本发明涉及一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，属于大豆肽生产技术领域。
背景技术：
大豆肽具有无豆腥味、无蛋白变性、酸性不沉淀、加热不凝固、易溶于水、流动性好等良好的加工性能，是优良的保健食品素材。大豆肽是大豆蛋白质经酸法或酶法水解或分离、精制而得到的多肽混合物，以小分子肽为主，还含有少量大分子肽、游离氨基酸、糖类和无机盐等成份，大豆肽中的氨基酸组成与大豆蛋白非常接近，但是由于大豆肽的分子量比较小，更容易被吸收，其中某些低分子肽还能够起到独特的生理功能。传统方法生产的大豆肽中大豆蛋白水解后产生的多肽中，含有大量分子量在6000da以下的疏水性小肽，这些疏水性氨基酸带有不同程度的苦味，严重了影响了其在食品领域中的应用。为了使其具有良好的口味，提高在食品行业中的广泛应用，须进行脱苦处理。
目前市场上也有采用活性炭吸附、超滤、有机溶剂提取等方法，这些方法缺点是容易降低产品中的氮含量，导致产品的氨基酸组成不全，不能保留大豆蛋白的全价蛋白的优点，也有专利如cn1932027提出的一种采用碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶，分步双酶水解制备无苦味大豆肽的方法，但工艺条件复杂难以控制，易造成水解度太低或太高，使大豆肽产品苦味质量不一，难以大规模生产应用。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，通过酶的切点，将疏水性氨基酸包埋与肽链中间，以脱除肽的苦味，且工艺条件易于控制，利于降低制造成本。
本发明是通过如下的技术方案予以实现的：
一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其方法如下：
（1）调浆：取大豆分离蛋白加缓冲液调成大豆分离蛋白质量百分比含量为10~20%的浆液，调整ph值为5.0~6.5，调节浆液温度为40~50℃保温1~2h；
（2）灭菌：将经步骤（1）处理后的浆液置于微波灭菌设备中，控制微波功率为15~32kw,频率为2000~3000mhz,温度为75~95℃，进行间歇性微波灭菌处理2~3次，每次微波处理时间为3~5min，微波处理间隔时间为1~3min；
（3）调配复合蛋白酶制剂：按质量份数计取20~42份碱性蛋白酶、36~58份中性蛋白酶和12~23份木瓜蛋白酶，在160~200r/min下搅拌混合40~50min，随后加入100~120份调配水，升温至35~40℃，在120~160r/min下搅拌混合40~50min，随后降温至10~15℃，加入40~55份酸性蛋白酶和13~16份菠萝蛋白酶，在100~120r/min下搅拌混合1~2h，再在室温下保温20~30min制得复合蛋白酶制剂；
（4）加酶水解：取经步骤（2）处理后的浆液，按酶活力7000~8000u每克大豆分离蛋白加入复合蛋白酶制剂，控制水解度为10~35%，搅拌速率为120~180r/min,在45~55℃下水解3~4h，再在85~95℃中保温20~30min进行酶灭活，随后冷却至室温，得水解液；
（5）分离：取水解液在4000~6000rpm转速下离心处理20~30min，取离心上清液进行膜过滤，控制分子量为2000~4000da，得大豆肽粗品。
上述一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其中，所述大豆分离蛋白中蛋白质的质量百分比含量为93~99%。
上述一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其中，所述缓冲液由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠溶液按质量比9：11：35混合而成，所述氯化钠溶液中氯化钠的质量百分比含量为15~20%。
上述一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其中，优选地，所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比为：21:37:18。
上述一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其中，所述调配水每升中含有锂：0.2~0.3mg,锌：0.3~0.4mg,钙：0.08~0.1mg,锶：0.05~0.08mg，硒：0.05~0.08mg，锰：0.01~0.03mg,偏硅酸：0.01~0.03mg。
上述一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其中，优选地，所述酸性蛋白酶和菠萝蛋白酶的质量比为：43：14。
本发明的有益效果为：
本发明采用新型复合蛋白酶水解大豆分离蛋白，在最佳配伍下通过酶的切点，将疏水性氨基酸包埋与肽链中间而不是两端，通过控制蛋白的水解程度，同时控制肽的分子量，肽的苦味与其自身的相对分子质量质检呈现非线性关系，在一定分子量范围内，随着相对分子量的下降苦味会呈现上升的趋势，当分子量进一步下降时，多肽的苦味也会下降，从而脱除大豆肽的苦味，且工艺操作条件易于控制，适宜大规模生产，水解产物均一性很好，使其利于进行进一步分离钝化等深加工，在后续加工中具有良好的口味，通过在复合蛋白酶制剂制备过程中加入含有锂、锌、硒等微量元素的调配水，利于提高营养价值，提高在食品行业中的广泛应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步说明。
所述大豆分离蛋白购自于临沂山松生物制品有限公司，碱性蛋白酶、中性蛋白酶购自于郑州君凯化工产品有限公司。
实施例1
一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其方法如下：
