本发明属于蛋白质改性技术领域，具体涉及一种改善甜杏仁分离蛋白质功能特性的方法。
背景技术：
甜杏仁是蔷薇科杏的种子，根据其甜杏仁苷的含量不同而被划分为甜杏仁和苦杏仁。甜杏仁营养价值很高，主要含有蛋白质、脂肪、糖类、微量苦杏仁苷、胡萝卜素、b族维生素、维生素c、维生素p以及钙、磷、铁等营养成分,是开发利用药食兼用植物非常好的资源。其中胡萝卜素的含量在果品中仅次于芒果，人们将其称为抗癌之果。脂肪的组成成分中主要是油酸和亚油酸。甜杏仁中的蛋白质氨基酸组成合理，是优质植物蛋白的来源。从甜杏仁中提取蛋白质，经干燥制成蛋白粉，可以作为食品营养强化剂及食品添加剂。相关资料记载，干杏仁含水量约5%，蛋白质22.5%，脂肪44.8%，糖类23.8%，膳食纤维8%。甜杏仁是一种健康食品，适量食用不仅可以有效控制人体内胆固醇的含量，还能显著降低心脏病和多种慢性病的发病危险。因此，加大力度开发疗效性、保健型甜杏仁食品前景广阔。
我国甜杏仁产量很大，但是利用甜杏仁的深加工还未受到重视，甜杏仁产品仍然以甜杏仁油、甜杏仁露及甜杏仁罐头为主。甜杏仁中的蛋白质不仅是很好的营养来源，也是药食兼用的蛋白质，利用甜杏仁提取的蛋白质可以缓解蛋白质的资源短缺。而且我们一般使用传统的碱溶酸沉法提取甜杏仁蛋白质，该方法操作简单、方便,但是甜杏仁中蛋白的溶解性、起泡性、乳化能力等蛋白质的功能特性较差，可见，仅采用传统的碱溶酸沉方法很难以得到高品质的甜杏仁蛋白质。
技术实现要素：
本发明目的在于针对现有技术存在的问题与缺点，提供了一种改善甜杏仁分离蛋白部分功能特性的方法，以提高甜杏仁的加工效率及加工品质。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种改善甜杏仁分离蛋白质功能特性的方法，包括如下步骤：
1）将甜杏仁清洗后去除表面浮尘，用20℃水浸泡24h后去皮；
2）去皮甜杏仁低温烘干后粉碎，获得全脂甜杏仁粉；采用石油醚浸泡全脂甜杏仁粉进行脱脂，甜杏仁粉脱脂后真空干燥，获取脱脂甜杏仁粉；
3）脱脂甜杏仁粉采用碱溶酸沉方法获得甜杏仁分离蛋白，水洗，干燥；
4）将步骤3）得到的甜杏仁分离蛋白溶解于磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的甜杏仁分离蛋白溶液，置于超声波下进行处理，冷冻干燥，得到改性甜杏仁分离蛋白质。
所述步骤4）的超声波处理工艺，将所述甜杏仁分离蛋白溶液，控制蛋白质溶液温度40~50℃，置于200~600w超声波功率下处理15~30min。
所述步骤4）的超声波处理工艺，将所述甜杏仁分离蛋白溶解于磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的甜杏仁分离蛋白溶液，置于400w超声波功率下处理30min，控制蛋白质溶液温度45℃，可提高甜杏仁分离蛋白的溶解性。
所述步骤4）的超声波处理工艺，将所述甜杏仁分离蛋白溶解于磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的甜杏仁分离蛋白溶液，置于400w超声波功率下处理15min，控制蛋白质溶液温度50℃，可改善甜杏仁分离蛋白起泡性及泡沫稳定性。
所述步骤4）的超声波处理工艺，将所述甜杏仁分离蛋白溶解于磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的甜杏仁分离蛋白溶液，置于600w超声波功率下处理30min，控制蛋白质溶液温度50℃，改善甜杏仁分离蛋白乳化性；
所述步骤4）的超声波处理工艺，将所述甜杏仁分离蛋白溶解于磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的甜杏仁分离蛋白溶液，置于200w超声波功率下处理30min，控制蛋白质溶液温度50℃，可提高甜杏仁分离蛋白乳化稳定性。
所述步骤4）的超声波处理工艺，将所述甜杏仁分离蛋白溶解于磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的甜杏仁分离蛋白溶液，置于600w超声波功率下处理15min，控制蛋白质溶液温度40℃，可提高甜杏仁分离蛋白抗氧化巯基基团的含量。
