氧基酷和2, 6-二甲基苯酷中的一种或几种。
[0009] 本发明的有益效果在于；本发明的假单胞菌能够广谱降解多种酷类化合物，尤其 能够高效降解对苯二酷，并且，能够耐受2000mg/L对苯二酷，同时，能够解决生物处理含高 酷实际废水时酷降解率低的问题。
【专利附图】
【附图说明】
[0010] 图1为SY-HP-Il菌株对对苯二酷的降解率及菌株浓度曲线图；
[0011] 图2为SY-HP-Il菌株对浓度为2000mg/L的对苯二酷的降解曲线图。
【具体实施方式】
[0012] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，W下结合附图及具体实施 例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用W解释本发 明，而不构成对本发明的限制。
[0013] 本发明提供一种假单胞菌（Pseudomonas sp.)，保藏名称为；假单胞菌SY-HP-11， Pseudonomonas sp. SY-HP-11，保藏单位；中国典型培养物保藏中也，保藏地址；中国武汉武 汉大学；保藏日期：2014年9月9日，保藏号；CCTCC No:M2014400。
[0014] 该假单胞菌属于革兰氏阴性菌类，简称SY-HP-Il菌株。SY-HP-Il菌株的形态特征 为：生长缓慢，菌落较小，菌落呈淡黄色，圆形，边缘齐整。SY-HP-Il菌株在生长过程中能耐 受2000mg/L的对苯二酷，SY-HP-Il菌株的最适生长条件为；pH7. 0,温度3(TC。
[0015] SY-HP-Il菌株分离自迂宁某石化厂生化好氧池活性污泥，经人工富集驯化培养并 分离纯化得到。
[001引对苯二酷无机盐分离培养基成分为（g/L) ;0. 9KH2PO4,6. 5化2册04 ? 12&0， 0. 4(NH4)2S04,0. 2M拆04 ? 7&0 ;每IL培养基加入1血微量元素溶液（微量元素溶液配制： Ig FeS04 ? 7&0, Ig MnS04 ?&0,0. 25g Na2Mo04 ? 2&0,0. Ig &804,0. 25g CuCla ? 2&0,0. 25g ZnCl2,0. Ig 畑4 ? V03,0. 25g Co(N03)2 ? 6&0,0. Ig NiS04 ? 6馬0,溶解于 900血蒸觸水中，力口 SmL浓H2SO4,补蒸觸水至IOOOmL);待无机盐培养基高压灭菌后加入对苯二酷水溶液，使得 对苯二酷浓度为 lOOmg/L 500mg/L lOOOmg/L, 2000mg/L 3000mL。
[0017] SY-HP-II菌株可W高效降解对苯二酷，在W对苯二酷为碳源（2000mg/L)、 (NH4)2S04为氮源（400mg/L)的无机盐培养液体培养基中接种SY-HP-Il菌株后，3(TC，抑为 6. 5 -9. 5范围内可高效降解对苯二酷，7化内对苯二酷降解率达到99% W上。
[0018] 获取SY-HP-Il菌株的方法具体包括如下步骤：
[0019] USY-HP-Il菌株的分离和纯化
[0020] 用250mL立角瓶，装IOOmL对苯二酷无机盐培养基（g/L) :0. 9皿2口〇4， 6. 5化2册〇4 ? 12&0,0. 4 (畑4) 2S0" 0. 2M拆〇4 .yHaO,每IL培养基加入1血微量元素溶液，待无 机盐培养基高压灭菌后加入对苯二酷水溶液。微量元素溶液配方（g/L) ;lg FeS〇4*7H2〇， Ig MnS〇4*H2〇,0. 25g Na2Mo〇4*2H2〇,0. Ig &8〇4,0. 25g CuCl2*2H2〇,0. 25g ZnCla'O. Ig 畑4 .VOsiO. 25g Co(N〇3)2 .eHaOiO. Ig NiS〇4 .eHaO,溶解于 900血蒸觸水中，力日 5血浓 H2SO" 补蒸觸水至lOOOmL。向培养基中接入5mL从迂宁省某石化厂采集的生化好氧池活性污泥， 于30°C、转速为15化/min的摇床中振荡培养2d，得到菌液。取5血菌液接种到100血新 培养基中，重复转接7次。对苯二酷起始浓度为500mg/L，W后每次转接对苯二酷浓度增加 500mg/L,直到 3000mg/L 为止。
[0021] 驯化培养好的菌液按10气1(T4、10人ICT6和1(T稀释，取0. ImL ICT5稀释液涂在含 有2000mg/L对苯二酷的无机盐培养基平板上，3(TC倒置培养2?3d，挑取单菌落，进行3次 划线分离纯化，得到纯化的菌株SY-HP-11。
[0022] 2、SY-HP-Il 菌株的鉴定
[0023] 采用16S rRNA基因测序法对SY-HP-Il菌株进行分类鉴定，具体步骤如下：
[0024] (1)细菌总DNA的制备；用天根公司基因组提取试剂盒提取SY-HP-Il菌株的基因 组DM,作为PCR反应的模板。
[00幼 似16S rRNA基因的PCR扩增；扩增引物如下：
[0026] 27F ;5，一AgAgTTTgATCMTggCTCAg-3, [M = C，A]
[0027] 1492R ;5，一Cg巧TACCTTgTTACgACTT-3, [Y = T, C]
[0028] 中间引物；533F ;5, 一gTgCCAgCMgCCgCggTAA -3，
[002引 PCR反应体系：
[0030]
【权利要求】
1. 一种假单胞菌，其特征在于，保藏名称为：Pseudonomonas sp. SY-HP-11，保藏单位： 中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2014年9月9日，保藏 号：CCTCC N〇:M2014400。
2. 如权利要求1所述的假单胞菌的用途，其特征在于，用于降解酚类化合物。
3. 如权利要求1所述的假单胞菌的用途，其特征在于，用于处理含有酚类化合物的工 业废水。
4. 如权利要求2或3所述的假单胞菌的用途，其特征在于，所述酚类化合物包括对苯二 酚、邻苯二酚、间苯二酚、4-甲氧基酚和2, 6-二甲基苯酚中的一种或多种。
5. 如权利要求1所述的假单胞菌的用途，其特征在于，用于降解对苯二酚。
【文档编号】C12R1/38GK104357366SQ201410665101
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月19日 优先权日:2014年11月19日
【发明者】朱希坤, 彭湃, 李小明, 杨德玉, 戴速航, 李旭 申请人:沈阳化工研究院有限公司