（1）调浆：取大豆分离蛋白加缓冲液调成大豆分离蛋白质量百分比含量为15%的浆液，所述大豆分离蛋白中蛋白质的质量百分比含量为95%，缓冲液由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠溶液按质量比9：11：35混合而成，所述氯化钠溶液中氯化钠的质量百分比含量为16%，加入盐酸调整ph值为5.5，调节浆液温度为45℃保温1.5h；
（2）灭菌：将经步骤（1）处理后的浆液置于微波灭菌设备中，控制微波功率为24kw,频率为2000mhz,温度为85℃，进行间歇性微波灭菌处理2次，每次微波处理时间为4min，微波处理间隔时间为2min；
（3）调配复合蛋白酶制剂：按质量份数计取21份碱性蛋白酶、38份中性蛋白酶和18份木瓜蛋白酶，在180r/min下搅拌混合45min，随后加入110份调配水，所述调配水每升中含有锂：0.25mg,锌：0.3mg,钙：0.09mg,锶：0.05mg，硒：0.05mg，锰：0.02mg,偏硅酸：0.03mg，升温至40℃，在150r/min下搅拌混合40min，随后降温至14℃，加入43份酸性蛋白酶和14份菠萝蛋白酶，在110r/min下搅拌混合2h，再在室温下保温20min制得复合蛋白酶制剂；
（4）加酶水解：取经步骤（2）处理后的浆液，按酶活力7500u每克大豆分离蛋白加入复合蛋白酶制剂，控制水解度为25%，搅拌速率为150r/min,在50℃下水解3h，再在90℃中保温25min进行酶灭活，随后冷却至室温，得水解液；
（5）分离：取水解液在5000rpm转速下离心处理30min，取离心上清液进行膜过滤，控制分子量为2000~4000da，得大豆肽粗品。
实施例2
一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其方法如下：
（1）调浆：取大豆分离蛋白加缓冲液调成大豆分离蛋白质量百分比含量为13%的浆液，所述大豆分离蛋白中蛋白质的质量百分比含量为93%，缓冲液由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠溶液按质量比9：11：35混合而成，所述氯化钠溶液中氯化钠的质量百分比含量为18%，加入盐酸调整ph值为6.2，调节浆液温度为40℃保温1h；
（2）灭菌：将经步骤（1）处理后的浆液置于微波灭菌设备中，控制微波功率为28kw,频率为3000mhz,温度为78℃，进行间歇性微波灭菌处理3次，每次微波处理时间为3min，微波处理间隔时间为1min；
（3）调配复合蛋白酶制剂：按质量份数计取35份碱性蛋白酶、52份中性蛋白酶和17份木瓜蛋白酶，在190r/min下搅拌混合40min，随后加入115份调配水，所述调配水每升中含有锂：0.3mg,锌：0.4mg,钙：0.09mg,锶：0.08mg，硒：0.08mg，锰：0.02mg,偏硅酸：0.03mg，升温至39℃，在140r/min下搅拌混合50min，随后降温至14℃，加入40份酸性蛋白酶和15份菠萝蛋白酶，在105r/min下搅拌混合2h，再在室温下保温25min制得复合蛋白酶制剂；
（4）加酶水解：取经步骤（2）处理后的浆液，按酶活力8000u每克大豆分离蛋白加入复合蛋白酶制剂，控制水解度为30%，搅拌速率为170r/min,在50℃下水解3.5h，再在92℃中保温23min进行酶灭活，随后冷却至室温，得水解液；
（5）分离：取水解液在6000rpm转速下离心处理23min，取离心上清液进行膜过滤，控制分子量为2000~4000da，得大豆肽粗品。
实施例3
一种采用复合蛋白酶脱除大豆肽苦味的方法，其方法如下：
（1）调浆：取大豆分离蛋白加缓冲液调成大豆分离蛋白质量百分比含量为18%的浆液，所述大豆分离蛋白中蛋白质的质量百分比含量为96%，缓冲液由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠溶液按质量比9：11：35混合而成，所述氯化钠溶液中氯化钠的质量百分比含量为15%，加入盐酸调整ph值为5.7，调节浆液温度为48℃保温1.5h；
（2）灭菌：将经步骤（1）处理后的浆液置于微波灭菌设备中，控制微波功率为16kw,频率为2500mhz,温度为85℃，进行间歇性微波灭菌处理2次，每次微波处理时间为5min，微波处理间隔时间为2min；
（3）调配复合蛋白酶制剂：按质量份数计取40份碱性蛋白酶、40份中性蛋白酶和20份木瓜蛋白酶，在180r/min下搅拌混合45min，随后加入120份调配水，所述调配水每升中含有锂：0.3mg,锌：0.3mg,钙：0.08mg,锶：0.06mg，硒：0.08mg，锰：0.02mg,偏硅酸：0.03mg，升温至38℃，在150r/min下搅拌混合42min，随后降温至14℃，加入42份酸性蛋白酶和15份菠萝蛋白酶，在110r/min下搅拌混合1h，再在室温下保温25min制得复合蛋白酶制剂；
（4）加酶水解：取经步骤（2）处理后的浆液，按酶活力7000u每克大豆分离蛋白加入复合蛋白酶制剂，控制水解度为20%，搅拌速率为130r/min,在50℃下水解3h，再在90℃中保温20min进行酶灭活，随后冷却至室温，得水解液；
（5）分离：取水解液在6000rpm转速下离心处理20min，取离心上清液进行膜过滤，控制分子量为2000~4000da，得大豆肽粗品。
取苦味物质奎宁作为参照物，稀释成0%、0.2%、0.3%、0.4%和0.5%不同浓度的稀释液，苦味依次增强，对应苦味值0、1、2、3、4、5；取上述实施例1-3制得的大豆肽粗品，由20人品尝测定苦味值，取苦味值平均值，结果如下：实施例1:0.13，实施例2：0.25，实施例3:0.17，由此可见本发明可有效脱除大豆肽苦味，且富含微量元素，具有较高的食用价值。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。