所述步骤1）中的去皮甜杏仁低温烘干方法，还包括以下步骤：去皮甜杏仁于50℃低温鼓风烘干。
所述步骤2）中的石油醚脱脂方法，还包括以下步骤：石油醚浸泡全脂甜杏仁粉24h，料液比为1:10g/ml。
所述步骤3）中的碱溶酸沉方法，还包括以下步骤：用0.5mol/l的naoh充分溶解脱脂甜杏仁粉，获取上清液；用0.5mol/lhcl调节上清液ph至4.5；采用真空抽滤，将所得沉淀用蒸馏水洗至中性，真空冷冻干燥得甜杏仁分离蛋白。
本发明的有益效果体现在：
本发明提出一种改善甜杏仁分离蛋白部分功能特性的方法，与传统工艺比较，本发明通过超声波处理蛋白质溶液，改善了蛋白质的部分功能特性；本发明操作简单，无污染，能耗低，易于处理，有利于节能、环保，符合可持续发展原则。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但是本发明不局限于以下实施例。
实施例1
取10g甜杏仁清洗后去除表面浮尘，用20℃水浸泡24h后去皮；去皮甜杏仁50℃下低温鼓风烘干后粉碎，获得全脂甜杏仁粉；采用石油醚浸泡全脂甜杏仁粉24h进行脱脂，全脂甜杏仁粉与石油醚料液比为1:10g/ml；甜杏仁粉脱脂后真空干燥，获取脱脂甜杏仁粉；脱脂甜杏仁粉用0.5mol/l的naoh充分溶解,所得上清液用0.5mol/l的hcl调节至甜杏仁蛋白等电点pi4.5，真空抽滤得沉淀，蒸馏水洗至中性，真空冷冻干燥得甜杏仁分离蛋白；取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白，置于400w超声波功率下处理30min，控制蛋白质溶液温度45℃，甜杏仁分离蛋白的溶解性得到改善。冷冻干燥，得到改性甜杏仁分离蛋白质。
实施例2
取10g甜杏仁清洗后去除表面浮尘，用20℃水浸泡24h后去皮；去皮甜杏仁50℃下低温鼓风烘干后粉碎，获得全脂甜杏仁粉；采用石油醚浸泡全脂甜杏仁粉24h进行脱脂，全脂甜杏仁粉与石油醚料液比为1:10g/ml；甜杏仁粉脱脂后真空干燥，获取脱脂甜杏仁粉；脱脂甜杏仁粉用0.5mol/l的naoh充分溶解,所得上清液用0.5mol/l的hcl调节至甜杏仁蛋白等电点pi4.5，真空抽滤得沉淀，蒸馏水洗至中性，真空冷冻干燥得甜杏仁分离蛋白；取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白，置于400w超声波功率下处理15min，控制蛋白质溶液温度50℃，可改善甜杏仁分离蛋白起泡性及泡沫稳定性。冷冻干燥，得到改性甜杏仁分离蛋白质。
实施例3
取10g甜杏仁清洗后去除表面浮尘，用20℃水浸泡24h后去皮；去皮甜杏仁50℃下低温鼓风烘干后粉碎，获得全脂甜杏仁粉；采用石油醚浸泡全脂甜杏仁粉24h进行脱脂，全脂甜杏仁粉与石油醚料液比为1:10g/ml；甜杏仁粉脱脂后真空干燥，获取脱脂甜杏仁粉；脱脂甜杏仁粉用0.5mol/l的naoh充分溶解,所得上清液用0.5mol/l的hcl调节至甜杏仁蛋白等电点pi4.5，真空抽滤得沉淀，蒸馏水洗至中性，真空冷冻干燥得甜杏仁分离蛋白；取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白，置于600w超声波功率下处理30min，控制蛋白质溶液温度50℃，超声处理后，甜杏仁分离蛋白乳化性提高；
实施例4
取10g甜杏仁清洗后去除表面浮尘，用20℃水浸泡24h后去皮；去皮甜杏仁50℃下低温鼓风烘干后粉碎，获得全脂甜杏仁粉；采用石油醚浸泡全脂甜杏仁粉24h进行脱脂，全脂甜杏仁粉与石油醚料液比为1:10g/ml；甜杏仁粉脱脂后真空干燥，获取脱脂甜杏仁粉；脱脂甜杏仁粉用0.5mol/l的naoh充分溶解,所得上清液用0.5mol/l的hcl调节至甜杏仁蛋白等电点pi4.5，真空抽滤得沉淀，蒸馏水洗至中性，真空冷冻干燥得甜杏仁分离蛋白；取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白，置于200w超声波功率下处理30min，控制蛋白质溶液温度50℃，甜杏仁分离蛋白乳化稳定性获得提高。冷冻干燥，得到改性甜杏仁分离蛋白质。
实施例5
取10g甜杏仁清洗后去除表面浮尘，用20℃水浸泡24h后去皮；去皮甜杏仁50℃下低温鼓风烘干后粉碎，获得全脂甜杏仁粉；采用石油醚浸泡全脂甜杏仁粉24h进行脱脂，全脂甜杏仁粉与石油醚料液比为1:10g/ml；甜杏仁粉脱脂后真空干燥，获取脱脂甜杏仁粉；脱脂甜杏仁粉用0.5mol/l的naoh充分溶解,所得上清液用0.5mol/l的hcl调节至甜杏仁蛋白等电点pi4.5，真空抽滤得沉淀，蒸馏水洗至中性，真空冷冻干燥得甜杏仁分离蛋白；取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白，置于600w超声波功率下处理15min，控制蛋白质溶液温度40℃，甜杏仁分离蛋白抗氧化巯基基团的含量获得提高。冷冻干燥，得到改性甜杏仁分离蛋白质。
实施例6
改性杏仁分离蛋白功性能测试
按实施例1~5方法，采用不同的处理工艺，针对不同性能，对甜杏仁进行处理，并将处理后的改性甜杏仁分离蛋白质与未处理的甜杏仁分别按照下面陈述的方法测试其溶解性、起泡性、起泡稳定性、乳化性、乳化稳定性以及巯基含量，所得结果如表1所示，表1为超声处理前后甜杏仁分离蛋白功能特性对比试验结果。
由表1可见，在经过超声处理后的甜杏仁分离蛋白溶液，蛋白质的溶解性、乳化性、乳化稳定性、起泡性、起泡稳定性、巯基含量等功能特性有明显改善。
溶解性、起泡性、起泡稳定性、乳化性、乳化稳定性以及巯基含量测定方法如下：
(1)甜杏仁分离蛋白溶解度测定方法
取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白溶液；杏仁分离蛋白溶液进行超声处理，并与未处理的杏仁分离蛋白溶液为对照，于转速5000r/min的条件下离心10min，取各上清液稀释100倍，以考马斯亮蓝法测定上清液的蛋白含量。按公式（1）计算蛋白质溶解度：
（2）甜杏仁分离蛋白起泡性及起泡稳定性的测定方法
取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白。取50ml超声处理后的杏仁分离蛋白质溶液，并以未超声处理的杏仁分离蛋白溶液为对照，高速组织捣碎机中以10000r/min均质2min，快速记录均质停止时泡沫的体积，根据下列公式（2）计算杏仁蛋白的起泡性。在室温条件下，记录均质停止30min后泡沫体积，根据下列公式（3）计算杏仁蛋白的起泡稳定性。
（3）甜杏仁分离蛋白乳化性及乳化稳定性测定方法
取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白；取6ml的大豆油加入到30ml超声处理后的杏仁分离蛋白质溶液中，并以未超声处理的样品为对照，高速均质机以10000r/min均质1min，形成均匀的乳液。在均质后的0min和10min分别移取200μl的乳液，用0.1%十二烷基磺酸钠（w/v）定容至25ml，用分光光度计在500nm处测定吸光值。蛋白质的乳化性(ec)及乳化稳定性(esi)算公式如下：
式中:n为稀释倍数125；
t=2.303；
c为蛋白质溶液的浓度；
a0为0min时在500nm处的吸光值；
a10为10min时在500nm处的吸光值;
∆t为时间间隔10min；
l为比色皿光径。
（4）甜杏仁分离蛋白巯基含量的测定方法
取1g甜杏仁分离蛋白，将其溶解于200ml的磷酸缓冲溶液（ph7.0，10mmol/l）中，配制成5g/l的杏仁分离蛋白溶液；杏仁分离蛋白溶液进行超声处理后冷冻干燥。将0.2g超声处理的杏仁分离蛋白溶解于100ml缓冲液（0.086m三羟甲基氨基甲烷，0.09m谷氨酸，4mm乙二胺四乙酸，ph7.0）中,配制成浓度为0.2g/l蛋白质溶液，以未超声处理蛋白质为对照，将蛋白质溶液在25℃下在振荡水浴1h，然后用高速离心机以10000r/min离心10min。取上清液3ml加入0.03mlellman试剂溶液（即4mg/ml的5,5－二硫二硝基苯甲酸缓冲液）。将溶液迅速混混匀，在20℃静置15min后，在412nm测定吸光度，计算公式为（6）：
式中：ε为摩尔消光系数1.36×104m-1cm-1
c为所求巯基浓度μmol/g。